动物营养学报 >

2023 , Vol. 35 >Issue 4: 2406 - 2416

DOI: https://doi.org/10.12418/CJAN2023.226

研究论文

复合益生菌发酵饲料对哺乳羔羊生长性能、血常规指标及血清免疫、抗氧化指标的影响

  • 丁亚伟 , 1 ,
  • 郭云霞 2, * ,
  • 王海玉 1 ,
  • 刘月琴 1 ,
  • 张英杰 1 ,
  • 王媛 3 ,
  • 郗艳菊 4 ,
  • 段春辉 , 1, **
展开
  • 1 河北农业大学动物科技学院,保定 071000
  • 2 河北农业大学生命科学学院,保定 071000
  • 3 河北省肉羊产业研究院,衡水 053401
  • 4 河北省功能性饲料添加剂技术创新中心,石家庄 050000
** 段春辉,讲师,硕士生导师,E-mail:

*同等贡献作者

丁亚伟(1997—),女,河北邢台人,硕士研究生,研究方向为反刍动物营养与饲料学。E-mail:

Copy editor: 武海龙

收稿日期: 2022-09-26

  网络出版日期: 2023-04-12

基金资助

河北省重点研发专项(21322907D)

河北省重点研发专项(21322910D)

国家肉羊产业技术体系(CARS-38)

农业科技推广项目(冀农科22054)

收起

Effects of Compound Probiotic Fermented Feed on Growth Performance, Blood Routine Indexes and Serum Immunity and Antioxidant Indexes of Nursing Lambs

  • DING Yawei , 1 ,
  • GUO Yunxia 2, * ,
  • WANG Haiyu 1 ,
  • LIU Yueqin 1 ,
  • ZHANG Yingjie 1 ,
  • WANG Yuan 3 ,
  • XI Yanju 4 ,
  • DUAN Chunhui , 1, **
Expand
  • 1 College of Animal Science and Technology, Hebei Agriculture University, Baoding 071000, China
  • 2 College of Life Science, Hebei Agriculture University, Baoding 071000, China
  • 3 Hebei Mutton Sheep Industry Research Institute, Hengshui 053401, China
  • 4 Hebei Province Functional Feed Additive Technology Innovation Center, Shijiazhuang 050000, China
** lecturer, E-mail:

*Contributed equally

Received date: 2022-09-26

  Online published: 2023-04-12

Fold

摘要

本试验旨在研究复合益生菌发酵饲料对哺乳羔羊生长性能、血常规指标及血清免疫、抗氧化指标的影响。选择健康的15日龄湖羊羔羊48只,随机分为4组,每组12个重复,每个重复1只羊。各组羔羊随母哺乳并补饲颗粒料,对照组颗粒料中不含发酵饲料,试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组分别饲喂含有5%、10%、15%发酵饲料的颗粒料。预试期5 d,正试期40 d。结果表明:1)试验Ⅰ、Ⅱ组终末体重显著高于对照组(P<0.05),试验Ⅰ、Ⅱ组平均日增重显著或极显著高于对照组(P<0.05或P<0.01)。2)试验Ⅱ组白细胞总数显著低于对照组(P<0.05),试验Ⅲ组红细胞总数显著高于对照组(P<0.05),试验Ⅱ组血红蛋白含量显著高于对照组(P<0.05)。3)试验Ⅲ组血清丙二醛含量显著低于对照组(P<0.05),试验Ⅲ组血清总抗氧化能力显著高于对照组(P<0.05),试验Ⅱ组血清谷胱甘肽过氧化物酶活性显著高于对照组(P<0.05)。4)试验Ⅰ、Ⅱ组血清免疫球蛋白G含量显著高于对照组(P<0.05),试验Ⅰ、Ⅱ组血清肿瘤坏死因子-α含量显著低于对照组(P<0.05),试验Ⅲ组血清白细胞介素-6含量显著高于对照组(P<0.05)。由此可见,颗粒料中添加10%复合益生菌发酵饲料可提高哺乳羔羊机体抗氧化能力和免疫力,提高平均日增重和终末体重。

关键词： 羔羊; 发酵饲料; 生长性能; 免疫; 血常规; 抗氧化

本文引用格式

丁亚伟 , 郭云霞 , 王海玉 , 刘月琴 , 张英杰 , 王媛 , 郗艳菊 , 段春辉 . 复合益生菌发酵饲料对哺乳羔羊生长性能、血常规指标及血清免疫、抗氧化指标的影响[J]. 动物营养学报, 2023 , 35(4) : 2406 -2416 . DOI: 10.12418/CJAN2023.226

