动物营养学报 >

2024 , Vol. 36 >Issue 6: 3631 - 3641

DOI: https://doi.org/10.12418/CJAN2024.312

研究论文

金银花茎叶粉对宁都黄鸡生长性能、免疫功能、抗氧化能力及肠道健康的影响

  • 陈将 , 1 ,
  • 宋琼莉 , 1, * ,
  • 吴东 2 ,
  • 邹志恒 1 ,
  • 龚建平 2 ,
  • 陈小连 1 ,
  • 宋文静 1 ,
  • 熊平文 1 ,
  • 徐川辉 1 ,
  • 李梦楚 2 ,
  • 苏炜德 1 ,
  • 艾高祥 1
展开
  • 1 江西省农业科学院畜牧兽医研究所,畜禽绿色健康养殖江西省重点实验室,南昌 330200
  • 2 江西中医药大学, 中药固体制剂制造技术国家工程研究中心,南昌 330006
*宋琼莉,副研究员,E-mail:

陈 将(1993—),男,江西丰城人,助理研究员,博士,从事家禽营养与免疫调控研究。E-mail:

Copy editor: 菅景颖

收稿日期: 2023-12-14

  网络出版日期: 2024-06-07

基金资助

江西省重点研发计划(20212BBF63025)

江西省农业科学院基础研究与人才培养项目(JXSNKYJCRC202333)

收起

Effects of Honeysuckle Stem and Leaf Powder on Growth Performance, Immune Function, Antioxidant Capacity and Intestinal Health of Ningdu Yellow Chickens

  • CHEN Jiang , 1 ,
  • SONG Qiongli , 1, * ,
  • WU Dong 2 ,
  • ZOU Zhiheng 1 ,
  • GONG Jianping 2 ,
  • CHEN Xiaolian 1 ,
  • SONG Wenjing 1 ,
  • XIONG Pingwen 1 ,
  • XU Chuanhui 1 ,
  • LI Mengchu 2 ,
  • SU Weide 1 ,
  • AI Gaoxiang 1
Expand
  • 1 Jiangxi Province Key Laboratory of Animal Green and Healthy Breeding, Institute of Animal Husbandry and Veterinary Science, Jiangxi Academy of Agricultural Sciences, Nanchang 330200, China
  • 2 The National Pharmaceutical Engineering Center for Solid Preparation of Chinese Herbal Medicine, Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine, Nanchang 330006, China
*associate professor, E-mail:

Received date: 2023-12-14

  Online published: 2024-06-07

Fold

摘要

本试验旨在研究金银花茎叶粉对宁都黄鸡生长性能、免疫功能、抗氧化能力及肠道健康的影响。将360只36日龄宁都黄鸡母鸡随机分为5个组,每组6个重复,每个重复12只鸡。5组分别是基础饲粮组(CON组)、基础饲粮中添加150 mg/kg金霉素组(ANT组)以及基础饲粮中分别添加1%、2%和3%金银花茎叶粉的试验组(HO1组、HO2组、HO3组)。试验期28 d。结果显示:1)与CON组和ANT组相比,HO1组、HO2组和HO3组宁都黄鸡63日龄体重、平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)和料重比(F/G)均无显著差异(P>0.05)。2)与CON组相比,HO2组和HO3组宁都黄鸡血清中二胺氧化酶(DAO)含量显著降低(P<0.05)。3)与CON组相比,HO1组、HO2组和HO3组血清中丙二醛(MDA)含量显著降低(P<0.05),HO1组和HO2组血清中总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性显著升高(P<0.05)。4)与CON组和ANT组相比,HO1组、HO2组和HO3组宁都黄鸡空肠绒毛高度(VH)均显著升高(P<0.05);与CON组相比,HO2组和HO3组空肠绒毛高度和隐窝深度比值(VH/CD)显著升高(P<0.05)。5)与CON组相比,ANT组、HO1组、HO2组和HO3组盲肠菌群中酸杆菌门(Acidobacteriota)和普雷沃氏菌科_UCG-001(Prevotellaceae_UCG-001)的相对丰度显著降低(P<0.05),HO2组和HO3组盲肠菌群中黏螺旋菌属(Mucispirillum)的相对丰度显著升高(P<0.05)。与CON组和ANT组相比,HO1组、HO2组和HO3组盲肠菌群中脱硫杆菌门(Desulfobacterota)的相对丰度以及HO2组、HO3组盲肠菌群中脱铁杆菌门(Deferribacterota)的相对丰度显著升高(P<0.05)。综上所述,饲粮中添加1%~3%的金银花茎叶粉虽无显著的促生长效果,但能够提高宁都黄鸡的抗氧化能力和免疫功能,改善小肠形态结构和盲肠菌群组成,其适宜添加量为2%。

