沙葱黄酮对肉羊免疫功能的影响

木其尔; 陈乐祥; 敖长金; 哈斯额尔敦; 白晨; 曹琪娜; 郑彦楷; 哈斯吉如和; 宝音图; 萨茹丽

doi:10.12418/CJAN2023.366

动物营养学报 >

2023 , Vol. 35 >Issue 6: 3943 - 3954

DOI: https://doi.org/10.12418/CJAN2023.366

研究论文

沙葱黄酮对肉羊免疫功能的影响

木其尔 ^,¹ ,
陈乐祥 ¹^,^* ,
敖长金 ¹ ,
哈斯额尔敦 ¹ ,
白晨 ¹ ,
曹琪娜 ¹ ,
郑彦楷 ¹ ,
哈斯吉如和 ² ,
宝音图 ³ ,
萨茹丽 ^,¹^,^**

展开

¹ 内蒙古农业大学动物科学学院,呼和浩特 010018
² 赤峰市巴林右旗巴彦塔拉苏木人民政府,赤峰 025150
³ 赤峰市巴林右旗巴彦塔拉苏木社会保障和技术推广中心,赤峰 025150

**萨茹丽,讲师,硕士生导师,E-mail: qisaruli@126.com

*同等贡献作者

木其尔(1989—),女,内蒙古赤峰人,讲师,博士,从事动物营养与畜产品品质研究。E-mail: hamuqier1989@126.com

收稿日期: 2022-11-09

网络出版日期: 2023-06-08

基金资助

内蒙古自治区自然科学基金项目(2021BS03042)

收起

Effects of Allium mongolicum Regel Flavonoids on Immune Function of Mutton Sheep

MU Qier ^,¹ ,
CHEN Lexiang ¹ ,
AO Changjin ¹ ,
KHAS Erdene ¹ ,
BAI Chen ¹ ,
CAO Qina ¹ ,
ZHENG Yankai ¹ ,
HASI Jiruhe ² ,
BAO Yintu ³ ,
SA Ruli ^,¹^,^**

Expand

¹ College of Animal Science, Inner Mongolia Agricultural University, Hohhot 010018, China
² People’s Government of Bayantala Town, Baarin Right Banner, Chifeng City, Chifeng 025150, China
³ Bayantala Town Social Security and Technology Promotion Center, Baarin Right Banner, Chifeng City, Chifeng 025150, China

**lecturer, E-mail: qisaruli@126.com

*Contributed equally

Received date: 2022-11-09

Online published: 2023-06-08

Fold

摘要

本试验旨在探究沙葱黄酮对肉羊免疫功能的影响,以确定其在肉羊饲粮中的适宜添加水平。选取6月龄、体重[(39.9±3.2) kg]相近、健康的小尾寒羊公羊60只,随机分为4组,每组15只。对照组(CK)饲喂基础饲粮,3个试验组在基础饲粮中额外添加11(AMFL组)、22(AMFM组)和33 mg/kg(AMFH组)的沙葱黄酮。预试期15 d,正试期60 d。结果表明:1)第60天时,AMFL组、AMFM组、AMFH组的血清酸性磷酸酶(ACP)活性显著高于CK组(P<0.05),AMFH组的血清溶菌酶(LZM)活性显著高于CK组(P<0.05)。2)第60天时,AMFH组的血清免疫球蛋白G(IgG)含量显著高于CK组(P<0.05)。3)与CK组相比,AMFL组、AMFM组、AMFH组的第15天、第30天、第45天和第60天外周血CD4⁺T淋巴细胞数量和CD4⁺/CD8⁺比值显著升高(P<0.05),第15天、第30天和第60天CD8⁺T淋巴细胞数量显著降低(P<0.05)。第60天时,AMFL组、AMFM组、AMFH组的血清白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-6(IL-6)、γ-干扰素(IFN-γ)含量显著高于CK组(P<0.05),AMFM组和AMFH组的血清白细胞介素-4(IL-4)含量显著高于CK组(P<0.05)。综上所述,饲粮中添加沙葱黄酮可不同程度地提升肉羊非特异性免疫和特异性免疫,并呈现时间和剂量依赖性。根据各指标综合评价,在本试验条件下,饲粮中添加33 mg/kg沙葱黄酮对肉羊免疫调节效果最佳。

关键词： 肉羊; 沙葱; 黄酮; 非特异性免疫; 特异性免疫

本文引用格式

木其尔 , 陈乐祥 , 敖长金 , 哈斯额尔敦 , 白晨 , 曹琪娜 , 郑彦楷 , 哈斯吉如和 , 宝音图 , 萨茹丽 . 沙葱黄酮对肉羊免疫功能的影响[J]. 动物营养学报, 2023 , 35(6) : 3943 -3954 . DOI: 10.12418/CJAN2023.366