Abstract

The purpose of this experiment was to study the effects of compound probiotic fermented feed on growth performance, blood routine indexes and serum immunity and antioxidant indexes of nursing lambs. Forty-eight healthy 15-day-old Hu lambs were randomly divided into 4 groups with 12 replicates in each group and 1 lamb in each replicate. All lambs were lactating with their mothers and supplemented with pellet feed, the pellet feed of the control group did not contain fermented feed, and the pellet feed of experimental groups Ⅰ, Ⅱ and Ⅲ contained 5%, 10% and 15% fermented feed, respectively. The pre-feeding period was 5 days and the experimental period was 40 days. The results showed as follows: 1) the final body weight of experimental groups Ⅰ and Ⅱ was significantly higher than that of the control group (P<0.05), and the average daily gain of experimental groups Ⅰ and Ⅱ was significantly higher than that of the control group (P<0.05 or P<0.01). 2) The white blood cell count of group Ⅱ was significantly lower than that of the control group (P<0.05), the red blood cell count of experimental group Ⅲ was significantly higher than that of the control group (P<0.05), and the hemoglobin content of experimental group Ⅱ was significantly higher than that of the control group (P<0.05). 3) The serum malondialdehyde content of experimental group Ⅲ was significantly lower than that of the control group (P<0.05), the serum total antioxidant capacity of experimental group Ⅲ was significantly higher than that of the control group (P<0.05), and the serum glutathione peroxidase activity of experimental group Ⅱ was significantly higher than that of the control group (P<0.05). 4) The serum immunoglobulin G content of experimental groups Ⅰ and Ⅱ was significantly higher than that of the control group (P<0.05), the serum tumor necrosis factor α content of experimental groups Ⅰ and Ⅱ was significantly lower than that of the control group (P<0.05), and the serum interleukin-6 content of experimental group Ⅲ was significantly higher than that of the control group (P<0.05). In conclusion, adding 10% compound probiotic fermented feed to pellet feed can improve the antioxidant capacity and immunity of suckling lambs, and increase the average daily gain and final body weight.

Key words： lambs; fermented feed; growth performance; immune; blood routine; antioxidant

近年来,在饲料全面禁用抗生素的背景下,哺乳羔羊腹泻率、死亡率升高,严重制约着羊产业的高效绿色发展。微生物发酵饲料具有降解抗营养因子、提高小肽和小分子蛋白质含量、产生益生功能多肽和微生物代谢产物的功能[1]。饲喂微生物发酵饲料可显著提高幼畜免疫力和生长性能[2]。研究表明,乳酸菌是应用最早且最广泛的益生菌,代谢产生的有机酸和乳酸菌素等物质可以降低饲料pH,抑制病原菌增殖,维持动物肠道微生物菌群,促进动物生长[2]。芽孢杆菌是革兰氏兼性厌氧阳性菌,代谢过程会产生多种消化酶,同时具有抑菌活性,可为乳酸菌等益生菌提供厌氧条件,是理想的发酵菌种[3]。目前,由于发酵饲料用量大且效果好,因此发酵饲料研究也从单一饼粕发酵发展到精料发酵。Yuan等[4]、Li等[5]和刘泽等[6]研究表明,在断奶仔猪、肉仔鸡和肉鹅中添加发酵全价料可显著提高生长性能,改善动物机体健康。但微生物发酵饲料在幼龄反刍动物上报道较少,尤其在哺乳期羔羊上的应用效果尚未见报道。基于此,本试验以乳酸杆菌、枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌为发酵菌种,以玉米、豆粕、麸皮为发酵底物,制成复合益生菌发酵饲料,旨在研究其对哺乳羔羊生长性能、血常规指标及血清免疫和抗氧化指标的影响,以期为复合益生菌发酵饲料在养殖生产中的应用提供理论依据和技术支撑。

