动物营养学报 >

2023 , Vol. 35 >Issue 3: 1540 - 1551

DOI: https://doi.org/10.12418/CJAN2023.146

研究论文

四逆散加葛根混合物对产蛋后期蛋鸡肝脏脂质代谢和氧化还原状态的影响

  • 慈文佳 ,
  • 陈欣 ,
  • 蒋梦琪 ,
  • 朱建津 , *
展开
  • 江南大学食品学院,无锡 214122
*朱建津,副教授,硕士生导师,E-mail:

慈文佳(1998—),女,山东青岛人,硕士研究生,研究方向为营养与功能因子。E-mail:

收稿日期: 2022-09-14

  网络出版日期: 2023-03-16

收起

Effects of Sini Powder with Pueraria Mixture on Liver Lipid Metabolism and Redox Status of Late-Phase Laying Hens

  • CI Wenjia ,
  • CHEN Xin ,
  • JIANG Mengqi ,
  • ZHU Jianjin , *
Expand
  • College of Food Science and Technology, Jiangnan University, Wuxi 214122, China
*associate professor, E-mail:

Received date: 2022-09-14

  Online published: 2023-03-16

Fold

摘要

本试验旨在研究四逆散加葛根混合物对产蛋后期蛋鸡肝脏脂质代谢和氧化还原状态的影响。选择240羽400日龄的海兰褐蛋鸡,随机分为4组,每组6个重复,每个重复10羽。对照组(CON组)饲喂基础饲粮,试验组在基础饲粮的基础上分别添加1(SP1组)、2(SP2组)、3 g/kg(SP3组)四逆散加葛根混合物。试验期30 d。结果表明:1)与CON组相比,SP3组的产蛋率极显著升高(P<0.01),SP1和SP3组的平均蛋重显著降低(P<0.05),SP1、SP2和SP3组的腹脂率显著降低(P<0.05),SP2和SP3组的肝脏指数显著或极显著降低(P<0.05或P<0.01),SP1和SP3组的脾脏指数显著升高(P<0.05)。2)与CON组相比,SP1、SP2和SP3组的肝脏活性氧自由基(ROS)和丙二醛(MDA)含量极显著降低(P<0.01),SP3组的肝脏总抗氧化能力(T-AOC)和超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性极显著升高(P<0.01)。3)与CON组相比,SP1、SP2和SP3组的肝脏甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量显著或极显著降低(P<0.05或P<0.01),SP3组的肝脏总胆固醇(TC)含量极显著降低(P<0.01),SP1和SP3组的肝脏高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01),SP1和SP2组的肝脏游离脂肪酸(FFA)含量显著降低(P<0.05)。4)与CON组相比,SP2和SP3组的肝脏肝X受体α(LXRα)、固醇调节原件结合蛋白1(SREBP1)和乙酰辅酶A羧化酶(ACACA)mRNA相对表达量显著或极显著降低(P<0.05或P<0.01),SP3组的肝脏过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)、酰基辅酶A氧化酶1(ACOX1)和肉碱酰基转移酶1A(CPT1A)mRNA相对表达量显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01)。综上所述,四逆散加葛根混合物可能通过改善产蛋后期蛋鸡肝脏氧化还原状态,抑制肝脏脂肪合成,促进肝脏脂肪分解,从而减少蛋鸡肝脏脂肪堆积,改善脂质代谢。

关键词： 四逆散; 葛根; 肝脏; 脂质代谢; 氧化还原状态

本文引用格式

慈文佳 , 陈欣 , 蒋梦琪 , 朱建津 . 四逆散加葛根混合物对产蛋后期蛋鸡肝脏脂质代谢和氧化还原状态的影响[J]. 动物营养学报, 2023 , 35(3) : 1540 -1551 . DOI: 10.12418/CJAN2023.146