Abstract

The purpose of this experiment was to explore the effects of Allium mongolicum Regel flavonoids on immune function of mutton sheep, and to determine its optimal supplemental level in diet for mutton sheep. Sixty healthy 6-month-old small-tailed Han sheep with similar body weight [(39.9±3.2) kg] were randomly divided into 4 groups with 15 sheep in each group. The control group (CK group) was fed a basic diet, and three experimental groups were fed basic diets supplemented with 11 (AMFL group), 22 (AMFM group) and 33 mg/kg (AMFH group) Allium mongolicum Regel flavonoids, respectively. The pre-test period was 15 days, and the trial period was 60 days. The results showed as follows: 1) on day 60, the serum acid phosphatase (ACP) activity of AMFL group, AMFM group and AMFH group was significantly higher than that of CK group (P<0.05), and the serum lysozyme (LZM) activity of AMFH group was significantly higher than that of CK group (P<0.05). 2) On day 60, the serum immunoglobulin G (IgG) content of AMFH group was significantly higher than that of CK group (P<0.05). 3) Compared with CK group, the number of CD4⁺ T lymphocytes and CD4⁺/CD8⁺ ratio value in peripheral blood on day 15, day 30, day 45 and day 60 of AMFL group, AMFM group and AMFH group were significantly increased (P<0.05), and the CD8⁺ T lymphocytes number on day 15, day 30 and day 60 was significantly increased (P<0.05). On day 60, the contents of interleukin-1β (IL-1β), interleukin-2 (IL-2), interleukin-6 (IL-6) and γ-interferon (IFN-γ) in serum of AMFL group, AMFM group and AMFH group were significantly higher than those of CK group (P<0.05), and the serum interleukin-4 (IL-4) content of AMFM group and AMFH group was significantly higher than that of CK group (P<0.05). To sum up, the addition of Allium mongolicum Regel flavonoids in the diet can improve the non-specific immunity and specific immunity of mutton sheep in varying degrees, and it is time-dependent and dose-dependent. According to the comprehensive evaluation of various indicators, under the test conditions, the addition of 33 mg/kg Allium mongolicum Regel flavonoids has the best effect on the immune regulation of mutton sheep.

Key words： mutton sheep; Allium mongolicum Regel; flavonoids; non-specific immunity; specific immunity

黄酮类化合物属于多酚类化合物,是多种植物、水果、蔬菜中一类主要的植物次生代谢物^[1]。黄酮类化合物是以C3-C6-C3为基本结构,根据B环连接位置、C环饱和程度和氧化程度,可以进一步分为不同的亚类^[2]。正是由于黄酮类化合物结构的多样性,使其具有抗炎、抗病毒、抗氧化、免疫调节、神经保护等多种生物学特性^[3-4]。Wyse等^[5]研究表明,黄酮类化合物与牲畜机体新陈代谢、免疫功能、繁殖性能以及生长性能之间具有密切的相关性。饲粮添加大豆黄酮后,犊牛的蛋白质消化率、抗氧化能力和免疫球蛋白含量均有所提高^[6]。Yin等^[7]研究发现,甘草黄酮可以调节免疫相关通路、免疫因子活性,抑制炎症反应等,从而提高仔猪的免疫功能。

沙葱,学名蒙古韭,主要分布在我国西北地区,是一种富含多糖、精油和黄酮等活性成分的葱属植物^[8]。本课题组研究表明,饲喂沙葱黄酮45 d后肉羊平均日采食量和平均日增重显著提高,料重比显著降低^[9]。黄酮可有效提高淋巴细胞增殖率和γ-干扰素(IFN-γ)mRNA的表达量^[10],沙葱多糖和沙葱精油对提高肉羊血清中免疫球蛋白和免疫活性因子含量等方面均有显著作用^[11-12]。目前,沙葱黄酮在肉羊免疫功能方面的系统性报道较为少见。因此,本试验旨在从非特异性免疫和特异性免疫指标着手,综合探讨沙葱黄酮对肉羊免疫功能的影响及其在肉羊饲粮中的适宜添加水平,以期为进一步探明黄酮类化合物与机体免疫机制之间的相关性提供理论基础。

1 材料与方法

1.1 沙葱黄酮的制备

试验所用沙葱粉采购自内蒙古自治区阿拉善左旗,沙葱黄酮的制备参照萨茹丽^[13]的超声波提取法,由本实验室自制,将沙葱粉和石油醚按1∶10混合进行脱脂脱色,不断搅拌处理24 h后充分静置,去除上层石油醚,待自然风干得到脱脂脱色的沙葱粉,以1∶30 g/mL的料液比在脱脂脱色粉中加入75%乙醇,40 ℃超声提取15 min。再经浓缩冻干后得到黄褐色粉末,-20 ℃保存待用。

1.2 试验设计与饲养管理

试验在内蒙古自治区巴彦淖尔市临河区富川肉羊养殖示范基地开展。选用6月龄、体重[(39.9±3.2) kg]相近、健康的小尾寒羊公羊60只,采用单因素多水平随机完全区组试验设计,共分为4组,每组15只。对照组(CK组)饲喂基础饲粮,3个试验组在基础饲粮中额外添加11(AMFL组)、22(AMFM组)和33 mg/kg(AMFH组)的沙葱黄酮。本试验中沙葱黄酮添加水平参考包玲玲^[14]试验所得结果。试验期75 d,预试期15 d,正试期60 d。正试期于每天06:00和18:00各饲喂1次,饲喂时将沙葱黄酮与精料均匀混合,以达到肉羊全部摄入沙葱黄酮的理想效果。试验期间确保每组饲养环境相似,每组剩料量在投喂量的10%左右,自由采食和饮水。基础饲粮组成及营养水平见表1。