1 材料与方法

1.1 试验时间与地点

试验于2021年8月15日至2021年9月30日在河北省衡水市志豪畜牧科技有限公司进行。

1.2 复合益生菌和发酵饲料制备

乳酸杆菌(RSG-1,编号CGMCC22061)、枯草芽孢杆菌(B-1,编号CGMCC22064)、地衣芽孢杆菌(Y5-39,编号CGMCC22062)由河北农业大学生命科学学院制药工程系实验室分离并保存。乳酸杆菌和芽孢杆菌分别在MRS和NB培养基中,于37 ℃、180 r/min摇床培养24 h。复合发酵菌种以乳酸杆菌、枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌按前期筛选比例1∶1∶4混合,活菌数达到108 CFU/g。发酵饲料由玉米∶豆粕∶麸皮=60%∶25%∶15%混合,复合发酵菌种接种量10%,含水量45%,在25 kg密闭发酵袋中30 ℃发酵14 d。发酵饲料组成及营养水平见表1,为了保证发酵饲料的最佳饲用效果,开封后发酵饲料在室温下储存不超过14 d,未开封发酵饲料储存期不超过1个月,在试验期间共发酵3批次饲料,并对每批次发酵饲料进行检测,保证测定结果一致。
表1 发酵饲料组成及营养水平(风干基础)

Table 1 Composition and nutrient levels of fermented feed (air-dry basis) %

项目Items 含量Content
原料Ingredients
玉米Corn 60.00
豆粕Soybean meal 25.00
麸皮Wheat bran 15.00
合计Total 100.00
营养水平Nutrient levels
干物质DM 51.40
有机物OM 89.30
代谢能ME/(MJ/kg) 11.95
粗蛋白质CP 19.62
中性洗涤纤维NDF 21.15
酸性洗涤纤维ADF 9.42
钙Ca 0.76
磷P 0.53

代谢能为计算值[7],其余为实测值。

ME was a calculated value[7], while the others were measured values.

1.3 试验设计和饲粮

选择遗传背景一致、15日龄、体重为(6.80±0.30) kg的健康湖羊单羔48只(公母各占1/2),按照体重和性别随机分为4组,每组12个重复,每个重复1只羊。各组羔羊随母哺乳并补饲颗粒料,对照组颗粒料中不含发酵饲料,试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组分别饲喂含有5%、10%、15%发酵饲料的颗粒料。预试期5 d,正试期40 d。试验饲粮组成及营养水平见表2。
表2 试验饲粮组成及营养水平(干物质基础)

Table 2 Composition and nutrient levels of experimental diets (DM basis) %

项目
Items		 组别Groups
对照组
Control
group		 试验Ⅰ组
Experimental
group Ⅰ		 试验Ⅱ组
Experimental
group Ⅱ		 试验Ⅲ组
Experimental
group Ⅲ
原料Ingredients
玉米Corn 41.50 42.00 42.30 43.50
豆粕Soybean meal 16.00 15.50 15.50 14.50
麸皮Wheat bran 8.00 7.00 7.00 5.00
次粉Wheat middlings 10.00 7.50 4.00 3.00
玉米胚芽粕Corn germ meal 7.00 7.00 7.00 5.00
玉米干酒糟及其可溶物Corn DDGS 8.50 7.00 5.20 5.00
乳清粉Whey powder 2.00 2.00 2.00 2.00
甜菜粕Sugar beet pulp 3.00 3.00 3.00 3.00
预混料Premix1) 4.00 4.00 4.00 4.00
发酵饲料Fermented feed 5.00 10.00 15.00
合计Total 100.00 100.00 100.00 100.00
营养水平Nutrient levels2)
干物质DM 87.32 85.53 81.57 77.75
代谢能ME/(MJ/kg) 9.66 9.75 9.68 9.69
粗蛋白质CP 18.99 19.03 19.13 19.11
中性洗涤纤维NDF 19.50 18.71 18.73 18.74
酸性洗涤纤维ADF 11.40 11.67 8.07 6.38
粗脂肪EE 7.49 7.64 7.36 7.34
粗灰分Ash 9.24 9.28 8.67 9.43
钙Ca 0.72 0.74 0.75 0.76
总磷TP 0.38 0.36 0.32 0.32

1)预混料为每千克饲粮提供 The premix provided the following per kg of diets:Cu 10.0 mg,Fe 35.0 mg,Zn 45 mg,Mn 45.0 mg,Ca 0.8 g,P 0.08 g,I 0.4 mg,Se 0.4 mg,Co 0.2 mg,VA 8 000 IU,VD3 800 IU,VE 27 IU。

2)代谢能为计算值,其余均为实测值。ME was a calculated value, while the others were measured values.