Abstract

This study was aimed to investigate the effects of Sini powder with Pueraria mixture on liver lipid metabolism and redox status of late-phase laying hens. Two hundred and forty 400-day-old Hy-Line brown laying hens were randomly divided into 4 groups with 6 replicates per group and 10 hens per replicate. Hens in the control group (CON group) were fed a basal diet, and others in experimental group were fed basal diets supplemented with 1 (SP1 group), 2 (SP2 group) and 3 g/kg (SP3 group) Sini powder with Pueraria mixture, respectively. The experiment lasted for 30 days. The results showed as follows: 1) compared with the CON group, the egg laying rate of SP3 group was significantly increased (P<0.01), the average egg weight of SP1 and SP3 groups was significantly decreased (P<0.05), the abdominal fat rate of SP1, SP2 and SP3 groups was significantly decreased (P<0.05), the liver index of SP2 and SP3 groups was significantly decreased (P<0.05 or P<0.01), and the spleen index of SP1 and SP3 groups was significantly increased (P<0.05). 2) Compared with the CON group, the contents of reactive oxygen species (ROS) and malondialdehyde (MDA) in liver of SP1, SP2 and SP3 groups were significantly decreased (P<0.01), and the total antioxidant capacity and activities of superoxide dismutase (SOD) and glutathione peroxidase (GSH-Px) in liver of SP3 group were significantly increased (P<0.01). 3) Compared with the CON group, the contents of triglyceride (TG) and low density lipoprotein-cholesterol (LDL-C) in liver of SP1, SP2 and SP3 groups were significantly decreased (P<0.05 or P<0.01), the liver total cholesterol (TC) content of SP3 group was significantly decreased (P<0.01), the liver high density lipoprotein-cholesterol (HDL-C) of SP1 and SP3 groups was significantly increased (P<0.05 or P<0.01), and the liver free fatty acid (FFA) content of SP1 and SP2 groups was significantly decreased (P<0.05). 4) Compared with the CON group, the mRNA relative expression levels of liver X receptor alpha (LXRα), sterol regulatory element-binding protein 1 (SREBP1) and acetyl CoA carboxylase (ACACA) in liver of SP2 and SP3 groups were significantly decreased (P<0.05 or P<0.01), and the mRNA relative expression levels of peroxisome proliferator activated receptor alpha (PPARα), acyl-CoA oxidase1 (ACOX1) and carnitine palmity1 transferase 1A (CPT1A) in liver of S3 groups were significantly increased (P<0.05 or P<0.01). In conclusion, the Sini powder with Pueraria mixture can decrease the liver fat accumulation and improve lipid metabolism by improving liver redox status, inhibiting liver fat synthesis and promoting liver fat decomposition of late-phase laying hens.

Key words： Sini powder; Pueraria; liver; lipid metabolism; redox status

近年来,随着物质生活水平的不断提高,我国居民的高脂饮食结构和久坐少动的生活方式等因素使得非酒精性脂肪肝病(NAFLD)的发生率逐年增加[1]。预计在20年内,NAFLD将成为肝脏疾病死亡率上升的重要原因[2]。大量研究表明,肝脏脂质代谢紊乱是驱动NAFLD从脂肪变性演变到纤维化的主要因素[3],与糖尿病、高脂血症、动脉粥样硬化等疾病也密切相关[4]。脂质代谢紊乱通常还伴随着氧化应激,二者之间的相互作用也会加快NAFLD的演变过程。已有研究证实[5⇓-7],在饮食中补充具有抗氧化活性的物质,可以通过改善机体的氧化还原状态调节脂质代谢。
四逆散是由柴胡、枳实、甘草、白芍4种中药组成的复方制剂,已被证实具有抗抑郁[8]、抗炎[9]、保肝[10]和调节胃肠道[11]等作用。过去的研究发现,四逆散及其各单味中药的成分均有抗氧化和调节脂质代谢的作用[12⇓-14]。刘海霞[15]研究发现,四逆散和其代表性成分芍药苷不仅可以改善由过氧化氢诱导的氧化损伤细胞模型,还对游离脂肪酸(FFA)诱导的NAFLD细胞模型有较为明显的治疗效果。葛根是豆科植物野葛的干燥根,富含异黄酮类、三萜及三萜皂苷类、香豆素类、生物碱、葛根多糖等多种活性成分[16]。研究发现,葛根素可以通过抑制氧化应激和炎症减轻镉诱导的小鼠肝脏脂质代谢紊乱[5]。
虽然近年来四逆散和葛根在脂质代谢方面的研究均比较多,但目前很少有研究将四逆散和葛根联用探究其对脂质代谢的作用,且二者发挥作用的具体机制还缺乏深入研究。产蛋后期蛋鸡的脂质代谢过程与哺乳动物不同,肝脏在脂质代谢中占据主导地位,造成脂肪极易在肝脏堆积,呈现出较为严重的脂质代谢紊乱和脂肪肝。因此,本试验以产蛋后期蛋鸡为试验动物模型,研究四逆散加葛根混合物对产蛋后期蛋鸡肝脏脂质代谢和氧化还原状态的影响,为四逆散和葛根功能的开发和利用提供试验依据和理论支持。