表1 基础饲粮组成及营养水平(风干基础)

Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet (air-dry basis)%

项目 Items	含量 Content
原料 Ingredient
羊草 Chinese wildrye	32.00
苜蓿 Alfalfa	17.80
玉米 Corn	23.00
小麦麸 Wheat bran	2.87
向日葵仁饼 Sunflower seed meal	16.92
豌豆茎叶 Pea stem and leaf	2.45
苹果渣 Pomace	2.45
磷酸氢钙 CaHPO₄	0.72
食盐 NaCl	0.79
预混料 Premix¹⁾	1.00
合计 Total	100.00
营养水平 Nutrient levels²⁾
消化能 DE/(MJ/kg)	16.88
粗蛋白质 CP	16.33
中性洗涤纤维 NDF	37.92
酸性洗涤纤维 ADF	29.57
钙 Ca	1.39
磷 P	0.51

1)预混料为每千克饲粮提供 The premix provided the following per kg of the diet: Fe (as ferrous sulfate) 25 mg,Zn (as zinc sulfate) 29 mg,Cu (as copper sulfate) 8 mg,Mn (as manganese sulfate) 30 mg,I (as potassium iodide) 0.04 mg,Co (as cobalt sulfate) 0.1 mg,VA 3 200 IU,VD₃ 1 200 IU,VE 20 IU。

2)消化能为计算值,其余为实测值。DE was a calculated value, while the others were measured values.

1.3 样品采集

在正试期的第1天、第15天、第30天、第45天、第60天晨饲前颈静脉采血5 mL,静置40 min待血清自然析出后,在2 500 r/min条件下离心10 min。用干燥EP管收集血清,-20 ℃保存待测。

1.4 测定指标与方法

1.4.1 血清非特异性免疫指标的测定

酸性磷酸酶(ACP)、溶菌酶(LZM)活性采用试剂盒(南京建成生物工程研究所),参照试剂盒使用说明进行测定。

1.4.2 血清特异性免疫指标的测定

免疫球蛋白G(IgG)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-6(IL-6)、IFN-γ含量采用试剂盒(北京华英生物技术研究所),参照试剂盒使用说明进行测定。采用流式细胞术测定CD4⁺T淋巴细胞和CD8⁺T淋巴细胞数量,并计算T淋巴细胞CD4⁺/CD8⁺比值,小鼠抗绵羊CD4⁺单克隆抗体(生产批号:MCA2213F)、小鼠抗绵羊CD8⁺单克隆抗体(生产批号:MCA2216F)采购自英国AbD Serotec公司。

1.5 数据统计与分析

试验数据用Excel 2016初步整理,采用SAS 9.0软件进行单因素方差分析,差异显著者采用Duncan氏法进行多重比较。数据以“平均值±标准差”表示,P<0.05表示差异显著,P>0.05表示差异不显著。

2 结果

2.1 沙葱黄酮对肉羊非特异性免疫指标的影响

2.1.1 沙葱黄酮对肉羊血清ACP活性的影响

由表2可见,第15天,与CK组相比,AMFL组和AMFM组的血清ACP活性显著升高(P<0.05),AMFH组无显著差异(P>0.05)。第30天,与CK组相比,3个试验组的血清ACP活性显著升高(P<0.05),其中AMFH组最高。第45天,与CK组相比,3个试验组的血清ACP活性显著升高(P<0.05),且AMFM组和AMFH组显著高于AMFL组(P<0.05)。第60天,与CK组相比,3个试验组的血清ACP活性显著升高(P<0.05),且AMFM组显著高于AMFH组和AMFL组(P<0.05),AMFH组显著高于AMFL组(P<0.05)。AMFL组、AMFM组、AMFH组的血清ACP活性分别在第60天、第45天、第15天开始显著升高(P<0.05)。

表2 沙葱黄酮对肉羊血清ACP活性的影响

Table 2 Effects of Allium mongolicum Regel flavonoids on serum ACP activity of mutton sheepU/dL

组别 Groups	第1天 Day 1	第15天 Day 15	第30天 Day 30	第45天 Day 45	第60天 Day 60
CK	5.14±0.66^AB	5.52±0.65^bA	4.98±0.63^cB	5.06±0.52^cAB	5.08±0.5^dAB
AMFL	5.53±0.74^B	6.26±0.96^aAB	5.67±0.88^bAB	6.27±1.05^bAB	6.35±1.05^cA
AMFM	5.57±0.67^C	6.44±1.19^aC	6.04±1.07^abC	7.59±1.45^aB	9.75±2.03^aA
AMFH	5.29±0.54^D	6.09±0.72^abC	6.63±0.78^aBC	7.06±0.76^aB	8.52±1.15^bA

同行数据肩标不同大写字母表示差异显著(P<0.05),相同大写字母或无字母表示差异不显著(P>0.05)。同列数据肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05),相同小写字母或无字母表示差异不显著(P>0.05)。下表同。

In the same row, values with different capital letter superscripts mean significant difference (P<0.05), while with the same capital letter superscripts or no letter superscripts mean no significant difference (P>0.05). In the same column, values with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05), while with the same small letter superscripts or no letter superscripts mean no significant difference (P>0.05). The same as below.

