1 材料与方法
1.1 试验材料
1.2 试验动物与饲粮
表1 基础饲粮组成及营养水平(干物质基础)Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet (DM basis)% |
| 项目Items | 含量Content |
|---|---|
| 原料Ingredients | |
| 玉米Corn (7.8%) | 67.550 |
| 脱酚棉籽蛋白 Dephenolized cottonseed protein (50%) | 14.000 |
| 石粉Limestone | 8.154 |
| 玉米蛋白粉Corn gluten meal (51.3%) | 5.000 |
| 豆粕Soybean meal (48%) | 2.000 |
| 磷酸氢钙CaHPO4 | 1.860 |
| 食盐NaCl | 0.350 |
| 微量元素预混料 Ttrace mineral premix1) | 0.300 |
| L-赖氨酸L-lysine (78%) | 0.250 |
| DL-蛋氨酸DL-methionine | 0.120 |
| 氯化胆碱Choline chloride (50%) | 0.120 |
| 色氨酸Tryptophan | 0.020 |
| 复合多维预混料Multi-vitamin premix2) | 0.030 |
| 山道喹Santoquin | 0.030 |
| 植酸酶Phytase | 0.016 |
| 沸石粉Zeolite powder | 0.200 |
| 合计Total | 100.000 |
| 营养水平Nutrient levels3) | |
| 代谢能ME/(MJ/kg) | 11.31 |
| 粗蛋白质Crude protein | 16.530 |
| 钙Calcium | 3.630 |
| 总磷Total phosphorus | 0.764 |
| 有效磷Available phosphorus | 0.434 |
| 蛋氨酸+胱氨酸Methionine+cystine | 0.681 |
| 赖氨酸Lysine | 0.791 |
| 蛋氨酸Methionine | 0.408 |
| 苏氨酸Threonine | 0.576 |
| 色氨酸Tryptophan | 0.164 |
1)微量元素预混料为每千克饲粮提供 Ttrace mineral premix provided the following per kg of the diet:Cu 8 mg,Zn 75 mg,Fe 80 mg,Mn 100 mg,Se 0.15 mg,I 0.35 mg。 2)复合多维预混料为每千克饲粮提供 Multi-vitamin premix provided the following per kg of the diet:VA 12 500 IU,VD3 2 500 IU,VK3 2.65 mg,VB1 2 mg,VB2 6 mg,VB12 0.025 mg,VE 30 IU,生物素 biotin 0.032 5 mg,叶酸 folic acid 1.25 mg,泛酸 pantothenic acid 12 mg,烟酸 niacin 50 mg。 3)营养水平为计算值,由金牧配方软件(2015版)计算得到。Nutrient levels were calculated values, which calculated by Jinmu formula software (2015 version). |
1.3 试验设计与饲养管理
1.4 样品采集
1.5 检测指标与方法
1.5.1 血细胞计数
1.5.2 外周血CD4+、CD8+ T淋巴细胞比例
1.5.3 免疫分子及细胞因子
1.5.4 基因表达分析
表2 基因引物序列Table 2 Primer sequences of genes |
| 基因 Genes | 引物序列 Prime sequence (5'—3') | NCBI登录号 NCBI accession number |
|---|---|---|
| β-肌动蛋白 β-actin | F:GAGAAATTGTGCGTGACATCA R:CCTGAACCTCTCATTGCCA | NM_205518.1 |
| 白细胞介素-4 IL-4 | F:AGACAAATAACAAAACTGAGC R:TTGGTGGAAGAAGGTACG | XM_040646929.1 |
| 白细胞介素-10 IL-10 | F:CGCTGTCACCGCTTCTTCA R:CGTCTCCTTGATCTGCTTGATG | NM_001004414.2 |
| 叉头盒蛋白1 FOXO1 | F:TGCTATGAACCCGTATGCCC R:ACCCAACTGTGTGTGGTTGT | NM_204328.1 |
| 叉头盒蛋白3 FOXO3 | F:CGATGATAACGGGTTCCTCTAT R:GCCATTATGCCTCACTGTGC | XM_040668652.1 |
1.5.5 鸡蛋中SS与大豆皂醇的检测方法
1.5.5.1 样本的制备
1.5.5.2 高效液相色谱条件
1.5.5.3 质谱条件
1.6 数据统计分析
2 结果与分析
2.1 SS对蛋鸡血液免疫指标的影响
表3 SS对蛋鸡血清免疫相关指标的影响Table 3 Effects of SS on serum immune related indices of laying hens |
| 项目 Items | 组别Groups | P值 P-value | ||
|---|---|---|---|---|
| CTR | 50 SS | 500 SS | ||
| 补体3 C3/(g/L) | 0.66±0.20 | 0.77±0.23 | 0.75±0.22 | 0.614 |
| 溶菌酶LYZ/(U/mL) | 124.31±13.03 | 151.96±28.92 | 184.31±59.37 | 0.053 |
| β-防御素1 β-DF1/(ng/L) | 7.01±1.18b | 8.71±0.80a | 7.75±0.65ab | 0.018 |
| 白细胞介素-1β IL-1β/(pg/mL) | 17.60±1.37 | 17.02±2.19 | 18.02±2.57 | 0.674 |
| 肿瘤坏死因子-α TNF-α/(pg/mL) | 96.16±9.18 | 87.75±8.82 | 93.46±15.7 | 0.406 |