1 材料与方法

1.1 试验动物与材料

试验动物:240羽400日龄的海兰褐蛋鸡,由南京康德权蛋鸡养殖基地提供。
试验材料:四逆散加葛根混合物,由无锡某科技有限公司提供,主要成分包括柴胡、芍药、甘草、枳实、葛根,各成分比例为1:1:1:1:1。

1.2 试验仪器与设备

蛋品质指标的测定使用EA-01多功能蛋品质分析仪(以色列ORKA公司);四逆散加葛根混合物的成分测定使用超声波清洗机、Waters2695型高效液相色谱仪(美国沃特世公司);肝脏组织切片的制作和观察使用封闭脱水机、全自动包埋机、石蜡组织切片机(美国徕卡公司)和倒置相差显微镜(日本Olympus公司);肝脏抗氧化和脂质代谢相关指标的测定使用GHP-9050N型隔水式培养箱(上海一恒科学仪器有限公司)、48T匀浆机(宁波新芝生物科技股份有限公司)、5804R冷冻离心机(美国Thermo Scientific公司)、M5酶标仪(美国Molecular Devices公司);肝脏RNA逆转录和PCR使用ETC-811 PCR扩增仪(东胜兴业科学仪器有限公司)、实时荧光定量PCR仪(美国Bio-Rad公司)。

1.3 试验设计和饲养管理

选择240羽400日龄的海兰褐蛋鸡,以常规饲料适应性饲喂1周后,随机分为4组,每组6个重复,每个重复10羽。对照组(CON组)饲喂基础饲粮,试验组在基础饲粮的基础上分别添加1(SP1组)、2(SP2组)、3 g/kg(SP3组)四逆散加葛根混合物。试验期30 d。基础饲粮配制参考NRC(1994),其组成及营养水平见表1。鸡舍环境温度23 ℃左右,每天光照时长16 h。所有试验鸡均自由采食和饮水。
表1 基础饲粮组成及营养水平(风干基础)

Table 1 Composition and nutrients levels of the basal diet (air-dry basis)%

原料
Ingredients		 含量
Content		 营养水平
Nutrient levels2)		 含量
Content
玉米 Corn 62.00 代谢能 ME/(MJ/kg) 11.02
豆粕 Soybean meal 25.00 粗蛋白质 CP 16.85
磷酸氢钙 CaHPO4 1.00 钙 Ca 3.20
石粉 Limestone 8.00 有效磷 AP 0.35
预混料 Premix1) 4.00 赖氨酸 Lys 0.85
合计 Total 100.00 蛋氨酸+半胱氨酸 Met+Cys 0.63