2.1.2 沙葱黄酮对肉羊血清LZM活性的影响

由表3可见,第15天,各组之间血清LZM活性差异不显著(P>0.05)。第30天,AMFH组的血清LZM活性最高,显著高于CK组(P<0.05)。第45天,AMFL组和AMFH组的血清LZM活性显著高于CK组(P<0.05)。第60天,AMFH组的血清LZM活性显著高于CK组(P<0.05)。AMFL组和AMFH组的血清LZM活性分别在第15天、第30天开始显著升高(P<0.05);AMFM组的血清LZM活性在第1~60天呈上升趋势,差异不显著(P>0.05)。

表3 沙葱黄酮对肉羊血清LZM活性的影响

Table 3 Effects of Allium mongolicum Regel flavonoids on serum LZM activity of mutton sheepμg/mL

组别 Groups	第1天 Day 1	第15天 Day 15	第30天 Day 30	第45天 Day 45	第60天 Day 60
CK	1.51±0.23	1.54±0.28	1.55±0.29^b	1.55±0.2^b	1.56±0.18^b
AMFL	1.46±0.13^B	1.85±0.51^A	1.76±0.13^abA	1.77±0.22^aA	1.80±0.28^abA
AMFM	1.50±0.33	1.71±0.42	1.71±0.22^ab	1.72±0.16^ab	1.78±0.33^ab
AMFH	1.45±0.27^B	1.66±0.29^AB	1.86±0.32^aA	1.90±0.19^aA	1.94±0.36^aA

2.2 沙葱黄酮对肉羊血清特异性免疫指标的影响

2.2.1 沙葱黄酮对肉羊血清IgG含量的影响

由表4可见,第15~30天,各组之间血清IgG含量差异不显著(P>0.05)。第45天,AMFH组和AMFM组的血清IgG含量显著高于AMFL组(P<0.05),与CK组无显著差异(P>0.05)。第60天,AMFH组的血清IgG含量显著高于CK组及其他试验组(P<0.05)。CK组的血清IgG含量在第30天开始显著升高(P<0.05),AMFL组、AMFM组、AMFH组的血清IgG含量分别在第30天、第15天、第15天开始显著升高(P<0.05)。

表4 沙葱黄酮对肉羊血清IgG含量的影响

Table 4 Effects of Allium mongolicum Regel flavonoids on serum IgG content of mutton sheepg/L

组别 Groups	第1天 Day 1	第15天 Day 15	第30天 Day 30	第45天 Day 45	第60天 Day 60
CK	16.65±1.63^B	17.14±0.80^AB	17.89±0.77^A	17.84±0.92^abA	17.90±1.22^bA
AMFL	16.61±1.91^B	17.24±0.60^AB	17.70±1.16^A	17.50±0.86^bAB	17.96±1.25^bA
AMFM	16.46±1.29^C	17.45±0.53^B	17.85±1.35^AB	18.10±0.52^aAB	17.90±0.86^bA
AMFH	16.36±0.95^C	17.27±0.62^B	17.54±1.24^B	18.26±0.53^aA	18.21±1.35^aA

2.2.2 沙葱黄酮对肉羊外周血CD4⁺T淋巴细胞数量的影响

肉羊外周血T淋巴细胞及CD4⁺T淋巴细胞、CD8⁺T淋巴细胞的荧光染色情况见图1。

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图1 肉羊外周血T淋巴细胞和未染色T淋巴细胞(A)、T淋巴细胞和单染CD4⁺T淋巴细胞(B)及T淋巴细胞和单染CD8⁺T淋巴细胞(C)

Fig.1 T lymphocytes and not dyed T lymphocytes (A), T lymphocytes and single dyed CD4⁺ T lymphocytes (B) and T lymphocyte and single dyed CD8⁺ T lymphocytes (C) in peripheral blood of mutton sheep

由表5可见,第15~45天,3个试验组的外周血CD4⁺T淋巴细胞数量显著高于CK组(P<0.05),而各试验组之间差异不显著(P>0.05)。第60天,3个试验组的外周血CD4⁺T淋巴细胞数量显著高于CK组(P<0.05),AMFM组、AMFH组显著高于AMFL组(P<0.05)。CK组及各试验组的外周血CD4⁺T淋巴细胞数量均在第15天开始显著升高(P<0.05)。

表5 沙葱黄酮对肉羊外周血CD4⁺T淋巴细胞数量的影响

Table 5 Effects of Allium mongolicum Regel flavonoids on number of CD4⁺ T lymphocytes in peripheral blood of mutton sheep%

