动物营养学报 >

2023 , Vol. 35 >Issue 6: 3644 - 3658

DOI: https://doi.org/10.12418/CJAN2023.339

研究论文

马齿苋、苦参、伏龙肝复方中草药添加剂对肉鸡生长性能、抗氧化能力、免疫功能和肠道形态及屏障功能的影响

  • 刘梦杰 , 1 ,
  • 周静 1 ,
  • 李越 1 ,
  • 丁倚晴 1 ,
  • 陈家燕 1 ,
  • 董齐 1 ,
  • 吕伟杰 1 ,
  • 郭世宁 , 1, 2, *
展开
  • 1 华南农业大学兽医学院,广州 510642
  • 2 广东省兽用中药与天然药物工程技术研究中心,广州 510642
*郭世宁,教授,博士生导师,E-mail:

刘梦杰(1992—),男,湖北武汉人,博士研究生,从事中兽药的研发及应用研究。E-mail:

收稿日期: 2022-12-05

  网络出版日期: 2023-06-08

基金资助

广东省重点领域研发计划“无抗饲料生物合成关键技术研究与应用”(2019B020218003)

收起

Effects of Portolaca oleracea L., Sophorae flavescentis, Terra Flava Usta Compound Chinese Herbal Medicine Additive on Growth Performance, Antioxidant Ability, Immune Function, Intestinal Morphology and Barrier Function of Broilers

  • LIU Mengjie , 1 ,
  • ZHOU Jing 1 ,
  • LI Yue 1 ,
  • DING Yiqing 1 ,
  • CHEN Jiayan 1 ,
  • DONG Qi 1 ,
  • LYU Weijie 1 ,
  • GUO Shining , 1, 2, *
Expand
  • 1 College of Veterinary Medicine, South China Agricultural University, Guangzhou 510642, China
  • 2 Traditional Chinese Veterinary Medicine and Natural Medicine Engineering Technology Research Center of Guangdong, Guangzhou 510642, China
*professor, E-mail:

Received date: 2022-12-05

  Online published: 2023-06-08

Fold

摘要

本试验旨在研究马齿苋、苦参、伏龙肝复方中草药添加剂对肉鸡生长性能、抗氧化能力、免疫功能和肠道形态及屏障功能的影响。选取1日龄健康的黄羽肉鸡270羽,按体重随机分成3组,每组6个重复,每个重复15羽。对照组饲喂基础饲粮,试验组在基础饲粮中分别添加500(CHM-500组)和1 500 mg/kg复方中草药添加剂(CHM-1500组),试验期42 d。结果显示:与对照组相比,1)CHM-1500组各阶段肉鸡的平均日增重(ADG)显著提高(P<0.05),1~21日龄和1~42日龄肉鸡的料重比(F/G)显著降低(P<0.05)。2)CHM-500组42日龄肉鸡血清总蛋白(TP)含量显著升高(P<0.05),21日龄肉鸡血清甘油三酯(TG)、尿素(UREA)含量和42日龄肉鸡血清总胆固醇(TC)、TG含量显著降低(P<0.05);CHM-1500组42日龄肉鸡血清白蛋白(ALB)、TP含量显著升高(P<0.05),21和42日龄肉鸡血清TC、TG、UREA含量显著降低(P<0.05)。3)CHM-500组42日龄肉鸡血清干扰素-γ(IFN-γ)含量显著降低(P<0.05);CHM-1500组21和42日龄肉鸡血清免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)、白细胞介素-4(IL-4)和空肠黏膜分泌型免疫球蛋白A(sIgA)含量显著升高(P<0.05),21日龄肉鸡脾脏指数和42日龄肉鸡胸腺指数显著升高(P<0.05),42日龄肉鸡血清IFN-γ含量显著降低(P<0.05)。4)CHM-500组21日龄肉鸡血清丙二醛(MDA)含量显著降低(P<0.05);CHM-1500组21日龄肉鸡血清总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和42日龄肉鸡血清T-SOD、GSH-Px活性与总抗氧化能力(T-AOC)显著升高(P<0.05),21和42日龄肉鸡血清MDA含量显著降低(P<0.05)。5)CHM-500组和CHM-1500组42日龄肉鸡空肠绒毛高度(VH)显著提高(P<0.05),空肠隐窝深度(CD)没有显著差异(P>0.05);CHM-500组42日龄肉鸡空肠绒隐比(V/C)显著提高(P<0.05)。6)CHM-500组21日龄肉鸡空肠咬合蛋白(Occludin)、闭锁小带蛋白-1(ZO-1)mRNA相对表达量和42日龄肉鸡空肠超氧化物歧化酶1(SOD1)、IL-4 mRNA相对表达量显著升高(P<0.05);CHM-1500组21和42日龄肉鸡空肠GSH-Px、IL-4、Occludin、闭合蛋白-1(Claudin-1)及ZO-1 mRNA相对表达量显著提高(P<0.05),21日龄肉鸡空肠SOD1 mRNA相对表达量和42日龄肉鸡空肠过氧化氢酶(CAT)mRNA相对表达量显著增加(P<0.05),21日龄肉鸡空肠IFN-γ mRNA相对表达量显著降低(P<0.05)。综上可知,饲粮中添加马齿苋、苦参、伏龙肝复方中草药添加剂可提高肉鸡的生长性能,增强机体抗氧化能力和免疫功能,促进肠道绒毛发育,增强肠道屏障功能,且1 500 mg/kg的效果优于500 mg/kg。

关键词： 中草药添加剂; 肉鸡; 生长性能; 抗氧化能力; 免疫功能

本文引用格式

刘梦杰 , 周静 , 李越 , 丁倚晴 , 陈家燕 , 董齐 , 吕伟杰 , 郭世宁 . 马齿苋、苦参、伏龙肝复方中草药添加剂对肉鸡生长性能、抗氧化能力、免疫功能和肠道形态及屏障功能的影响[J]. 动物营养学报, 2023 , 35(6) : 3644 -3658 . DOI: 10.12418/CJAN2023.339