1)预混料为每千克饲粮提供 The premix provided the following per kg of the diet:Fe 66.5 mg,Zn 88 mg,Mn 110 mg,I 0.7 mg,Se 0.288 mg,Cu 8.8 mg,VA 1 000 IU,VB1 3 mg,VB2 9 mg,VB6 9 mg,VB12 0.025 mg,VD3 3 500 IU,VE 30 mg,VK3 5 mg,胆碱 choline 800 mg,尼克酸 nicotinic acid 45 mg,叶酸 folic acid 1.2 mg。

2)计算值 Calculated values。

1.4 样品采集和指标检测

1.4.1 四逆散加葛根混合物提取液的制备及成分检测

取柴胡、芍药、甘草、枳实、葛根各2 mg于10 mL容量瓶中,用70%甲醇定容后,超声处理30 min,溶液经13 000 r/min离心10 min,取上清液。
对四逆散加葛根混合物提取液的活性成分进行测定。参照Xiang等[17]描述的方法,以芦丁作为标准品,通过NaNO2-Al(NO3)3-NaOH比色法测定和计算提取液总黄酮含量,结果按芦丁当量/g表示;参照刘瑞等[18]描述的方法,以人参皂苷作为标准品,通过C8H8O3-H2SO4比色法测定和计算提取液总皂苷含量,结果按人参皂苷当量/g表示;参照马颖等[19]描述的方法,通过高效液相色谱法-二极管矩阵检测器(HPLC-PDA)对提取液葛根素含量进行测定。最终得出提取液总黄酮、总皂苷和葛根素含量依次为11.2 mg芦丁当量/g、53.0 mg人参皂苷当量/g和5.5 mg/g。

1.4.2 生产性能及蛋品质的测定

试验期间每天记录各组蛋鸡产蛋数、总蛋重,计算产蛋率和平均蛋重。试验结束,每组随机挑选10枚鸡蛋,参考Feng等[20]的方法检测蛋品质。

1.4.3 组织样品的收集

试验结束,每组随机挑选10羽蛋鸡,禁食12 h后称重屠宰。冰浴条件下迅速摘取腹脂、肝脏、脾脏、心脏,并称重,腹脂率和脏器指数分别按以下公式计算:
腹脂率(%)=100×腹脂重量/蛋鸡体重;
脏器指数(%)=100×脏器重量/蛋鸡体重。
肝脏称重后取3份0.1 g组织分别放入0.9 mL生理盐水、4%多聚甲醛固定液和RNA冷冻组织保存液中,并于-80 ℃保存备测。

1.4.4 肝脏抗氧化指标的测定

采用luminol化学发光法测定肝脏活性氧自由基(ROS)含量,用Origin 9.1对峰面积进行计算,单位体积下相对发光强度为ROS含量。按照试剂盒说明书对肝脏超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量及总抗氧化能力(T-AOC)进行测定,试剂盒购自于南京建成生物工程研究所。

1.4.5 肝脏组织切片观察

肝脏组织苏木精-伊红(HE)切片制作和染色方法参考任昊艺[21]的方法。

1.4.6 肝脏脂质含量的测定

按照试剂盒说明书对肝脏总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、FFA含量进行测定,试剂盒购自于南京建成生物工程研究所。

1.4.7 肝脏脂质代谢相关基因表达的测定

按照RNA提取试剂盒说明书提取肝脏总RNA,按照逆转录试剂盒说明书将提取的RNA转录成cDNA,实时荧光定量PCR测定脂肪酸合成酶(FASN)、乙酰辅酶A羧化酶(ACACA)、固醇调节原件结合蛋白1(SREBP1)、肝X受体α(LXRα)、过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)、肉碱酰基转移酶1A(CPT1A)、酰基辅酶A氧化酶1(ACOX1)的mRNA相对表达水平,以甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)为内参,引物序列见表2。试剂盒均购自于南京建成生物工程研究所,引物合成由苏州金唯智生物有限公司完成。
表2 引物序列