组别 Groups	第1天 Day 1	第15天 Day 15	第30天 Day 30	第45天 Day 45	第60天 Day 60
CK	21.93±0.18^C	23.94±0.63^bB	24.39±0.69^bA	24.46±0.79^bA	27.74±1.13^cA
AMFL	21.26±0.86^C	28.43±0.99^aB	30.37±1.59^aB	31.58±3.50^aB	38.70±0.44^bA
AMFM	21.88±0.74^D	27.92±0.83^aC	30.72±0.07^aB	31.54±2.37^aB	40.77±0.98^aA
AMFH	21.94±1.52^D	28.47±0.35^aC	31.37±0.82^aB	31.62±0.69^aB	40.27±0.17^aA

2.2.3 沙葱黄酮对肉羊外周血CD8⁺T淋巴细胞数量的影响

由表6可见,第15~30天,3个试验组的外周血CD8⁺T淋巴细胞数量显著低于CK组(P<0.05)。第45天,与CK组相比,AMFM组和AMFH组的外周血CD8⁺T淋巴细胞数量显著降低(P<0.05)。第60天,AMFM组和AMFH组的外周血CD8⁺T淋巴细胞数量显著低于AMFL组(P<0.05),AMFL组显著低于CK组(P<0.05)。CK组的外周血CD8⁺T淋巴细胞数量在第30天开始显著降低(P<0.05),3个试验组的外周血CD8⁺T淋巴细胞数量均在第15天开始显著降低(P<0.05)。

表6 沙葱黄酮对肉羊外周血CD8⁺T淋巴细胞数量的影响

Table 6 Effects of Allium mongolicum Regel flavonoids on number of CD8⁺ T lymphocytes in peripheral blood of mutton sheep%

组别 Groups	第1天 Day 1	第15天 Day 15	第30天 Day 30	第45天 Day 45	第60天 Day 60
CK	32.25±0.73^A	31.81±1.24^aA	31.56±1.35^aB	27.34±0.96^aB	27.62±0.28^aB
AMFL	32.58±0.79^A	27.17±2.29^bB	26.03±0.72^bcB	25.94±1.52^abB	26.09±0.98^bB
AMFM	33.83±1.09^A	27.34±0.33^bB	24.85±0.41^cC	25.05±0.65^bC	23.97±0.94^cC
AMFH	33.63±1.19^A	27.21±0.92^bB	26.00±0.90^bcBC	24.61±0.74^bCD	23.90±0.75^cD

2.2.4 沙葱黄酮对肉羊外周血T淋巴细胞CD4⁺/CD8⁺比值的影响

由表7可见,第15~60天,3个试验组的外周血T淋巴细胞CD4⁺/CD8⁺比值均显著高于CK组(P<0.05);其中第30天时AMFH组显著高于AMFL组(P<0.05),第60天时AMFM组和AMFH组显著高于AMFL组(P<0.05)。CK组的外周血T淋巴细胞CD4⁺/CD8⁺比值在第30天开始显著升高(P<0.05),3个试验组的外周血T淋巴细胞CD4⁺/CD8⁺比值均在第15天开始显著升高(P<0.05)。

表7 沙葱黄酮对肉羊外周血T淋巴细胞CD4⁺/CD8⁺比值的影响

Table 7 Effects of Allium mongolicum Regel flavonoids on CD4⁺/CD8⁺ ratio value in peripheral blood T lymphocytes of mutton sheep

组别 Groups	第1天 Day 1	第15天 Day 15	第30天 Day 30	第45天 Day 45	第60天 Day 60
CK	0.68±0.02^D	0.75±0.02^bCD	0.77±0.05^cC	0.89±0.06^bB	1.00±0.05^cA
AMFL	0.65±0.04^D	1.05±0.12^aC	1.17±0.04^bBC	1.22±0.11^aB	1.49±0.07^bA
AMFM	0.65±0.03^D	1.02±0.02^aC	1.24±0.02^abB	1.26±0.10^aB	1.70±0.10^aA
AMFH	0.65±0.06^E	1.05±0.05^aD	1.21±0.01^aC	1.29±0.03^aB	1.69±0.05^aA

2.2.5 沙葱黄酮对肉羊血清IL-1β含量的影响

由表8可见,第15天,各组之间血清IL-1β含量差异不显著(P>0.05)。第30天,AMFM组和AMFH组的血清IL-1β含量显著高于CK组(P<0.05)。第45天,AMFH组的血清IL-1β含量显著高于CK组(P<0.05)。第60天,3个试验组的血清IL-1β含量均显著高于CK组(P<0.05),AMFH组显著高于AMFL组(P<0.05)。3个试验组的血清IL-1β含量均在第30天开始显著升高(P<0.05)。

表8 沙葱黄酮对肉羊血清IL-1β含量的影响

Table 8 Effects of Allium mongolicum Regel flavonoids on serum IL-1β content of mutton sheeppg/mL