Abstract

This experiment was conducted to investigate the effects of dietary Portolaca oleracea L., Sophorae flavescentis, Terra Flava Usta compound Chinese herbal medicine additive (CHM) on growth performance, antioxidant ability, immune function, intestinal morphology and barrier function of broilers. A total of 270 one-day-old yellow-feathered broilers were randomly assigned to 3 groups with 6 replicates per group and 15 birds per replicate. Broilers in control group were fed a basal diet, while those in experimental groups were fed the basal diet supplemented with 500 (CHM-500 group) or 1 500 mg/kg (CHM-1500 group) CHM for 42 days. The results showed as follows: compared with the control group, 1) the average daily gain of broilers at each stage in CHM-1500 group was significantly increased (P<0.05), while the feed/gain (F/G) of broilers from 1 to 21 days of age and 1 to 42 days of age was significantly decreased (P<0.05). 2) Serum total protein (TP) content of broilers at 42 days of age was significantly increased (P<0.05), and the contents of serum triglyceride (TG) and urea (UREA) of broilers at 21 days of age and the contents of serum TG and total cholesterol (TC) of broilers at 42 days of age were decreased significantly in CHM-500 group (P<0.05); the contents of serum albumin (ALB) and TP of broilers at 42 days of age were increased significantly (P<0.05), while the contents of serum TC, TG and UREA of broilers at 21 and 42 days of age in CHM-1500 group were significantly decreased (P<0.05). 3) The content of serum interferon-γ (IFN-γ) of broilers at 42 days of age in CHM-500 group was significantly decreased (P<0.05); the contents of serum immunoglobulin A (IgA), immunoglobulin G (IgG), interleukin-4 (IL-4) and jejunal mucosa secretory immunoglobulin A (sIgA) of broilers at 21 and 42 days of age were significantly increased (P<0.05), and the spleen index of broilers at 21 days of age and thymus index of broilers at 42 days of age were significantly increased (P<0.05), while the content of serum IFN-γ of broilers at 42 days of age in CHM-1500 group was significantly decreased (P<0.05). 4) The content of serum malondialdehyde (MDA) of broilers at 21 days of age in CHM-500 group was significantly decreased (P<0.05); the activities of serum total superoxide dismutase (T-SOD) and glutathione peroxidase (GSH-Px) of broilers at 21 days of age and the activities of serum T-SOD, GSH-Px and total antioxidant capacity (T-AOC) of broilers at 42 days of age were significantly increased (P<0.05), while the content of serum MDA of broilers at 21 and 42 days of age in CHM-1500 group was significantly decreased (P<0.05). 5) The jejunal villus height (VH) of broilers at 42 days of age in CHM-500 and CHM-1500 groups was significantly increased (P<0.05), but the jejunal crypt depth (CD) had no significant difference (P>0.05); the ratio of jejunal villus height to crypt depth (V/C) of broilers at 42 days of age in CHM-500 group was significantly increased (P<0.05). 6) The mRNA relative expression levels of Occludin and zonula occluden-1 (ZO-1) in jejunal mucosa of broilers at 21 days of age and the mRNA relative expression levels of superoxide dismutase 1 (SOD1) and IL-4 in jejunal mucosa of broilers at 42 days of age in CHM-500 group were significantly increased (P<0.05); the mRNA relative expression levels of GSH-Px, IL-4, Occludin, Claudin-1 and ZO-1 in jejunal mucosa of broilers at 21 and 42 days of age were significantly increased (P<0.05), the mRNA relative expression level of SOD1 in jejunal mucosa of broilers at 21 days of age and the mRNA relative expression level of catalase (CAT) in jejunal mucosa of broilers at 42 days of age were significantly increased (P<0.05), while the mRNA relative expression level of IFN-γ in jejunal mucosa of broilers at 21 days of age in CHM-1500 group was significantly decreased (P<0.05). In conclusion, it is concluded that dietary supplementation with Portolaca oleracea L., Sophorae flavescentis, Terra Flava Usta CHM can improve the growth performance, enhance the antioxidant ability and immune function, promote the intestinal villi development and enhance the intestinal barrier function of broilers. The effect of CHM supplementation at 1 500 mg/kg is better than that at 500 mg/kg.

Key words： Chinese herbal medicine additive; broilers; growth performance; antioxidant ability; immune function

近年来由于饲料中促生长的抗菌药物的禁止使用,养殖业迫切需要解决禁抗后带来的养殖经济效益低下的问题。由于中药具有原料来源广泛、临床试验基础丰富以及对机体的副作用小等优势[1],并且富含多种有机物,在促进动物生长、提高畜禽产品品质、增强机体抗病力和免疫力中发挥着重要作用[2]。马齿苋在许多国家被用作药用植物,含有生物碱、α-亚麻酸、黄酮、多糖等生物活性成分[3],其具有广泛的药理活性,如抗炎、抗菌、抗氧化、抗溃疡和伤口愈合作用[4]。在蛋鸡饲粮中补充0.1%或0.2%的干马齿苋可增加鸡蛋重量,提高产蛋量和饲料效率[5]。苦参中的生物活性成分主要有生物碱、黄酮类、三萜及其皂苷类、木脂素类其他化合物等,具有抗菌、抗氧化、抗炎、免疫调节和抗生育等作用[6]。已有研究显示,苦参用作饲料添加剂对育肥猪有增重效果[7],苦参提取物可提高肉羊发免疫功能和抗菌能力[8]。伏龙肝具有温中燥湿、止血、止泻之功效,可缓和药性,增强药材的补脾、安胃、止呕、止泻作用[9]。本研究在前人研究的基础上,将苦参、马齿苋、伏龙肝等合理配伍,补中有消,相辅相成,以期达到更好的促生长和增强免疫力的效果,并将该复方作为饲料添加剂应用到肉鸡饲粮中,观察其对肉鸡生长性能、抗氧化能力、免疫功能和肠道形态及屏障功能的影响,以期为禁抗后中草药饲料添加剂的研发及其在肉鸡健康养殖生产中的应用提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