| 转化生长因子-β TGF-β/(pg/mL) | 23.68±2.19 | 26.08±3.74 | 28.38±7.02 | 0.209 |
同行数据肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05),相同或无字母表示差异不显著(P>0.05)。下表同。 | |
In the same row, values with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05), while with the same or no letter superscripts mean no significant difference (P>0.05). The same as below. |
2.2 SS对蛋鸡下丘脑、肝脏、卵巢和脾脏组织炎性因子表达的影响
表4 SS对蛋鸡下丘脑、肝脏、卵巢和脾脏炎性因子表达的影响Table 4 Effects of SS on expression of inflammatory factors in hypothalamus, liver, ovary and spleen of laying hens |
| 项目 Items | 组别Groups | P值 P-value | |||
|---|---|---|---|---|---|
| CTR | 50 SS | 500 SS | |||
| 白细胞介素-4 IL-4 | 1.00±0.23 | 0.93±0.11 | 0.89±0.31 | 0.639 | |
| 下丘脑 | 叉头盒蛋白1 FOXO1 | 1.00±0.21b | 1.53±0.23a | 1.42±0.37a | 0.003 |
| Hypothalamus | 叉头盒蛋白3 FOXO3 | 1.00±0.38 | 0.90±0.23 | 1.17±0.39 | 0.341 |
| 白细胞介素-10 IL-10 | 1.00±0.26b | 1.61±0.37a | 1.94±0.60a | 0.001 | |
| 叉头盒蛋白1 FOXO1 | 1.00±0.29 | 1.33±0.29 | 1.24±0.35 | 0.115 | |
| 肝脏 Liver | 叉头盒蛋白3 FOXO3 | 1.00±0.24 | 1.27±0.36 | 1.21±0.29 | 0.223 |
| 白细胞介素-10 IL-10 | 1.00±0.29 | 1.06±0.39 | 1.15±0.42 | 0.715 | |
| 叉头盒蛋白1 FOXO1 | 1.00±0.33 | 0.85±0.20 | 0.92±0.31 | 0.634 | |
| 卵巢 Ovary | 叉头盒蛋白3 FOXO3 | 1.00±0.30 | 0.84±0.28 | 1.13±0.29 | 0.239 |
| 白细胞介素-10 IL-10 | 1.00±0.23 | 1.05±0.39 | 1.15±0.52 | 0.763 | |
| 叉头盒蛋白1 FOXO1 | 1.00±0.30b | 1.67±0.64b | 4.04±1.19a | <0.001 | |
| 脾脏 Spleen | 叉头盒蛋白3 FOXO3 | 1.00±0.21b | 1.64±0.28b | 3.32±0.92a | <0.001 |
| 白细胞介素-10 IL-10 | 1.00±0.20b | 1.53±0.58ab | 1.97±0.46a | 0.002 | |
2.3 SS对蛋鸡血细胞相关指标的影响
表5 SS对蛋鸡血细胞相关指标的影响Table 5 Effects of SS on blood cell related indices of laying hens |
| 项目 Items | 组别Groups | P值 P-value | ||
|---|---|---|---|---|
| CTR | 50 SS | 500 SS | ||
| 红细胞RBC/(×1012个/L) | 2.37±0.16 | 2.31±0.10 | 2.42±0.15 | 0.212 |
| 血红蛋白HGB/(g/L) | 64.00±9.72b | 71.89±7.11ab | 76.10±10.94a | 0.032 |
| 红细胞压积HCT/% | 28.60±2.55 | 28.30±1.34 | 30.00±1.76 | 0.134 |
| 红细胞平均体积MCV/fL | 120.56±4.41 | 122.39±3.40 | 123.72±4.29 | 0.235 |
| 红细胞平均血红蛋白MCH/pg | 27.59±4.47 | 30.27±3.82 | 31.42±3.86 | 0.115 |
| 红细胞平均血红蛋白浓度MCHC/(g/L) | 226.70±25.77b | 255.00±19.82a | 253.40±27.16ab | 0.029 |
| 血小板体积分布宽度标准差PDW/% | 8.06±1.54 | 7.98±1.02 | 7.91±1.47 | 0.970 |
| 血小板平均体积MPV/fL | 6.88±0.91 | 7.62±0.99 | 6.98±0.84 | 0.167 |
| 红细胞体积分布宽度标准差RDW-SD/% | 40.06±3.88 | 40.58±5.41 | 40.78±4.75 | 0.940 |
| 红细胞分布宽度变异系数RDW-CV/% | 12.96±1.71 | 12.64±1.94 | 13.58±1.47 | 0.471 |
| 大型血小板比例P-LCR/% | 16.94±2.43 | 16.23±2.90 | 17.01±2.92 | 0.785 |
| 血小板压积PCT/% | 0.02±0.01 | 0.02±0.01 | 0.02±0.01 | 0.602 |
2.4 SS和大豆皂醇在鸡蛋中的沉积效果
图2 鸡蛋中SS和大豆皂醇的检测结果A:质控样品质谱分析总离子流图;B:代谢物定量分析积分矫正图。 Fig.2 Test results of SS and soya sapogenol in eggs A: the total ion flow diagram for mass spectrometry analysis; B: the integral correction diagram for quantitative analysis of metabolites. |

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