组别 Groups	第1天 Day 1	第15天 Day 15	第30天 Day 30	第45天 Day 45	第60天 Day 60
CK	26.59±5.49	28.24±5.81	28.18±6.07^b	28.75±7.36^b	28.82±3.67^c
AMFL	26.16±7.22^B	26.30±6.79^B	33.12±7.49^abA	32.87±8.33^abA	35.37±8.93^bA
AMFM	26.39±5.14^C	29.29±6.47^BC	35.52±10.45^aAB	35.27±9.69^abAB	38.78±8.45^abA
AMFH	26.98±2.92^C	30.88±8.98^BC	35.79±10.46^aB	37.85±9.16^aAB	43.21±11.69^aA

2.2.6 沙葱黄酮对肉羊血清IL-2含量的影响

由表9可见,第15天,与CK组相比,AMFH组的血清IL-2含量显著升高(P<0.05)。第30天,AMFH组的血清IL-2含量显著高于CK组、AMFL组和AMFM组(P<0.05)。第45天,AMFM组和AMFH组的血清IL-2含量显著高于AMFL组及CK组(P<0.05)。第60天,与CK组相比,3个试验组的血清IL-2含量显著升高(P<0.05)。CK组及3个试验组的血清IL-2含量均在第30天开始显著升高(P<0.05)。

表9 沙葱黄酮对肉羊血清IL-2含量的影响

Table 9 Effects of Allium mongolicum Regel flavonoids on serum IL-2 content of mutton sheeppg/mL

组别 Groups	第1天 Day 1	第15天 Day 15	第30天 Day 30	第45天 Day 45	第60天 Day 60
CK	14.51±1.10^C	14.79±1.59^bC	16.59±1.99^bB	17.36±0.98^bAB	17.95±0.78^bA
AMFL	14.53±0.85^C	15.05±2.15^abBC	16.27±2.41^bB	18.59±2.04^bA	19.93±2.76^aA
AMFM	15.22±1.64^C	15.80±1.63^abC	17.94±2.70^bB	20.04±0.79^aA	19.78±2.31^aA
AMFH	15.09±1.17^B	16.40±2.32^aB	20.32±1.73^aA	21.29±2.62^aA	20.74±1.64^aA

2.2.7 沙葱黄酮对肉羊血清IL-4含量的影响

由表10可见,第15天,3个试验组的血清IL-4含量与CK组无显著差异(P>0.05),AMFH组的血清IL-4含量显著高于AMFL组和AMFM组(P<0.05)。第30天,AMFM组的血清IL-4含量最高,与其他组无显著差异(P>0.05)。第45天,AMFM组的血清IL-4含量显著高于CK组(P<0.05)。第60天,AMFM组和AMFH组的血清IL-4含量显著高于CK组(P<0.05)。AMFL组和AMFM组的血清IL-4含量在第15天时有下降趋势(P>0.05),到第30天时显著回升(P<0.05);其中AMFM组的血清IL-4含量在第45天开始显著升高(P<0.05),AMFH组的血清IL-4含量在第1~60天呈上升趋势,差异不显著(P>0.05)。

表10 沙葱黄酮对肉羊血清IL-4含量的影响

Table 10 Effects of Allium mongolicum Regel flavonoids on serum IL-4 content of mutton sheeppg/mL

组别 Groups	第1天 Day 1	第15天 Day 15	第30天 Day 30	第45天 Day 45	第60天 Day 60
CK	3.20±0.39	3.40±0.39^ab	3.25±0.62	3.41±0.68^b	3.26±0.49^b
AMFL	3.48±0.64^AB	3.20±0.48^bB	3.68±0.59^A	3.78±0.62^abA	3.68±0.55^abA
AMFM	3.53±0.57^BC	3.17±0.62^bC	3.72±0.49^AB	4.13±0.55^aA	4.01±0.68^aA
AMFH	3.57±0.50	3.66±0.25^a	3.56±0.61	3.88±0.64^ab	3.89±0.54^a

2.2.8 沙葱黄酮对肉羊血清IL-6含量的影响

由表11可见,第15天,各组之间血清IL-6含量无显著差异(P>0.05)。第30天,AMFH组的血清IL-6含量显著高于CK组(P<0.05),AMFL组、AMFM组与CK组相比无显著差异(P>0.05)。第45~60天,AMFL组、AMFM组和AMFH组的血清IL-6含量均显著高于CK组(P<0.05),各试验组之间无显著差异(P>0.05)。CK组的血清IL-6含量在第60天开始显著升高(P<0.05),AMFL组、AMFM组和AMFH组的血清IL-6含量分别在第30天、第45天、第30天开始显著升高(P<0.05)。

表11 沙葱黄酮对肉羊血清IL-6含量的影响

Table 11 Effects of Allium mongolicum Regel flavonoids on serum IL-6 content of mutton sheeppg/mL