本试验所用复方中草药添加剂由苦参(生产批号:210405)、马齿苋(生产批号:210320)、伏龙肝(生产批号:210409)组成,将苦参、马齿苋和伏龙肝粉碎后过80目筛,按1∶1∶1的比例配合、混匀,分装后备用。该复方中草药添加剂的营养成分及有效活性成分含量见表1。
表1 复方中草药添加剂的营养成分及有效活性成分含量(干物质基础)

Table 1 Contents of nutrient components and effective active components of compound Chinese herbal medicine additive (DM basis)%

营养成分
Nutrient components		 含量
Content		 有效活性成分
Effective active components		 含量
Content
粗蛋白质 CP 10.24 水提粗提物 Water crude extract 21.47
粗脂肪 EE 1.03 总黄酮 Total flavones 7.80
粗纤维 CF 8.41 总多糖 Total polysaccharides 4.76
粗灰分 Ash 26.04
钙 Ca 1.15
磷 P 0.19

1.2 试验设计

试验用肉鸡购自广东佛山南海种禽有限公司。将270只1日龄(初始均重38.6 g)且健康状况良好的黄羽肉鸡公雏随机分成3组,每组6个重复,每个重复15只。对照组(CON组)饲喂不添加复方中草药添加剂的基础饲粮,试验组分别在基础饲粮中添加500(CHM-500组)和1 500 mg/kg(CHM-1500组)复方中草药添加剂。饲养试验周期为42 d,分为第1阶段(1~21日龄)和第2阶段(22~42日龄)。

1.3 饲养管理与基础饲粮

试验于华南农业大学进行,试验开展前清理消毒鸡舍,所有鸡只自由采食和饮水,鸡舍通风和环境符合卫生要求,各组肉鸡饲养试验全程按照《黄羽肉鸡饲养管理技术规程》[10](NY/T 1871—2010)中的饲养管理技术规程进行饲养管理。基础饲粮参照《鸡饲养标准》(NY/T 33—2004)配制,其组成及营养水平见表2。
表2 基础饲粮组成及营养水平(饲喂基础)

Table 2 Composition and nutrient levels of basal diets (as-fed basis)%

项目
Items		 1~21日龄
1 to 21 days of age		 22~42日龄
22 to 42 days of age
原料 Ingredients
玉米 Corn 52.50 58.80
豆粕 Soybean meal 40.00 33.80
豆油 Soybean oil 3.00 3.00
磷酸氢钙 CaHPO4 1.90 1.80
石粉 Limestone 1.08 1.22
食盐 NaCl 0.37 0.37
赖氨酸 Lysine 0.05 0.03
蛋氨酸 Methionine 0.19 0.07
预混料 Premix1) 0.80 0.80
胆碱 Choline 0.11 0.11
合计 Total 100.00 100.00
营养水平 Nutrient levels2)
代谢能 Metabolic energy/(MJ/kg) 12.42 12.62
粗蛋白质 Crude protein 21.77 19.65
钙 Calcium 1.00 1.02
有效磷 Available phosphorus 0.44 0.42
赖氨酸 Lysine 1.34 1.15
蛋氨酸 Methionine 0.55 0.40
半胱氨酸 Cystine 0.40 0.36

1)预混料为每千克饲粮提供The premix provided the following per kg of diets:VA 9 000 IU,VD3 3 000 IU,VE 26 mg,VK3 1.20 mg,VB1 3.00 mg,VB2 8.00 mg,VB6 4.40 mg,VB12 0.01 mg,烟酸 nicotinic acid 45 mg,叶酸 folic acid 0.75 mg,生物素 biotin 0.20 mg,泛酸钙 calcium pantothenate 15 mg,Fe 100 mg,Cu 10 mg,Zn 108 mg,Mn 120 mg,I 1.50 mg,Se 0.35 mg。

2)粗蛋白质为实测值,其余为计算值。Crude protein was a measured value, while the others were calculated values.

1.4 测定指标及方法

1.4.1 营养成分及有效活性成分含量测定

复方中草药添加剂的粗蛋白质(CP)、粗灰分(Ash)、粗纤维(CF)、粗脂肪(EE)、钙(Ca)和磷(P)含量参照张丽英[11]的方法测定。准确称取100 g复方中草药添加剂粉末,加入800 mL蒸馏水浸泡30 min,50 ℃、600 W超声辅助提取30 min,重复2次,过滤,将滤液合并,50 ℃、170 r/min旋转蒸发浓缩药液,将其冷冻干燥(条件:温度阱-50 ℃,真空度0.12 MPa,干燥48 h),计算水提粗提物含量。参考戴洁等[12]的方法,采用苯酚硫酸法进行复方中草药添加剂中多糖含量的测定;参考刘玉明等[13]的方法,采用硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠[NaNO2-AL(NO3)3-NaOH]比色法进行复方中草药添加剂中总黄酮含量的测定。

1.4.2 生长性能测定

试验开始时称量肉鸡的体重作为初始体重;分别于试验第21和42天,以重复笼为单元,对全部鸡只称量体重,记录体重(BW)及饲料消耗量,计算1~21日龄、22~42日龄和全期(1~42日龄)的平均日采食量(ADFI)、平均日增重(ADG)和料重比(F/G)。

1.4.3 血清生化指标与抗氧化指标测定

分别于试验第21和42天,每组随机选取6只鸡翅静脉采血,每只采集5 mL于乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝管中,室温静置1 h后,3 500 r/min离心10 min取上清,-20 ℃保存待测。采用迈瑞BS-380全自动生化分析仪及迈瑞生物公司生产的配套试剂盒测定血清生化指标,血清生化指标包括:总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、尿素(UREA)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)含量与谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性。血清抗氧化指标包括总抗氧化能力(T-AOC)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)与谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)含量,均采用南京建成生物工程研究所生产的试剂盒测定。