1.4 饲养管理

试验开始前对羊舍进行打扫消毒。试验期间,所有羔羊随母哺乳,羔羊在母子栏饲养,羔羊栏大小为2.7 m×2.0 m×0.8 m,母羊栏和羔羊栏之间有小门隔开,小门大小为0.5 m×0.5 m,母羊无法进入羔羊圈舍,羔羊可自由出入。试验期间各组羔羊于每日07:00和17:00饲喂开食颗粒料,发酵饲料与颗粒料按照干物质基础混合均匀后饲喂羔羊,所有羔羊自由采食、饮水。

1.5 样品采集

试验第40天所有试验羊空腹颈静脉采集血样,一份血样于乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝管中保存,用于测定血常规指标;另一份于促凝管中,4 000 r/min离心10 min,收集上层血清-20 ℃保存,用于测定血清免疫和抗氧化指标。

1.6 指标测定

1.6.1 生长性能

分别于试验第1和40天对所有羔羊空腹称重,根据初始体重和终末体重计算平均日增重(ADG)。试验期间记录每组颗粒料的给料量和剩料量,计算平均日采食量(ADFI)。

1.6.2 常规营养成分

参照《饲料分析及饲料质量检测技术》[8]测定样品干物质(DM)、粗脂肪(EE)、钙(Ca)、总磷(TP)、粗灰分(Ash)、中性洗涤纤维(NDF)和酸性洗涤纤维(ADF)含量。

1.6.3 血常规指标

使用PE-6800全自动血细胞分析仪对血常规指标进行分析,主要测定指标包括白细胞总数(WBC)、粒细胞(NEU)、淋巴细胞(LYM)、红细胞总数(RBC)、血红蛋白(HGB)、红细胞积压(HCT)、红细胞平均体积(MCV)、血红蛋白含量(MCH)、血红蛋白浓度(MCHC)、红细胞分布宽度(RDW)、血小板总数(PLT)和血小板平均积压(MPV)。

1.6.4 血清免疫和抗氧化指标

采用酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒测定血清白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白A(IgA)含量。采用微板法测定血清总抗氧化能力(T-AOC)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性。采用比色法测定血清超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量。以上试剂盒均购自江苏酶免实业有限公司,按试剂盒说明书进行测定。

1.7 数据处理与分析

采用SPSS 22.0软件进行单因素方差分析(one-way ANOVA),Duncan氏法进行多重比较,以P<0.01为差异极显著,P<0.05为差异显著。试验数据以“平均值±标准误”表示。

2 结果

2.1 复合益生菌发酵饲料对哺乳羔羊生长性能的影响

由表3可知,试验Ⅰ、Ⅱ组终末体重显著高于对照组(P<0.05),与试验Ⅲ组无差异(P>0.05);试验Ⅰ组ADG显著高于对照组和试验Ⅲ组(P<0.05),试验Ⅱ组ADG极显著高于对照组和试验Ⅲ组(P<0.01);试验Ⅰ组和试验Ⅱ组之间、试验Ⅲ组和对照组之间末重和ADG无显著差异(P>0.05)。各组之间初始体重和ADFI无显著差异(P>0.05)。
表3 复合益生菌发酵饲料对哺乳羔羊生长性能的影响

Table 3 Effects of compound probiotic fermented feed on growth performance of nursing lambs

项目
Items		 对照组
Control
group		 试验Ⅰ组
Experimental
group Ⅰ		 试验Ⅱ组
Experimental
group Ⅱ		 试验Ⅲ组
Experimental
group Ⅲ
初始体重IBW/kg 6.55±0.26 6.78±0.08 6.52±0.18 7.03±0.38
终末体重FBW/kg 14.36±0.98b 17.40±0.62a 17.88±0.68a 15.67±0.84ab
平均日增重ADG/(g/d) 195.28±19.49Bb 265.50±15.71ABa 284.09±16.95Aa 215.85±15.95Bb
平均日采食量ADFI/(g/d) 154.07±11.48 179.72±17.66 181.43±15.59 160.51±13.87

同行数据肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05),不同大写字母表示差异极显著(P<0.01),相同小写字母或无字母表示差异不显著(P>0.05)。下表同。

In the same row, values with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05), and with different capital letter superscripts mean significant difference (P<0.01), while with the same small letter or no letter superscripts mean no significant difference (P>0.05). The same as below.