Table 2 Primer sequences

基因
Genes		 上游引物
Upstream primer		 下游引物
Downstream primer
甘油醛-3-磷酸脱氢酶
GAPDH		 CCCCCATGTTTGTGATGGGT GCACGATGCATTGCTGACAA
固醇调节原件结合蛋白1
SREBP1		 CTCAGCGACATCGACGACAT GCATCGAACAGCCCTGAGAA
乙酰辅酶A羧化酶α
ACACA		 AATGGCAGCTTTGGAGGTGT TTCTGTTTGGGTGGGAGGTG
脂肪酸合酶
FASN		 GGATTTGGGCTTGAGTTGGC TTAGCCTGGTAGCCAGTTCG
肝X受体α
LXRα		 GCTCCTTCCGCTGGTACTTCC CTCATCTCTGCAGCATTGTTACTG
过氧化物酶体增殖物激活受体α
PPARα		 TGCTGCGTGAAGTGAAATGAC CGGTCACTTAAACTCCTTTATGATT
酰基辅酶A氧化酶1
ACOX1		 GCACGAGGACTTGAACTTCC ATTGCCCAAGCATGTTCTTTTA
肉碱酰基转移酶1A
CPT1A		 GCTCACTACCGAGACATGGG GACCGGACGGTTTCAGTTCT

1.5 数据统计分析

采用SPSS 22.0软件进行数据分析,如果数据符合正态分布,组间差异则采用单因素方差分析(one-way ANOVA)与Tukey's HSD检验(假设方差同质性)或TamhaneT2(假设方差非同质性)定义;如果数据不符合正态分布,组间差异则采用非参数检验与Kruskal-Wallis分析。P<0.05时认为差异显著,P<0.01时认为差异极显著。所有数据均以平均值±标准差(mean±SD)表示。

2 结果

2.1 四逆散加葛根混合物对产蛋后期蛋鸡生产性能、腹脂率和脏器指数的影响

由表3可知,与CON组相比,SP3组的产蛋率极显著升高(P<0.01),SP1和SP3组的平均蛋重显著降低(P<0.05),SP1、SP2和SP3组的蛋黄颜色和哈夫单位差异不显著(P>0.05)。
表3 四逆散加葛根混合物对产蛋后期蛋鸡生产性能的影响

Table 3 Effects of Sini powder with Pueraria mixture on laying performance of late-phase laying hens

项目
Items		 组别 Groups
CON SP1 SP2 SP3
产蛋率 Egg laying rate/% 90.73±0.86 91.90±1.48 92.74±1.38 95.72±1.01**
平均蛋重 Average egg weight/g 60.79±7.34 54.79±0.39* 55.75±0.42 54.51±0.38*
蛋黄颜色 Yolk color 7.75±0.05 8.17±0.98 7.83±0.41 8.29±0.76
哈夫单位 Haugh units 65.73±10.84 78.33±5.27 84.73±2.28 89.53±3.52

*表示与对照组相比差异显著(P<0.05),**表示与对照组相比差异极显著(P<0.01)。表4同。

* mean significantly different compared with the control group (P<0.05), and ** mean significantly different compared with the control group (P<0.01). The same as Table 4.

由表4可知,与CON组相比,SP1、SP2和SP3组的腹脂率显著降低(P<0.05),SP2和SP3组的肝脏指数显著或极显著降低(P<0.05或P<0.01),SP1和SP3组的脾脏指数显著升高(P<0.05),SP1、SP2和SP3组的心脏指数差异不显著(P>0.05)。
表4 四逆散加葛根混合物对产蛋后期蛋鸡腹脂率和脏器指数的影响

Table 4 Effects of Sini powder with Pueraria mixture on abdominal fat rate and organ indexes of late-phase laying hens%