1.4.4 免疫相关指标测定

分别于试验第21和42天,每组随机选取6只肉鸡,称量体重并采血后剖杀,去除相关免疫器官表面的结缔组织和脂肪,称重,计算免疫器官指数[免疫器官指数(%)=100×免疫器官重量(g)/体重(kg)];采集空肠中部5 cm左右的肠段,纵向剖开肠段,用预冷的生理盐水冲洗干净食糜后,用载玻片刮取空肠黏膜至2 mL冻存管,于-80 ℃冰箱中保存备用。血清免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)、白细胞介素-4(IL-4)、干扰素-γ(IFN-γ)和空肠黏膜分泌型免疫球蛋白A(sIgA)含量均采用上海酶联生物科技有限公司生产的试剂盒测定。

1.4.5 空肠形态测定

在试验第42天,将各组剖杀的肉鸡分离出空肠,剪取中段1~2 cm,用生理盐水轻缓地冲洗肠道残留的内容物,洗净后迅速置于4 %多聚甲醛溶液中常温固定,使用苏木精-伊红(HE)染色后制作石蜡切片。使用Axio Scope A1显微镜(Zeiss,德国)观察切片并拍照,使用Image-Pro软件测量肠道绒毛高度(VH)和隐窝深度(CD),并计算VH与CD的比值,即绒隐比(V/C)。

1.4.6 空肠相关基因表达检测

分别于试验第21和42天,截取空肠,除去肠道内容物并用生理盐水反复洗涤干净,使用无菌载玻片刮取全部黏膜组织分装于冻存管内,-80 ℃保存备用,用于空肠相关基因表达的测定。通过TRIzol试剂法(南京诺唯赞生物科技股份有限公司)提取空肠组织总RNA,用微量紫外可见分光光度计(NanoDrop-2000)测定RNA浓度和纯度,参照反转录试剂盒[HiScript Ⅲ RT SuperMix for qPCR(+gDNA wiper)]说明,对总RNA进行反转录合成cDNA,储存在-20 ℃冰箱中备用。实时荧光定量PCR检测采用SYBR Green染料法,在Light Cycler® 480ⅡSystems仪器上进行,按照ChamQ Universal SYBR qPCR Master Mix试剂盒配制反应体系并进行反应,用2-△△Ct法计算目的基因mRNA相对表达量。所用引物由北京擎科生物技术有限公司合成,引物信息见表3。
表3 引物信息

Table 3 Primer information

类型
Types		 基因
Genes		 引物序列
Primer sequence (5'—3')		 登录号
Accession number		 参考文献
Reference
内参基因
Internal reference
genes		 β-肌动蛋白
β-actin		 F:GAGAAATTGTGCGTGACATCA
R:CCTGAACCTCTCATTGCCA		 L08165.1 [14]
甘油醛-3-磷酸脱氢酶
GAPDH		 F:GGTGGTGCTAAGCGTGTTAT
R:ACCTCTGTCATCTCTCCACA		 K01458 [14]
目的基因
Target genes		 白细胞介素-4
IL-4		 F:CTTCCTCAACATGCGTCAGC
R:TGAAGTAGTGTTGCCTGCTGC		 AJ621735 [14]
干扰素-γ
IFN-γ		 F:AGCTGACGGTGGACCTATTATT
R:GGCTTTGCGCTGGATTC		 Y07922.1 [14]
超氧化物歧化酶1
SOD1		 F:CCGGCTTGTCTGATGGAGAT
R:TGCATCTTTTGGTCCACCGT		 NM_205064.1 [15]
谷胱甘肽过氧化物酶
GSH-Px		 F:GACCAACCCGCAGTACATCA
R:GAGGTGCGGGCTTTCCTTTA		 NM_001277853.2 [15]
过氧化氢酶
CAT		 F:GGTTCGGTGGGGTTGTCTTT
R:CACCAGTGGTCAAGGCATCT		 NM_001031215.2 [15]
咬合蛋白
Occludin		 F:CCGTAACCCCGAGTTGGAT
R:ATTGAGGCGGTCGTTGATG		 NM_205128.1 [16]
闭合蛋白-1
Claudin-1		 F:CCTGCTCACCCTCATTGGAG
R:GCTGAACTCACTCTTGGGCT		 NM_001277622.1 [16]
闭锁小带蛋白-1
ZO-1		 F:TGTAGCCACAGCAAGAGGTG
R:CTGGAATGGCTCCTTGTGGT		 XM_413773.4 [16]

1.5 数据统计与分析

试验数据经Excel 2016处理后,采用SPSS 22.0软件进行单因素方差分析(one-way ANOVA),并采用Duncan氏法进行组间多重比较,试验结果均以平均值和标准误表示,P<0.05表示差异显著。

2 结果

2.1 复方中草药添加剂对肉鸡生长性能的影响

由表4可知,复方中草药添加剂对1~21日龄、22~42日龄及1~42日龄肉鸡的ADFI均无显著影响(P>0.05),但能显著影响1~21日龄、22~42日龄及1~42日龄肉鸡的ADG与1~21日龄和1~42日龄肉鸡的F/G(P<0.05)。与CON组相比,CHM-500组对肉鸡22~42日龄和1~42日龄肉鸡的ADG有升高趋势(P=0.097,P=0.081),1~21日龄和1~42日龄肉鸡的F/G显著降低(P<0.05)。与CON组相比,CHM-1500组1~21日龄、22~42日龄和1~42日龄肉鸡ADG显著提高(P<0.05),1~21日龄和1~42日龄肉鸡的F/G显著降低(P<0.05)。
表4 复方中草药添加剂对肉鸡生长性能的影响