2.2 复合益生菌发酵饲料对哺乳羔羊血常规指标的影响

由表4可知,试验Ⅱ组WBC显著低于对照组和试验Ⅰ、Ⅲ组(P<0.05),试验Ⅰ、Ⅲ组与对照组无显著差异(P>0.05)。试验Ⅲ组RBC显著高于对照组(P<0.05),与试验Ⅰ、Ⅱ组无显著差异(P>0.05);试验Ⅰ、Ⅱ组RBC与对照组无显著差异(P>0.05)。试验Ⅱ组MCH显著高于对照组(P<0.05),与试验Ⅰ、Ⅲ组无显著差异(P>0.05);试验Ⅰ、Ⅲ组MCH与对照组无显著差异(P>0.05)。各组之间LYM、NEU、HGB、HCT、MCV、MCHC、RDW、PLT和MPV均无显著差异(P>0.05)。
表4 复合益生菌发酵饲料对哺乳羔羊血常规指标的影响

Table 4 Effects of compound probiotic fermented feed on blood routine indexes of nursing lambs

项目
Items		 对照组
Control
group		 试验Ⅰ组
Experimental
group Ⅰ		 试验Ⅱ组
Experimental
group Ⅱ		 试验Ⅲ组
Experimental
group Ⅲ
白细胞总数WBC/(×109个/L) 30.44±1.95a 28.37±1.99a 22.28±0.60b 31.02±1.32a
淋巴细胞LYM/(×109个/L) 22.93±0.77 23.22±1.27 21.93±0.77 24.43±2.01
粒细胞NEU/(×109个/L) 4.34±0.19 3.63±0.55 3.03±0.37 3.82±0.59
红细胞总数RBC/(×1012个/L) 2.52±0.19b 2.71±0.13ab 2.79±0.29ab 3.19±0.12a
血红蛋白HGB/(g/L) 119.20±3.84 122.83±3.13 120.00±2.27 122.40±4.09
红细胞压积HCT/% 12.93±0.27 13.53±0.29 12.58±0.15 13.10±0.57
红细胞平均体积MCV/fL 46.78±0.21 46.77±0.26 46.33±0.30 46.77±0.22
血红蛋白含量MCH/pg 38.67±1.03b 44.32±2.41ab 46.98±3.68a 44.32±1.03ab
血红蛋白浓度MCHC/(g/L) 859.00±19.16 945.75±43.98 954.33±47.05 952.00±24.12
红细胞分布宽度RDW/% 12.88±0.23 14.17±0.60 13.68±0.55 13.95±0.18
血小板总数PLT/(×109个/L) 327.50±35.65 348.00±5.39 307.75±23.56 367.00±18.00
血小板平均压积MPV/fL 10.28±0.20 12.83±2.68 9.83±0.17 10.00±0.20

2.3 复合益生菌发酵饲料对哺乳羔羊血清抗氧化指标的影响

由表5可知,试验Ⅲ组血清MDA含量显著低于对照组(P<0.05),血清T-AOC显著高于对照组(P<0.05),与试验Ⅰ组、Ⅱ组无显著差异(P>0.05);试验Ⅰ、Ⅱ组与对照组血清MDA含量和T-AOC无显著差异(P>0.05)。试验Ⅱ组血清GSH-Px活性显著高于对照组(P<0.05),与试验Ⅰ、Ⅲ组无显著差异(P>0.05)。各组之间血清SOD活性无显著差异(P>0.05)。
表5 复合益生菌发酵饲料对哺乳羔羊血清抗氧化指标的影响

Table 5 Effects of probiotic fermented feed on serum antioxidant indexes of nursing lambs

项目
Items		 对照组
Control
group		 试验Ⅰ组
Experimental
group Ⅰ		 试验Ⅱ组
Experimental
group Ⅱ		 试验Ⅲ组
Experimental
group Ⅲ
丙二醛MDA/(nmol/mL) 1.54±0.02a 1.50±0.02ab 1.52±0.01ab 1.46±0.02b
超氧化物歧化酶SOD/(U/mL) 25.53±1.46 29.04±2.39 29.38±1.67 27.99±2.26
总抗氧化能力
T-AOC/(mmol/mL)		 209.41±2.50b 212.66±1.09ab 212.82±3.03ab 219.89±2.80a
谷胱甘肽过氧化物酶
GSH-Px/(U/mL)		 155.59±3.73b 167.46±4.13ab 173.62±8.15a 156.86±2.25ab