关键词： 金银花茎叶粉; 宁都黄鸡; 生长性能; 免疫功能; 抗氧化能力; 肠道健康

本文引用格式

陈将 , 宋琼莉 , 吴东 , 邹志恒 , 龚建平 , 陈小连 , 宋文静 , 熊平文 , 徐川辉 , 李梦楚 , 苏炜德 , 艾高祥 . 金银花茎叶粉对宁都黄鸡生长性能、免疫功能、抗氧化能力及肠道健康的影响[J]. 动物营养学报, 2024 , 36(6) : 3631 -3641 . DOI: 10.12418/CJAN2024.312

Abstract

This study aimed to evaluate the effects of honeysuckle stem and leaf powder on growth performance, immune function, antioxidant capacity and intestinal health of Ningdu yellow chickens. Three hundred and sixty 36-day-old Ningdu yellow female chickens with similar initial body weight were randomly distributed into 5 groups with 6 replicates per group and 12 broilers per replicate. They were basal diet group (CON group), the basal diet supplemented with 150 mg/kg chlorotetracycline group (ANT group), and diets supplemented with 1%, 2% and 3% honeysuckle stem and leaf powder, respectively. The experiment lasted 28 d. The results showed as follows: 1) compared with CON and ANT groups, there were no significant differences in body weight at 63 days of age, average daily gain (ADG), average daily feed intake (ADFI) and feed-to-gain ratio (F/G) of Nindu yellow chickens in HO1, HO2 and HO3 groups (P>0.05). 2) The serum diamine oxidase (DAO) content in the HO2 and HO3 groups was significantly lower than that in the CON group (P<0.05). 3) Compared with the CON group, the serum malondialdehyde (MDA) content in the HO1, HO2 and HO3 groups was significantly decreased (P<0.05), and the serum total superoxide dismutase (T-SOD) activity in the HO1 and HO2 groups was significantly increased (P<0.05). 4) Compared with the CON and ANT groups, the villus height (VH) of the jejunum in the HO1, HO2 and HO3 groups was significantly increased (P<0.05). Moreover, the ratio of villus height to the crypt depth (VH/CD) of the jejunum in the HO2 and HO3 groups was significantly increased compared with the CON group (P<0.05). 5) Compared with the CON group, the cecal relative abundances of Acidobacteriota and Prevotellaceae_UCG-001 in the ANT, HO1, HO2 and HO3 groups were significantly decreased (P<0.05), and the relative abundance of Mucispirillum in the HO2 and HO3 groups was significantly increased (P<0.05). Furthermore, compared with CON and ANT groups, the relative abundance of Desulfobacterota in the HO1, HO2 and HO3 groups and the relative abundance of Deferribacterota in the HO2 and HO3 groups were significantly increased (P<0.05). In conclusion, dietary supplementation with 1% to 3% honeysuckle stem and leaf powder has no significant growth promotion effect, but can improve the antioxidant capacity, immune function, intestinal mucosal morphology and the composition of the cecal bacterial flora of Ningdu yellow chickens, and the appropriate supplemental level is 2%.