Table 4 Effects of compound Chinese herbal medicine additive on growth performance of broilers

项目
Items		 组别 Groups 标准误
SE		 P值
P-value
CON CHM-500 CHM-1500
1~21日龄 1 to 21 days of age
平均日增重 ADG/(g/d) 19.40b 19.99ab 20.92a 0.27 0.046
平均日采食量 ADFI/(g/d) 29.01 29.62 29.43 0.25 0.641
料重比 F/G 1.50a 1.48b 1.40b 0.02 0.042
22~42日龄 22 to 42 days of age
平均日增重 ADG/(g/d) 41.83b 42.54ab 42.95a 0.19 0.042
平均日采食量 ADFI/(g/d) 97.20 97.69 98.15 0.33 0.524
料重比 F/G 2.32 2.30 2.29 0.01 0.691
1~42日龄 1 to 42 days of age
平均日增重 ADG/(g/d) 30.61b 31.26ab 31.81a 0.18 0.013
平均日采食量 ADFI/(g/d) 63.11 63.65 63.79 0.18 0.269
料重比 F/G 2.06a 2.04b 1.98b 0.01 0.021

同行数据肩标不同字母表示差异显著(P<0.05),相同字母或无字母表示差异不显著(P>0.05)。下表同。

Values in the same row with different letter superscripts mean significant difference (P<0.05), while with the same letter or no letter superscripts mean no significant difference (P>0.05). The same as below.

2.2 复方中草药添加剂对肉鸡血清生化指标的影响

由表5可知,复方中草药添加剂对21日龄肉鸡血清TC、TG和UREA含量以及42日龄肉鸡血清ALB、TP、TC、TG和UREA含量有显著影响(P<0.05),对21日龄肉鸡血清ALT、AST活性与ALB、TP含量以及42日龄肉鸡血清ALT、AST活性均没有显著影响(P>0.05)。与CON组相比,CHM-500组42日龄肉鸡血清TP含量显著提高(P<0.05),21日龄肉鸡TG、UREA含量与42日龄肉鸡血清TC、TG含量显著降低(P<0.05)。与CON组相比,CHM-1500组42日龄肉鸡血清ALB、TP含量显著升高(P<0.05),21和42日龄肉鸡血清TC、TG、UREA含量显著降低(P<0.05)。
表5 复方中草药添加剂对肉鸡血清生化指标的影响

Table 5 Effects of compound Chinese herbal medicine additive on serum biochemical indexes of broilers

项目
Items		 组别 Groups 标准误
SE		 P值
P-value
CON CHM-500 CHM-1500
21日龄 21 days of age
丙氨酸氨基转移酶 ALT/(U/L) 7.68 7.76 7.82 0.15 0.935
天冬氨酸氨基转移酶 AST/(U/L) 218.88 227.94 234.82 3.01 0.086
白蛋白ALB/(g/L) 12.50 12.82 13.08 0.24 0.652
总蛋白 TP/(g/L) 29.66 30.94 32.50 0.51 0.063
总胆固醇 TC/(mmol/L) 5.43a 5.10ab 4.85b 0.10 0.037
甘油三酯 TG/(mmol/L) 1.11a 0.91b 0.78b 0.05 0.010
尿素 UREA/(mmol/L) 0.67a 0.45b 0.43b 0.04 0.011
42日龄 42 days of age
丙氨酸氨基转移酶 ALT/(U/L) 7.16 6.54 6.28 0.19 0.166
天冬氨酸氨基转移酶 AST/(U/L) 208.62 204.64 214.24 2.27 0.232
白蛋白 ALB/(g/L) 10.60b 11.88ab 12.48a 0.32 0.030
总蛋白 TP/(g/L) 31.54b 33.80a 34.08a 0.44 0.019
总胆固醇 TC/(mmol/L) 4.47a 4.01b 3.31b 0.17 0.006
甘油三酯 TG/(mmol/L) 0.98a 0.68b 0.57b 0.06 0.002
尿素 UREA/(mmol/L) 0.53a 0.44ab 0.32b 0.03 0.003

2.3 复方中草药添加剂对肉鸡免疫相关指标的影响

由表6可知,复方中草药添加剂对21日龄肉鸡的脾脏指数与血清IgA、IgG和空肠黏膜sIgA含量以及42日龄肉鸡的胸腺指数与血清IgA、IgG和空肠黏膜sIgA含量有显著影响(P<0.05),对21日龄肉鸡的胸腺和法氏囊指数以及42日龄肉鸡的脾脏和法氏囊指数没有显著影响(P>0.05)。与CON组相比,CHM-500组21和42日龄肉鸡的血清IgG(P=0.051,P=0.088)和sIgA含量(P=0.057,P=0.061)有升高趋势。与CON组相比,CHM-1500组21日龄肉鸡的脾脏指数和42日龄肉鸡的胸腺指数以及21和42日龄肉鸡的血清IgA、IgG和空肠黏膜sIgA含量显著提高(P<0.05)。
表6 复方中草药添加剂对肉鸡免疫相关指标的影响

Table 6 Effects of compound Chinese herbal medicine additive on immune-related indexes of broilers