2.4 复合益生菌发酵饲料对哺乳羔羊血清免疫球蛋白含量的影响

由表6可知,试验Ⅰ、Ⅱ组血清IgG含量显著高于对照组和试验Ⅲ组(P<0.05),对照组与试验Ⅲ组之间、试验Ⅰ组与试验Ⅱ组之间无显著差异(P>0.05)。各组之间血清IgA和IgM含量无显著差异(P>0.05)。
表6 复合益生菌发酵饲料对哺乳羔羊血清免疫球蛋白含量的影响

Table 6 Effects of probiotic fermented feed on serum immunoglobulin contents of nursing lambs μg/mL

项目
Items		 对照组
Control
group		 试验Ⅰ组
Experimental
group Ⅰ		 试验Ⅱ组
Experimental
group Ⅱ		 试验Ⅲ组
Experimental
group Ⅲ
免疫球蛋白G IgG 1 301.36±8.93b 1 370.84±8.00a 1 372.71±11.69a 1 312.11±19.90b
免疫球蛋白A IgA 26.67±0.40 26.13±0.25 26.18±0.62 27.28±0.30
免疫球蛋白M IgM 13.62±0.15 13.88±0.24 14.28±0.37 13.65±0.23

2.5 复合益生菌发酵饲料对哺乳羔羊血清炎症因子含量的影响

由表7可知,试验Ⅲ组血清IL-6含量显著高于对照组和试验Ⅰ、Ⅱ组(P<0.05)。试验Ⅰ、Ⅱ组血清TNF-α含量显著低于对照组和试验Ⅲ组(P<0.05),试验Ⅲ组与对照组之间无差异(P>0.05)。各组之间血清IL-1β含量无显著差异(P>0.05)。
表7 复合益生菌发酵饲料对哺乳羔羊血清炎症因子含量的影响

Table 7 Effects of probiotic fermented feed on serum inflammatory factor content of nursing lambs ng/L

项目
Items		 对照组
Control
group		 试验Ⅰ组
Experimental
group Ⅰ		 试验Ⅱ组
Experimental
group Ⅱ		 试验Ⅲ组
Experimental
group Ⅲ
白细胞介素-1β IL-1β 114.35±2.06 113.36±1.90 111.06±2.46 118.89±3.66
白细胞介素-6 IL-6 163.87±2.17b 163.40±1.90b 160.10±1.97b 172.76±2.69a
肿瘤坏死因子-α TNF-α 966.84±8.72a 932.65±15.75b 911.14±7.02b 973.53±14.09a

3 讨论

3.1 复合益生菌发酵饲料对哺乳羔羊生长性能的影响

饲料经过益生菌发酵会产生乳酸等有机酸,使饲料呈酸香味,适量添加可提高饲料适口性和采食量,而发酵饲料添加比例过大会降低动物采食量[9]。朱春刚等[10]研究表明,4~5月龄羔羊饲粮中添加复合益生菌发酵甘蔗尾叶替代全株玉米青贮可提高ADFI,但添加比例不宜超过40%。王略宇等[11]研究发现,哺乳羔羊饲喂添加13.83%发酵饲料(植物乳杆菌、枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌按1∶1∶1比例复合,活菌数为5.4×108 CFU/g)的基础饲粮以及0.1%乳酸菌和芽孢杆菌混合菌粉,显著提高了羔羊终末体重和ADG,对ADFI无显著影响,说明发酵饲料可通过提高营养物质利用率提高羔羊生长性能。在本试验中,各组ADFI的大小关系为试验Ⅱ组>试验Ⅰ组>试验Ⅲ组>对照组,各组之间无显著差异,其中试验Ⅱ组ADFI较对照组提高了17.2%,较试验Ⅲ组提高了13.0%,说明复合益生菌发酵饲料添加比例会影响羔羊的采食量。与对照组相比,试验Ⅰ、Ⅱ组哺乳羔羊ADG显著提高,试验Ⅲ组无显著差异,与颗粒料采食量结果一致。综上所述,哺乳羔羊颗粒料中复合益生菌发酵饲料的适宜添加比例为10%,高添加比例未能取得更好的增重效果主要有3方面原因,一是高添加比例致使饲料酸度大,影响适口性;二是含有过多的活性菌使肠道菌群结构失衡;三是微生物活菌会额外消耗肠道部分营养物质[12]。