组别 Groups	第1天 Day 1	第15天 Day 15	第30天 Day 30	第45天 Day 45	第60天 Day 60
CK	117.31±7.01^B	119.29±24.33^B	120.12±6.32^bB	121.59±9.66^bB	138.31±20.91^bA
AMFL	115.27±9.92^C	127.26±17.56^BC	132.37±19.95^abB	147.26±18.21^aA	149.43±20.64^aA
AMFM	115.36±11.66^C	126.98±24.70^BC	125.02±20.22^abC	142.39±29.21^aB	165.70±15.89^aA
AMFH	116.60±11.09^B	131.11±22.38^AB	140.33±15.82^aA	140.33±30.31^aA	142.67±17.03^aA

2.2.9 沙葱黄酮对肉羊血清IFN-γ含量的影响

由表12可见,第15天,各组之间血清IFN-γ含量无显著差异(P>0.05)。第30天,AMFH组的血清IFN-γ含量显著高于CK组(P<0.05),AMFL组、AMFM组的血清IFN-γ含量也高于CK组,但差异不显著(P>0.05)。第45天,AMFL组的血清IFN-γ含量显著高于CK组(P<0.05)。第60天,AMFL组、AMFM组、AMFH组的血清IFN-γ含量均显著高于CK组(P<0.05),其中AMFH组最高。CK组及各试验组的血清IFN-γ含量均在第30天开始显著升高(P<0.05)。

表12 沙葱黄酮对肉羊血清IFN-γ含量的影响

Table 12 Effects of Allium mongolicum Regel flavonoids on serum IFN-γ content of mutton sheeppg/mL

组别 Groups	第1天 Day 1	第15天 Day 15	第30天 Day 30	第45天 Day 45	第60天 Day 60
CK	37.95±4.32^C	42.05±4.65^C	52.47±8.54^bB	60.23±12.97^bA	64.28±8.49^cA
AMFL	35.49±5.33^C	43.27±10.63^C	58.34±16.04^abB	74.12±13.20^aA	80.09±9.55^abA
AMFM	36.71±8.48^C	43.75±15.09^C	58.04±15.12^abB	63.71±10.12^abB	74.26±9.06^bA
AMFH	37.88±8.86^C	48.12±13.35^C	67.95±15.42^aB	65.70±19.47^abB	80.37±7.57^abA

3 讨论

3.1 沙葱黄酮对肉羊非特异性免疫功能的影响

非特异性免疫功能主要表现为吞噬细胞的吞噬能力、抑菌类物质的产生和相关免疫酶的活性。ACP作为溶酶体的主要水解酶,具有杀死入侵病原体,提升对异物的降解速率和吞噬细胞的吞噬功能^[15]。LZM可将细菌细胞壁中的肽聚糖水解为可溶性糖,使细胞壁破裂达到溶菌效果^[16]。血清ACP和LZM活性较高对机体抵御外部病原体具有积极作用。茗葱黄酮可显著提高免疫抑制小鼠血清ACP和LZM活性,随着剂量增加呈递增趋势,表明茗葱黄酮对小鼠非特异性免疫具有良好的调节作用并与添加剂量呈正相关^[17]。皮建辉等^[18]在地塞米松免疫抑制小鼠模型的研究中发现,金银花黄酮可显著提高血清ACP、LZM和AKP活性。陈密等^[19]研究发现,高剂量(388.4 mg/kg)芦丁可显著提高草鱼血清LZM活性。骨碎补黄酮对免疫抑制小鼠脾脏ACP活性提升显著,与左旋咪唑免疫调节剂组具有类似的促进作用^[20]。本试验中,饲粮中添加不同水平沙葱黄酮对肉羊血清ACP活性具有提升效果,且在饲喂第60天时效果最佳,血清LZM活性在添加33 mg/kg沙葱黄酮时最高。由此可见,沙葱黄酮对肉羊非特异性免疫的调节作用具有一定的时间和剂量依赖性,同时反映了沙葱黄酮及其代谢产物可能通过刺激T淋巴细胞分泌细胞因子有效激活巨噬细胞,具体机制仍需进一步研究。

3.2 沙葱黄酮对肉羊特异性免疫功能的影响

3.2.1 沙葱黄酮对肉羊体液免疫的影响

IgA、IgG、IgM是评价体液免疫功能和状态的重要标志物,其中IgG由脾脏和淋巴结的浆细胞产生和分泌,占所有血浆蛋白的10%~20%^[21],占总免疫球蛋白的70%~75%^[22],在机体受到抗原刺激后具有沉淀抗原、吞噬细菌、中和病毒等免疫功能。众多研究表明,黄酮类化合物对机体体液免疫有一定的影响。研究发现,饲喂甜橙皮提取物可显著提高肉鸡血清IgG含量,通过调节免疫球蛋白的分泌进而调节机体体液免疫^[23]。Zhang等^[24]研究发现,母鼠饲粮中添加50 mg/kg大豆黄酮可极显著提高血清IgG含量。研究报道,肉仔鸡采食黄苓黄酮后血清IgG含量显著提高,但对血清IgA、IgM含量无显著影响^[25]。Kong等^[26]研究表明,给断奶前后犊牛饲喂桑叶黄酮可显著提高犊牛血清IgG含量,而血清IgA和IgM含量不受影响。在奶牛饲喂竹叶提取物(30 g/d)的试验发现,血浆IgG含量显著提高,但随着添加水平(60、90 g/d)的增加,血浆IgG含量呈现下降趋势^[27]。在本试验中,饲粮中添加33 mg/kg沙葱黄酮显著提高了血清IgG含量,与上述研究结果相似。而在饲粮中添加11和22 mg/kg的沙葱黄酮对血清IgG含量无显著影响。在部分黄酮类化合物的免疫试验中也得出过类似结果,如芹菜素饲喂小白鼠^[28]、蜂胶黄酮饲喂犊牛^[29]、苜蓿黄酮饲喂奶牛^[30]并未对血清IgG含量有提升效果。不同试验研究出现的分歧结合本试验所呈现的结果,究其原因可能是由于黄酮类化合物在饲粮中添加水平的不同,同时也存在试验动物不同、所处生理阶段不同等影响结果的潜在因素。