项目
Items		 组别 Groups 标准误
SE		 P值
P-value
CON CHM-500 CHM-1500
21日龄 21 days of age
脾脏指数 Spleen index/% 0.16b 0.17ab 0.19a 0.01 0.044
胸腺指数 Thymus index/% 0.35 0.37 0.41 0.02 0.532
法氏囊指数 Bursa of Fabricius index/% 0.39 0.44 0.43 0.03 0.777
免疫球蛋白A IgA/(μg/mL) 2.93b 3.11ab 3.41a 0.08 0.028
免疫球蛋白G IgG/(μg/mL) 28.27b 30.15ab 30.85a 0.43 0.030
分泌型免疫球蛋白A sIgA/(μg/mg prot) 4.88b 5.18ab 5.28a 0.07 0.036
42日龄 42 days of age
脾脏指数 Spleen index/% 0.18 0.19 0.21 0.01 0.163
胸腺指数 Thymus index/% 0.39b 0.43b 0.49a 0.01 0.009
法氏囊指数 Bursa of Fabricius index/% 0.27 0.32 0.33 0.01 0.199
免疫球蛋白A IgA/(μg/mL) 3.06b 3.25ab 3.49a 0.06 0.010
免疫球蛋白G IgG/(μg/mL) 26.58b 28.56ab 29.59a 0.52 0.042
分泌型免疫球蛋白A sIgA/(μg/mg prot) 5.03b 5.33b 5.89a 0.10 <0.001

2.4 复方中草药添加剂对肉鸡血清细胞因子含量的影响

由表7可知,复方中草药添加剂对21日龄肉鸡血清IL-4含量和42日龄肉鸡血清IL-4和IFN-γ含量有显著影响(P<0.05),对21日龄肉鸡血清IFN-γ含量没有显著影响(P>0.05)。与CON组相比,CHM-500组21日龄肉鸡血清IL-4含量显著提高(P<0.05),42日龄肉鸡血清IFN-γ含量显著降低(P<0.05),42日龄肉鸡血清IL-4含量有升高趋势(P=0.060)。与CON组相比,CHM-1500组21和42日龄肉鸡血清IL-4含量显著提高(P<0.05),42日龄肉鸡血清IFN-γ含量显著降低(P<0.05),21日龄肉鸡血清IFN-γ含量有下降趋势(P=0.081)。
表7 复方中草药添加剂对肉鸡血清细胞因子含量的影响

Table 7 Effects of compound Chinese herbal medicine additive on serum cytokine contents of broilerspg/mL

项目
Items		 组别 Groups 标准误
SE		 P值
P-value
CON CHM-500 CHM-1500
21日龄 21 days of age
白细胞介素-4 IL-4 138.16b 143.47a 146.03a 1.22 0.015
干扰素-γ IFN-γ 78.96 76.23 75.62 0.77 0.172
42日龄 42 days of age
白细胞介素-4 IL-4 126.92b 132.01ab 133.82a 1.19 0.038
干扰素-γ IFN-γ 73.11a 68.56b 65.14c 0.96 <0.001

2.5 复方中草药添加剂对肉鸡血清抗氧化指标的影响

由表8可知,复方中草药添加剂对21日龄肉鸡血清T-SOD、GSH-Px活性和MDA含量以及42日龄肉鸡血清T-SOD、GSH-Px、T-AOC活性和MDA含量有显著影响(P<0.05),对21日龄肉鸡血清T-AOC没有显著影响(P>0.05)。与CON组相比,CHM-500组21日龄肉鸡血清MDA含量显著降低(P<0.05),21日龄肉鸡血清T-SOD活性(P=0.087)和42日龄肉鸡血清GSH-Px活性(P=0.054)有升高趋势。与CON组相比,CHM-1500组21和42日龄肉鸡血清T-SOD、GSH-Px活性以及42日龄肉鸡血清T-AOC显著提高(P<0.05),21和42日龄肉鸡血清MDA含量显著降低(P<0.05),21日龄肉鸡血清T-AOC有升高趋势(P=0.064)。
表8 复方中草药添加剂对肉鸡血清抗氧化指标的影响

Table 8 Effects of compound Chinese herbal medicine additive on serum antioxidant indexes of broilers

项目
Items		 组别 Groups 标准误
SE		 P值
P-value
CON CHM-500 CHM-1500
21日龄 21 days of age
总超氧化物歧化酶 T-SOD/(U/mL) 166.24b 177.08ab 184.58a 2.91 0.024
谷胱甘肽过氧化物酶 GSH-Px/(U/mL) 606.09b 630.23b 676.18a 9.39 0.002
总抗氧化能力 T-AOC/(U/mL) 10.39 10.61 10.95 0.12 0.165
丙二醛 MDA/(nmol/mL) 3.88a 3.49b 3.16c 0.09 <0.001
42日龄 42 days of age
总超氧化物歧化酶 T-SOD/(U/mL) 182.14b 185.35b 196.02a 2.12 0.010
谷胱甘肽过氧化物酶 GSH-Px/(U/mL) 706.07b 736.74b 775.26a 8.88 0.001
总抗氧化能力 T-AOC/(U/mL) 10.54b 11.50b 12.08a 0.23 0.013
丙二醛 MDA/(nmol/mL) 4.55a 4.33ab 3.89b 0.11 0.034

2.6 复方中草药添加剂对肉鸡空肠形态的影响

复方中草药添加剂对42日龄肉鸡空肠形态的影响见图1。复方中草药添加剂显著影响肉鸡空肠的VH和V/C(P<0.05)。与CON组相比,CHM-500组和CHM-1500组肉鸡空肠的VH显著提高(P<0.05),肉鸡空肠的CD没有显著差异(P>0.05);CHM-500组肉鸡空肠的V/C显著提高(P<0.05),而CHM-1500组肉鸡空肠的V/C无显著差异(P>0.05)。
图1 复方中草药添加剂对42日龄肉鸡空肠形态的影响

数据柱标相同小写字母或无字母表示差异不显著(P>0.05),不同小写字母表示差异显著(P<0.05)。下图同。

Fig.1 Effects of compound Chinese herbal medicine additive on jejunum morphology of broilers at 42 days of age

Value columns with the same small letter or no letter mean no significant difference (P>0.05), while with different small letters mean significant difference (P<0.05). The same as below.