3.2 复合益生菌发酵饲料对哺乳羔羊血常规指标的影响

血常规指标变化可间接反映动物机体内环境平衡、动物机体健康、新陈代谢等情况[13]。血清WBC是反映动物机体的炎症指标;LYM循环于淋巴系统和血液,主要参与病毒感染的特异性免疫反应;NEU主要参与细菌或者寄生虫感染时的免疫反应[14]。本试验结果显示,添加5%和10%复合益生菌发酵饲料,哺乳羔羊WBC显著降低,表明添加适宜比例的复合益生菌发酵饲料可降低羔羊炎症反应,与羔羊生长性能结果相一致。
RBC是脊椎动物血液中含量最多的血细胞,可以与HGB、HCT共同反映动物运输氧气(O2)和二氧化碳(CO2)的能力,对机体产生的酸、碱物质起缓冲作用[15]。张霞等[16]研究表明,饲喂混合青贮饲粮的肉牛RBC提高,主要是由于混合青贮提高了饲粮活菌数,进而影响机体T-AOC。本研究中,哺乳羔羊RBC随复合益生菌发酵饲料添加比例的增加而增加,表明复合益生菌发酵饲料中富含活性益生菌及代谢物,在一定程度上可提高哺乳羔羊机体免疫力。MCH、MCHC、MCV分别反映了红细胞中HGB含量、色素饱满度、体积大小,当血液MCH、MCHC和MCV较低时,表明机体铁含量低或者铁吸收功能障碍,导致机体RBC降低,容易使红细胞发生异常代谢,诱发缺铁性贫血[16]。本研究中,试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组血清MCH分别比对照提高了14.6%、21.0%和14.6%,说明添加复合益生菌发酵饲料可改善哺乳羔羊的健康状况,可能与复合益生菌发酵饲料会提高饲料中可消化蛋白质含量,进而合成更多HGB,从而提高MCH有关[17]。本试验中,添加复合益生菌发酵饲料对羔羊MCHC和MCV无显著影响,表明复合益生菌发酵饲料不会破坏红细胞,也不会抑制机体促红细胞生成素的释放[18]。PLT是动物血液中重要成分之一,其在止血、伤口愈合、炎症反应、血栓形成及器官移植排斥等生理和病理过程中有重要作用;MPV主要反映血小板酶活性、功能、超微结构、体内炎症等状态,PLT与MPV对于维持正常血液循环系统具有重要意义[19]。本试验中,羔羊血液中LYM、NEU、PLT、MPV指标随复合益生菌发酵饲料添加比例无明显变化,说明复合益生菌发酵饲料对哺乳羔羊无不利影响。

3.3 复合益生菌发酵饲料对哺乳羔羊血清抗氧化指标的影响

研究表明,益生菌如乳酸菌、芽孢杆菌等可通过本身金属螯合能力、代谢产生的还原活性小分子物质[20]、代谢物调控信号调节因子表达水平以及对肠道菌群调节[21]参与机体抗氧化系统。T-AOC是衡量动物机体抗氧化能力的综合指标。GSH-Px是机体催化谷胱甘肽(GSH)分泌的一种强抗氧化酶,可以将机体有害过氧化物分解为无毒的羟基化合物(水或醇类),清除并阻止超氧自由基反应,从而保护细胞膜结构和功能不受过氧化物的损伤[22]。MDA含量可反映机体细胞损伤程度。据报道,饲料经微生物发酵后含有丰富的维生素、小肽、消化酶、胞外多糖等有益代谢产物,能够提高饲料的抗氧化功能[23]。3月龄湖羊饲粮用5%、10%和20%发酵饲料替代精料后,血清T-AOC随着发酵饲料替代比例的增加而增强[24]。Tao等[25]研究发现,10%和15%发酵构树组安格斯育肥牛血清T-AOC显著增加,而血清MDA含量显著降低,可能是发酵饲料中黄酮类代谢物质可以减少动物血液中氧化反应和氧化产物,从而降低氧化应激。本研究表明,随着复合益生菌发酵饲料添加比例增加,显著降低了羔羊血清MDA含量,提高了血清T-AOC,可能与复合益生菌发酵饲料中益生菌数量和代谢产物有关。研究表明,动物肠道微生态区系可调节谷胱甘肽代谢,影响GSH-Px活性[26]。孟子琪[27]研究表明,发酵麸皮多糖能够提高肉羊血清GSH-Px活性和谷胱甘肽含量。本试验中,添加复合益生菌发酵饲料可提高羔羊血清GSH-Px活性,与上述结果一致。而试验Ⅲ组血清GSH-Px活性分别比试验Ⅰ、Ⅱ组降低了6.33%和9.65%,可能与复合益生菌发酵饲料中丰富的代谢物有关,或者是复合益生菌发酵饲料影响羔羊胃肠道微生物区系平衡,影响机体抗氧化能力[28]。