项目
Items		 组别 Groups
CON SP1 SP2 SP3
腹脂率 Abdominal fat rate 5.63±1.00 4.44±0.88* 4.33±1.99* 4.21±1.07*
肝脏指数 Liver index 1.68±0.16 1.54±0.19 1.25±0.14** 1.48±0.17*
脾脏指数 Spleen index 0.09±0.01 0.11±0.02* 0.09±0.02 0.10±0.02*
心脏指数 Cardiac index 0.32±0.04 0.34±0.05 0.34±0.07 0.37±0.06

2.2 四逆散加葛根混合物对产蛋后期蛋鸡肝脏组织形态的影响

如图1和图2所示,对各组经HE染色的肝脏石蜡切片进行镜检后发现,CON组的蛋鸡肝脏组织出现严重的脂肪变性,肝细胞形态异常,细胞质内出现大面积的脂肪空泡,并伴有炎症细胞浸润。而SP1、SP2和SP3组的肝脏组织脂肪变性程度有不同程度的减轻,胞内脂肪空泡的数量和面积有所减少。
图1 四逆散加葛根混合物对产蛋后期蛋鸡肝脏组织形态的影响

Fig.1 Effects of Sini powder with Pueraria mixture on liver histopathology of late-phase laying hens (100×)

图2 四逆散加葛根对产蛋后期蛋鸡肝脏组织形态的影响

Fig.2 Effects of Sini powder with Pueraria mixture on liver histopathology of late-phase laying hens (400×)

2.3 四逆散加葛根混合物对产蛋后期蛋鸡肝脏抗氧化指标的影响

如图3所示,与CON组相比,SP1、SP2和SP3组的肝脏ROS和MDA含量极显著降低(P<0.01),SP3组的肝脏T-AOC和SOD、GSH-Px活性极显著升高(P<0.01),SP1、SP2和SP3组的肝脏CAT活性差异不显著(P>0.05)。
图3 四逆散加葛根混合物对产蛋后期蛋鸡肝脏抗氧化指标的影响

*表示与对照组相比差异显著(P<0.05),**表示与对照组相比差异极显著(P<0.01)。下图同。

Fig.3 Effects of Sini powder with Pueraria mixture on liver antioxidant indexes of late-phase laying hens

* mean significantly different compared with the control group (P<0.05), and ** mean significantly different compared with the control group (P<0.01). The same as below.

2.4 四逆散加葛根混合物对产蛋后期蛋鸡肝脏脂质含量的影响

如图4所示,与CON组相比,SP1、SP2和SP3组的肝脏TG和LDL-C含量显著或极显著降低(P<0.05或P<0.01),SP3组的肝脏TC含量极显著降低(P<0.01),SP1和SP3组的肝脏HDL-C含量显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01),SP1和SP2组的肝脏FFA含量显著降低(P<0.05)。
图4 四逆散加葛根混合物对产蛋后期蛋鸡肝脏脂质含量的影响

Fig.4 Effects of Sini powder with Pueraria mixture on liver lipid contents of late-phase laying hens

2.5 四逆散加葛根混合物对产蛋后期蛋鸡肝脏脂质代谢相关基因表达的影响

如图5所示,与CON组相比,SP1、SP2和SP3组的肝脏LXRα和SREBP1 mRNA相对表达量显著或极显著降低(P<0.05或P<0.01),SP2和SP3组的肝脏ACACA mRNA相对表达量显著或极显著降低(P<0.05或P<0.01),SP1、SP2和SP3组的肝脏FASN mRNA相对表达量差异不显著(P>0.05)。
图5 四逆散加葛根混合物对产蛋后期蛋鸡肝脏脂肪合成相关基因表达的影响

Fig.5 Effects of Sini powder with Pueraria mixture on expression of hepatic lipogenesis related gene in liver of late-phase laying hens

如图6所示,与CON组相比,SP2和SP3组的肝脏PPARα mRNA相对表达量显著或极显著升高(P<0.05),SP3组的肝脏ACOX1 mRNA相对表达量显著升高(P<0.05),SP3组的肝脏CPT1A mRNA相对表达量极显著升高(P<0.01)。
图6 四逆散加葛根混合物对产蛋后期蛋鸡肝脏脂肪分解相关基因表达的影响