2.7 复方中草药添加剂对肉鸡空肠相关基因表达的影响

2.7.1 复方中草药添加剂对肉鸡空肠抗氧化相关基因表达的影响

由图2可知,复方中草药添加剂显著影响21和42日龄肉鸡空肠超氧化物歧化酶1(SOD1)、GSH-Px mRNA相对表达量和42日龄肉鸡空肠过氧化氢酶(CAT)mRNA相对表达量(P<0.05),对21日龄肉鸡空肠CAT mRNA相对表达量没有显著影响(P>0.05)。与CON组相比,CHM-500组42日龄肉鸡空肠SOD1 mRNA相对表达量显著提高(P<0.05),21和42日龄肉鸡空肠GSH-Px mRNA相对表达量有提高趋势(P=0.053,P=0.085)。与CON组相比,CHM-1500组21日龄肉鸡空肠SOD1、GSH-Px mRNA相对表达量和42日龄肉鸡空肠GSH-Px、CAT mRNA相对表达量显著提高(P<0.05),21日龄肉鸡空肠CAT mRNA相对表达量有升高趋势(P=0.054)。
图2 复方中草药添加剂对肉鸡空肠抗氧化相关基因表达的影响

Fig.2 Effects of compound Chinese herbal medicine additive on expression of jejunal antioxidant-related genes of broilers

2.7.2 复方中草药添加剂对肉鸡空肠炎性因子基因表达的影响

由图3可知,复方中草药添加剂显著影响21和42日龄肉鸡空肠IL-4 mRNA相对表达量以及21日龄肉鸡空肠IFN-γ mRNA相对表达量(P<0.05),对42日龄肉鸡空肠IFN-γ mRNA相对表达量没有显著影响(P>0.05)。与CON组相比,CHM-500组42日龄肉鸡空肠IL-4 mRNA相对表达量显著提高(P<0.05),21日龄肉鸡空肠IFN-γ mRNA相对表达量有降低趋势(P=0.061)。与CON组相比,CHM-1500组21和42日龄肉鸡空肠IL-4 mRNA相对表达量显著提高(P<0.05),21日龄肉鸡空肠IFN-γ mRNA相对表达量显著降低(P<0.05)。
图3 复方中草药添加剂对肉鸡空肠炎性因子基因表达的影响

Fig.3 Effects of compound Chinese herbal medicine additive on expression of jejunal inflammatory cytokine genes of broilers

2.7.3 复方中草药添加剂对肉鸡空肠屏障基因表达的影响

由图4可知,复方中草药添加剂显著影响21和42日龄肉鸡空肠咬合蛋白(Occludin)、闭合蛋白-1(Claudin-1)和闭锁小带蛋白-1(ZO-1)mRNA相对表达量(P<0.05)。与CON组相比,CHM-500组21日龄肉鸡空肠Occludin和ZO-1 mRNA相对表达量显著提高(P<0.05)。与CON组相比,CHM-1500组21和42日龄肉鸡空肠Occludin、Claudin-1和ZO-1 mRNA相对表达量显著提高(P<0.05)。
图4 复方中草药添加剂对肉鸡空肠屏障基因表达的影响

Fig.4 Effects of compound Chinese herbal medicine additive on expression of jejunal barrier genes of broilers

3 讨论

3.1 复方中草药添加剂对肉鸡生长性能的影响

本试验表明,复方中草药添加剂能够提高肉鸡的ADG,可以不同程度地提高饲料利用率,且随着添加量的增加,试验鸡的ADG逐渐提高,添加量为0.15%时效果最优。研究发现,马齿苋、苦参、伏龙肝组方中的小分子活性成分如黄酮[17]、多酚[18]、多糖[19]等对动物的生长均有促进作用,本试验所选用复方中草药添加剂的由马齿苋、苦参、伏龙肝组成,也含有上述成分。马齿苋含有多糖、黄酮类和多酚类物质,对生长发育具有重要意义,可以显著增加肉鸡的体重并降低F/G[20]。饲料中添加苦参饲喂松浦镜鲤30 d后,试验组的增重率明显高于对照组[21]。本试验所用马齿苋、苦参、伏龙肝复方中草药添加剂对肉仔鸡起到促生长作用可能与中药中含有的相关活性物质有关,同时其中的抗氧化与调节免疫因子可能具有同等的协同作用,从而提高了肉鸡的生长性能。

3.2 复方中草药添加剂对肉鸡血清生化指标的影响

本研究结果表明,饲粮中添加500和1 500 mg/kg复方中草药添加剂均能提高肉鸡血清中TP、ALB含量,降低血清中TC、TG、UREA含量,而对血清中ALT和AST活性无显著影响。研究表明,多种中药具有降血脂的作用,与其含有的黄酮类、酚类和多聚糖等成分有关[22]。氧化苦参碱可以降低非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠血清TC和TG及游离脂肪酸含量[23],其对肉仔鸡血液脂代谢调节也具有积极的作用[24]。也有研究报道,饲粮添加马齿苋粉、马齿苋水提物和马齿苋甲醇提取物能降低肉鸡血浆TG、TC和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量[25],这与本研究的结果类似。

3.3 复方中草药添加剂对肉鸡免疫功能的影响

本试验结果表明,饲粮中添加500和1 500 mg/kg复方中草药添加剂均能够升高肉鸡血清IgA、IgG含量,同时提高了肉鸡脾脏和胸腺指数。有研究表明,苦参生物碱具有免疫促进作用,可通过免疫调节保护小鼠免疫性肝损伤[26]。饲粮中添加马齿苋粉可提高乌鸡血清中IgA和IgG的含量[27]。马齿苋可提高环磷酰胺(CTX)免疫抑制小鼠的脾脏和胸腺指数,保护免疫器官[28]。在畜禽养殖集约化生产过程中,由于饲养密度较大,受环境中灰尘和病原体的影响,尤其是在无抗生素添加情况下,肉鸡极易发生呼吸道、消化道等炎症反应。细胞因子作为评估机体细胞免疫能力的另一重要指标,在免疫应答中发挥关键性作用。本试验结果进一步证明,饲粮中添加复方中草药添加剂能够提高肉鸡血清IL-4含量,同时降低血清IFN-γ含量。另外,肠道黏膜固有层浆细胞分泌产生的sIgA能阻止外来毒素及抗原的入侵[29],本试验所得结果也表明,饲粮中添加复方中草药添加剂可提高肉鸡空肠黏膜sIgA含量。这表明马齿苋、苦参、伏龙肝复方中草药添加剂可改善肉鸡的免疫功能并发挥抗炎活性。