3.4 复合益生菌发酵饲料对哺乳羔羊机体免疫力的影响

血清免疫球蛋白含量一定程度上反映全身的免疫能力[29]。IgG在血清免疫球蛋白中含量最高,是机体二次体液免疫最主要的免疫球蛋白;IgA参与黏膜免疫反应,在局部抗感染过程中发挥重要作用,是阻碍病原体入侵动物机体的第1道防线;IgM是血液中黏附抗体,具有很强的杀菌功能[30]。研究表明,益生菌可提高巨噬细胞数量,提高血液抗体水平,从而增加羔羊血清IgG含量[31]。饲喂发酵苜蓿可显著提高肉羊血清IgG和IgA含量,对血清IgM含量无显著影响[32]。刘世雄[33]研究表明,10%酵母菌与枯草芽孢杆菌培养物可显著提高50日龄断奶羔羊血清IgG和IgM含量。本试验中,添加5%和10%复合益生菌发酵饲料显著提高了羔羊血清IgG含量,与上述结果一致。试验Ⅲ组血清IgG含量显著低于试验Ⅰ、Ⅱ组,可能是由于高比例的复合益生菌发酵饲料对机体有促炎作用,从而降低免疫机能[34]。而添加复合益生菌发酵饲料组羔羊血清IgA和IgM含量与对照组无显著差异,与鲁信举[32]、Zhu等[35]和刘世雄[33]研究结果不一致,可能与品种、年龄和试验期有关。
IL-6能诱导B、T细胞增殖分化,是一种炎症标记物,参与机体的体液免疫;TNF-α由巨噬细胞产生,能激活淋巴细胞,是抗感染中最强的细胞因子[36]。Bleau等[37]通过体外试验表明乳酸菌培养液成分(胞外多糖)可增加巨噬细胞吞噬能力,降低促炎因子IL-6和TNF-α分泌。李玉琴等[38]研究表明,芽孢杆菌进入肠道后,可有效防止大肠杆菌感染引起的炎症反应,降低泌乳奶牛血清TNF-α和IL-6含量。Kim等[39]研究表明,发酵豆粕中的代谢物质(消化酶)可有效降解豆粕抗营养因子和致敏化合物的能力,从而降低肠道上皮细胞炎性因子的分泌,使断奶犊牛血清TNF-α和IL-6含量显著降低,提高机体免疫力。本试验中,各组血清IL-6和TNF-α含量的大小关系为试验Ⅲ组>对照组>试验Ⅰ组>试验Ⅱ组,试验Ⅰ、Ⅱ组血清IL-6和TNF-α降低,以试验Ⅱ组血清炎症因子含量最低,表明适宜的复合益生菌发酵饲料中益生菌或者代谢产物可提高机体细胞免疫。而试验Ⅲ组血清IL-6和TNF-α分别比对照组提高了5.4%和0.7%,可能是因为高剂量益生菌更倾向于刺激吞噬细胞(树突细胞)转化为半成熟细胞,促进Th1反应,分泌大量IL-6和TNF-α因子,从而使机体免疫力降低[40]。因此,本试验条件下,哺乳羔羊颗粒料中添加10%的复合益生菌发酵饲料可明显降低炎症反应,提高机体免疫力。

4 结论

复合益生菌发酵饲料可用于哺乳期羔羊的饲养。本试验条件下,颗粒料中添加10%的复合益生菌发酵饲料可以提高哺乳羔羊生长性能、免疫力和抗氧化能力。

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