Fig.6 Effects of Sini powder with Pueraria mixture on expression of hepatic lipolysis related gene in liver of late-phase laying hens

2.6 相关性分析

采用Pearson相关性分析对肝脏脂质代谢相关基因的mRNA相对表达量与腹脂率和肝脏脂质含量之间的相关性进行分析。由表5可知,腹脂率与肝脏FASN和ACACA mRNA相对表达量呈显著正相关(P<0.05);肝脏TG、TC含量与肝脏ACACA mRNA相对表达量呈极显著正相关(P<0.01),与CPT1A和ACOX1 mRNA相对表达量呈极显著负相关(P<0.01)。
表5 肝脏脂质代谢相关基因的mRNA相对表达量与腹脂率和肝脏脂质含量的相关性分析

Table 5 Correlation analysis of liver lipid metabolism related gene mRNA relative expression levels with abdominal fat rate and liver lipid contents of late-phase laying hens

项目
Items		 mRNA相对表达量 mRNA relative expression level
脂肪酸合酶
FASN		 乙酰辅酶A
羧化酶
ACACA		 肉碱酰基
转移酶1A
CPT1A		 酰基辅酶A
氧化酶1
ACOX1
腹脂率 Abdominal fat rate 0.454* 0.392* -0.286 -0.283
甘油三酯 TG 0.455** 0.781** -0.541** -0.558**
总胆固醇 TC 0.243* 0.702** -0.713** -0.584**
高密度脂蛋白胆固醇 HDL-C -0.343* -0.719** 0.570** 0.536**
低密度脂蛋白胆固醇 LDL-C 0.580** 0.593** -0.423** -0.391*

*表示显著相关(P<0.05),**表示极显著相关(P<0.01)。

* mean significant correlation (P<0.05), and ** mean s significant correlation (P<0.01).