3.4 复方中草药添加剂对肉鸡抗氧化能力的影响

有研究对马齿苋的总酚含量和自由基清除能力进行了测定,结果表明其提取物具有高浓度的生物活性化合物,以及更高的抗氧化和自由基清除能力[30]。本研究结果表明,饲粮中添加1 500 mg/kg的复方中草药添加剂可升高肉鸡血清中T-SOD、GSH-Px活性及T-AOC,且添加500和1 500 mg/kg的复方中草药添加剂均可降低肉鸡血清中MDA含量。相关的报道表明,氧化苦参碱可以提高超氧化歧化酶(SOD)等内源性抗氧化酶的活性,降低机体氧化应激反应中的活性氧(ROS)和MDA的产生,进而减轻机体氧化应激反应[31]。有研究显示,饲粮添加马齿苋粉、马齿苋水提物或马齿苋甲醇提取物均可以提高血浆和肝脏中SOD、CAT和GSH-Px活性,降低血浆和肝脏中MDA含量[25]。这与本试验获得的结果相似,表明马齿苋、苦参、伏龙肝组成的复方中草药添加剂在一定时期内可以有效地清除肉鸡体内过多的自由基,具有保护肉鸡免受ROS和自由基损害的潜力,以此提高机体的抗氧化能力,维持体内氧化与抗氧化系统的平衡。

3.5 复方中草药添加剂对肉鸡肠道形态的影响

VH提高和CD变浅均能表明小肠形态的改善,V/C则可以反映小肠的吸收能力,它们均是衡量肠道完整及健康的重要指标[32]。有研究发现,较长的VH和较高的V/C与肉鸡的细胞有丝分裂及营养消化吸收有关[33]。氧化苦参碱可显著增加V/C,改善环磷酰胺所致小鼠肠道机械屏障受损状况[24]。本研究结果也表明,饲粮中添加500和1 500 mg/kg的复方中草药添加剂均可显著提高肉鸡空肠VH,而添加500 mg/kg的复方中草药添加剂还显著提高了肉鸡空肠V/C。另外,本试验中各组肉鸡空肠肠绒毛排列整齐,组织结构正常,未见明显组织学病变、水肿,无炎性细胞浸润,这与张岚琨等[34]的研究结果相似,即含氧化苦参碱复合组能够更好的改善肠黏膜形态结构,促进机体消化与吸收。上述结果表明,马齿苋、苦参、伏龙肝组成的复方中草药添加剂可促进肉鸡小肠绒毛发育和营养物质的消化与吸收。

3.6 复方中草药添加剂对肉鸡空肠相关基因表达的影响

ZO-1是一种重要的肠道紧密连接蛋白,可有效抵御外源性感染,从而保持肠道屏障的完整性[35]。Occludin提供结构完整性和紧密连接的组装,并且敲低Occludin可诱导大分子的细胞旁通透性增加[36]。闭合蛋白(Claudins)在屏障形成和细胞旁渗透选择性中也发挥着重要作用[37]。本研究结果表明,饲粮中添加500和1 500 mg/kg的复方中草药添加剂能上调肉鸡空肠Occludin、Claudin-1及ZO-1的表达。有研究发现,马齿苋水提物治疗热应激小鼠后,小鼠空肠的ZO-1 mRNA转录水平升高[38]。上述结果表明饲粮中添加由马齿苋、苦参、伏龙肝组成的复方中草药添加剂可调节紧密连接蛋白表达,改善肉鸡的肠道完整性,增强肠道屏障功能,并且肠道屏障功能的增强可能与肠道形态结构的改善有关。
肠道炎症的控制是健康养殖的关键,同时抗氧化相关基因的表达水平决定了生物体的抗氧化能力。本研究结果表明,饲粮中添加500 mg/kg的复方中草药添加剂能显著增加42日龄肉鸡空肠SOD1、IL-4 mRNA相对表达量;添加1 500 mg/kg的复方中草药添加剂能显著增加21和42日龄肉鸡空肠GSH-Px、IL-4 mRNA相对表达量,显著提高21日龄肉鸡空肠SOD1 mRNA相对表达量和42日龄肉鸡空肠CAT mRNA相对表达量,显著降低21日龄肉鸡空肠IFN-γ mRNA相对表达量。有研究发现,马齿苋多糖可提高环磷酰胺免疫抑制小鼠免疫器官指数,促进免疫细胞因子白细胞介素-2(IL-2)、IL-4、白细胞介素-10(IL-10)和IFN-γ的生成[38]。这表明,饲粮中添加马齿苋、苦参、伏龙肝组成的复方中草药添加剂对肉鸡的肠黏膜功能和肠道环境起到了一定的改善作用,其所含的各种活性物质可能有助于改善肠道屏障功能,提高肉鸡的抗氧化和抗炎功能。

4 结论

本试验选用马齿苋、苦参、伏龙肝组成的复方中草药添加剂可以改善肉鸡的生长性能,提高饲料利用率,尤其是添加1 500 mg/kg时,能通过提高肉鸡免疫器官指数以及血清IgA、IgG、IL-4和空肠黏膜sIgA含量来提高机体整体免疫力,并可通过提高血清T-SOD、GSH-Px活性与T-AOC以及上调空肠抗氧化相关基因的表达来提高机体抗氧化能力,同时还可改善肠道形态结构和提高肠上皮屏障功能。

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