3.2.2 沙葱黄酮对肉羊细胞免疫的影响

T淋巴细胞可根据细胞表面的不同标志物分为CD4⁺和CD8⁺两大亚群,对机体的正常免疫调节起关键性作用^[31]。CD4⁺和CD8⁺T淋巴细胞数量及其比值能够反映机体免疫能力,CD4⁺/CD8⁺比值升高时表明机体免疫能力增强,反之CD4⁺T淋巴细胞数量下降或CD8⁺T淋巴细胞数量异常增多而引起二者比值下降,则说明细胞免疫功能受到抑制^[32]。细胞因子活性是反映机体免疫功能的重要指标,CD4⁺T细胞在受到刺激后分化为Th0细胞,Th0细胞又分化成可分泌IFN-γ、IL-2等细胞因子的Th1细胞和分泌IL-4、IL-5、IL-6、IL-10等细胞因子的Th2细胞,从而增强机体免疫应答。

研究表明,在鸡饲粮中添加大豆异黄酮^[33]或槲皮素^[34]对血清中CD4⁺T淋巴细胞和CD8⁺T淋巴细胞数量无明显影响,此结论与本试验结果相悖。王一伦^[35]研究发现,山楂黄酮在100~800 μg/mL时可使小鼠脾脏T淋巴细胞CD4⁺/CD8⁺比值升高,提高小鼠脾脏T淋巴细胞因子IFN-γ、IL-6和IL-12含量,降低IL-4含量。在饲粮中添加低剂量的苜蓿黄酮,奶牛血清中CD4⁺T淋巴细胞数量和CD4⁺/CD8⁺比值提高,INF-γ和IL-4基因表达上升,同时高剂量苜蓿黄酮降低了INF-γ和IL-4的基因表达,可能与T淋巴细胞数量减少有关^[36]。Okoye等^[37]在小鼠T淋巴细胞培养的试验中发现,黄酮类化合物对INF-γ分泌量的提升效果明显。沙冬青种子总黄酮能克服环磷酰胺(CTX)诱导的免疫抑制,150 mg/(kg·d)灌胃最佳,可促进淋巴细胞增殖和成熟以及提高血清IL-2和IL-4含量^[38]。Ma等^[39]研究表明,橙皮素衍生物可提高人体巨噬细胞的吞噬能力,促进IL-1β和IL-6的分泌。而沈菲等^[40]的研究中以不同水平大豆异黄酮饲喂奶牛,结果表明血清IL-1β、IL-6和TNF-α含量并无显著差异。本试验结果发现,沙葱黄酮会通过影响T淋巴细胞数量及免疫因子来调控机体免疫系统,在饲喂沙葱黄酮的第15天后,CD4⁺T淋巴细胞数量显著提高,CD8⁺T淋巴细胞数量显著降低,CD4⁺/CD8⁺比值显著提高。从饲喂时间轴角度观测,第1~60天,CD4⁺T淋巴细胞数量和CD4⁺/CD8⁺比值呈现逐步升高趋势,CD8⁺T淋巴细胞数量呈逐渐降低趋势。试验组内比较结果显示,22和33 mg/kg沙葱黄酮组相较11 mg/kg沙葱黄酮组对以上指标的改善更为明显。饲粮添加沙葱黄酮组肉羊血清IL-1β、IL-2、IL-6、IFN-γ含量均有显著提高,随着饲喂时间的延长呈现增长趋势,其中33 mg/kg沙葱黄酮组较其他试验组具有更早的时间响应。第45天和第60天的22 mg/kg沙葱黄酮组和第60天的33 mg/kg沙葱黄酮组的血清IL-4含量有显著提升,11 mg/kg沙葱黄酮组的血清IL-4含量无显著提升。课题组前期研究证实,体外添加沙葱黄酮可显著影响细胞因子的mRNA表达^[10],与本试验所得结果基本一致。

4 结论

沙葱黄酮可有效改善肉羊的非特异性免疫功能和特异性免疫功能,对肉羊的免疫调节作用具有剂量和时间依赖性。在本试验条件下,饲粮中添加33 mg/kg的沙葱黄酮对肉羊的免疫调节效果最佳。

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