3 讨论

大量研究表明,黄酮类和皂苷类物质在抗氧化、抗炎、降血糖等方面有明显作用,可以在一定程度上降低心血管疾病、代谢病症、癌症等的发病率[22]。研究发现,动物饲粮中补充黄酮类或者皂苷类提取物可以有效通过抑制肝脏脂肪酸合成和增加脂肪酸氧化来预防肝脂肪变性[23-24];另外,葛根素作为葛根的主要活性成分,也有很多研究证实其具有类似的作用效果[25]。在本研究中,经测定,四逆散加葛根混合物中含有较为丰富的黄酮类、皂苷类物质,推测这可能是其发挥抗氧化和调节脂质代谢作用的原因。
NAFLD的特征是肝脏中脂肪的过度堆积。肝脏是机体脂类消化、吸收、合成、分解和运输的重要场所,是机体脂质代谢过程中的关键作用位点[26]。有研究采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间-质谱联用(UHPLC-QTOF-MS)和质量亏损过滤技术,分析四逆散在肝脏中的代谢产物,推测四逆散中甘草苷、异甘草苷、柚皮素、柴胡皂苷A和甘草酸等成分可能对某些肝脏疾病有治疗作用[19],这一结果在朱水兰等[27]、Wu等[28]的研究中得到证实。类似地,也有很多试验证明了葛根在脂质代谢方面的作用[5,25]。
本研究显示,四逆散加葛根混合物可以降低腹脂率和肝脏指数,改善肝脏组织形态,降低肝脏TC、TG、NEFA含量,且从相关性分析的结果来看,试验组腹脂率和肝脏脂质含量的降低与肝脏脂肪合成相关基因mRNA相对表达量的下调显著相关,这提示,四逆散加葛根混合物可以起到改善肝脏功能、调节脂质代谢的作用,这与已有研究对四逆散和葛根改善肝脏脂质代谢的观点一致。
由于肝脏在蛋鸡的产蛋过程中占据重要地位,它在产蛋过程中主要负责合成卵黄前体物质[29]。因此,蛋鸡的肝脏脂质代谢功能往往与生产性能密切相关,具体包括产蛋率、蛋重、蛋黄颜色和哈夫单位等[30]。王建[31]将葛根粉添加到饲粮中,发现蛋鸡的脂质代谢紊乱情况得到改善,肝脏功能出现好转,产蛋率和鸡蛋品质也都有所提高;罗闳丹等[32]发现四逆散可以对蛋氨酸-胆碱缺乏饮食诱导的小鼠非酒精性脂肪肝炎起到治疗作用,能够明显改善肝脏脂质代谢功能。与前人研究结果一致,本研究发现SP3组蛋鸡的产蛋率相比于CON组显著升高,这可能是由于饲粮中添加四逆散加葛根混合物可以改善肝脏功能,加强鸡蛋合成所需脂质的合成,从而提高了产蛋率。
LXRα作为核受体超家族的一员,在肝脏组织中表达较高[33]。LXRα可以激活其重要下游靶基因SREBP1,进而调控脂肪合成相关基因如FASN、ACACA、SCD等的表达,以此来调控脂质代谢过程[34]。脂肪酸合成酶(FAS)和乙酰辅酶A羧化酶(ACC)是脂肪酸合成过程中的2个限速酶,其活性高低可以在一定程度上反映机体的脂肪合成能力[35]。本研究表明,四逆散加葛根混合物下调了LXRα和SREBP1 mRNA相对表达量,FASN和ACACA mRNA相对表达量也有不同程度的下调趋势。Li等[12]的研究也得到了类似的结果。这说明四逆散加葛根混合物可能是通过LXRα/SREBP1信号通路来抑制脂肪合成的。
PPARα在肝脏中主要通过被不同特异性配体激活,从而介导其靶基因ACOX1、肉碱酰基转移酶1(CPT1)等其他脂肪分解相关基因的表达[36]。本试验结果与已有研究结果[12]相一致,SP3组的肝脏PPARα、ACOX1、CPT1A mRNA相对表达量相较于CON组上调,说明四逆散加葛根混合物可能是通过上调PPARα基因的表达来增强脂肪分解的,且这种作用可能与四逆散和葛根的添加剂量呈正相关。
已有大量研究表明,体内氧化还原状态的失衡是影响脂质代谢的关键因素[37-38]。高水平的ROS会诱发氧化应激,损害肝细胞的脂质代谢功能,堆积的脂肪又会导致ROS进一步增加,加重氧化应激[39]。从本研究结果来看,四逆散加葛根混合物可以极显著降低肝脏ROS和MDA含量,SP3组相较于CON组肝脏T-AOC和SOD、GSH-Px活性显著升高。以往的研究发现四逆散可以降低过氧化物含量,增强抗氧化酶活性,提高肝脏抗氧化能力[40],也有研究报道葛根不同的提取物均具有较强的体外抗氧化活性[41],应用于肉鸡可以显著提高肉鸡的抗氧化能力[42],与本试验的研究结果一致。这说明四逆散加葛根混合物可能首先通过调节肝脏氧化还原状态,继而调节了产蛋后期蛋鸡肝脏的脂肪分解代谢,但是其中具体的作用机制还需要进一步的验证和研究。此外,针对四逆散加葛根混合物发挥作用的主要活性成分以及各活性成分之间的相互作用也需后续试验的深入探索。

4 结果

四逆散加葛根混合物能够提高产蛋后期蛋鸡的生产性能,改善肝脏氧化还原状态,抑制肝脏脂肪合成,促进肝脏脂肪分解,降低蛋鸡腹脂率和肝脏脂质含量,起到调节肝脏脂质代谢的作用。在本试验条件下,以饲粮中添加3 g/kg四逆散加葛根混合物为宜。

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