Key words： honeysuckle stem and leaf powder; Ningdu yellow chickens; growth performance; immune function; antioxidant capacity; intestinal health

金银花是农业部公告第1773号《饲料原料目录》中规定的一种可饲用天然植物,也是一味药食同源的传统中草药,其主要生物活性成分有黄酮类、有机酸类、挥发油和三萜类,具有清热解毒、杀菌抗炎、提高免疫力等多种特性[1]。李时珍的《本草纲目》曾记载“茎叶及花,功用皆同”,现代研究也证实金银花的花、茎和叶含有相似的生物活性成分和药理功能[2],然而各产区金银花的茎、叶仍作为非药用部位被丢弃,造成了极大的资源浪费和经济损失。金银花的茎、叶制粉后作为一种饲料原料添加到饲粮中是解决金银花茎、叶资源浪费的一种有效途径,且金银花及其副产物可以作为很好的抗生素替代品,不仅具有药物残留少、耐药性低和副作用小的特点,还能提高动物的生产性能,增强动物的抗氧化能力和免疫能力[3]。
龙彬[4]研究表明,饲粮中添加300 mg/kg金银花提取物可以提高蛋鸡的平均蛋重、平均日采食量和鸡蛋哈氏单位,改善蛋鸡的脂质代谢,降低蛋黄的胆固醇含量。史沁芳[5]研究发现,饲粮中添加1.5%金银花复合饲料添加剂(金银花含量为50%)具有促进肉鸡生长发育、增强免疫力和提高饲料利用率等作用。李玉杰等[6]研究也发现,在饲粮中添加1%金银花叶粉能促进鸡新城疫病毒(NDV)抗体的产生,使鸡增重明显,对鸡免疫功能具有明显影响。金银花及其提取物应用于蛋鸡和肉鸡生产均有积极效果,但金银花茎叶粉在地方肉鸡生产上的应用鲜有报道。为此,本试验通过在基础饲粮中添加金银花茎叶粉,评价其对宁都黄鸡生长性能、免疫功能、抗氧化能力及肠道健康的影响,为地方肉鸡饲用抗生素的有效替代品研究提供思路和参考依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

金银花的茎、叶由江西中医药大学提供,经晾晒干燥后粉碎过80目筛制成金银花茎叶粉用于后续试验。经检测,金银花茎叶粉干物质含量为95.99%,粗蛋白质含量为7.22%,粗纤维含量为29.20%,粗灰分含量为0.39%,总磷含量为0.20%,黄酮含量为40.84 mg/g,多糖含量为6.4 mg/g,总酚含量为13.56 mg/g。

1.2 试验动物与分组

将购自江西省惠大实业有限公司的1日龄宁都黄鸡母鸡在育雏舍饲养至28日龄后转移到育成鸡舍,采食基础饲粮预饲7 d后,于鸡只36日龄时挑选健康状况良好、体重接近的宁都黄鸡母鸡360只,随机分成5组,每组6个重复,每个重复12只鸡。对照组(CON组)饲喂玉米-豆粕型基础饲粮,抗生素组(ANT组)在基础饲粮中添加150 mg/kg的金霉素,试验组在基础饲粮中分别添加1%(HO1组)、2%(HO2组)和3%(HO3组)的金银花茎叶粉。试验期28 d。

1.3 试验饲粮与饲养管理

试验饲粮营养水平标准参考《黄羽肉鸡营养需要量》(NY/T 3645—2020)设计,其组成及营养水平见表1,各组饲粮等氮等能。试验前对整个栏舍进行了全面的清洗和消毒,试验鸡采用3层立体笼养,每笼6只鸡,自由饮水和采食,24 h光照,45日龄时肌肉注射新城疫Ⅰ系苗。肉鸡饲养过程中,严格记录鸡群的健康状况,发现异常情况及时处理。
表1 试验饲粮组成及营养水平(饲喂基础)

Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets (as-fed basis)%

项目
Items		 组别 Groups
CON ANT HO1 HO2 HO3
原料Ingredients
玉米 Corn 61.94 61.94 60.41 58.88 57.35
豆粕 Soybean meal 27.35 27.35 27.45 27.56 27.67
大豆油 Soybean oil 2.41 2.41 2.84 3.26 3.68
次粉 Wheat middlings 4.76 4.76 4.76 4.76 4.76
金银花茎叶粉 Honeysuckle stem and leaf powder 1.00 2.00 3.00
石粉 Limestone 1.21 1.21 1.21 1.21 1.21
磷酸氢钙 CaHPO4 0.92 0.92 0.92 0.92 0.92
L-赖氨酸盐酸盐 L-Lys·HCl(79%) 0.11 0.11 0.11 0.11 0.11
DL-蛋氨酸 DL-Met(99%) 0.10 0.10 0.10 0.10 0.10
食盐 NaCl 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20
预混料 Premix1) 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00
合计 Total 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00
金霉素 Chlortetracycline/(mg/kg)2) 150
营养水平 Nutrient levels3)
代谢能 ME/(MJ/kg) 12.59 12.59 12.59 12.59 12.59
粗蛋白质 CP 17.63 17.47 17.51 17.56 17.44
钙 Ca 0.71 0.72 0.70 0.68 0.72
总磷 TP 0.49 0.51 0.46 0.47 0.52
有效磷AP 0.25 0.25 0.25 0.24 0.24
赖氨酸 Lys 0.93 0.93 0.93 0.92 0.92
蛋氨酸 Met 0.39 0.39 0.39 0.38 0.38

1)预混料为每千克饲粮提供 Premix provided the following per kilogram of diets:Cu (as copper sulfate) 20 mg,Fe (as ferrous sulfate) 320 mg,Mn (as manganese sulfate) 100 mg,Zn (as zinc sulfate) 200 mg,I (as potassium iodide) 0.6 mg,Se (as sodium selenite) 0.3 mg,VA 9 000 IU,VE 25 mg,VB1 5 mg,VB2 10 mg,VB6 12 mg,VD 2 500 IU,VK3 3 mg,VB12 0.03 mg,D-泛酸 D-pantothenic acid 20 mg,叶酸 folic acid 3 mg,烟酸 niacin 30 mg,生物素 biotin 0.1 mg。

2)金霉素是通过等量替代预混料中的沸石粉添加到饲粮中的。Chlorotetracycline was added to the diet by replacing zeolite powder in premix in equal amount.

3)代谢能、有效磷、赖氨酸和蛋氨酸为计算值,其余为实测值。ME, AP, Lys and Met were calculated values, while the others were measured values.

1.4 检测指标与方法

1.4.1 营养成分含量

分别采用GB/T 6432—2018、GB/T 6437—2018和GB/T 6436—2018中方法检测饲粮中粗蛋白质、总磷和钙含量。代谢能、有效磷、赖氨酸和蛋氨酸含量依据《中国饲料成分及营养价值表(2020年第31版)》计算得出。

1.4.2 生长性能

36日龄时正试期开始时称量每个重复的试验鸡体重作为初始体重,63日龄时鸡只禁食12 h后,称量每个重复的试验鸡体重作为终末体重,统计36~63日龄间各组耗料量,计算各组试验鸡的平均日采食量(ADFI)、平均日增重(ADG)和料重比(F/G)。

1.4.3 血清生化指标

63日龄时,从每个重复挑取接近该重复平均体重的试验鸡2只,每只鸡从翅静脉取血5 mL,室温静置1 h后,于离心机中离心(1 005×g)15 min,取上清于1.5 mL EP管中,保存于-20 ℃冰箱。使用江苏酶免实业有限公司的酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒测定血清中免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白G(IgG)、内毒素(ETX)、二胺氧化酶(DAO)、溶菌酶(LZM)含量;使用比色法(试剂盒购自北京华英生物技术研究所)对血清中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)与总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性、总抗氧化能力(T-AOC)及丙二醛(MDA)含量进行检测,具体的操作方法按相应指标试剂盒说明书进行。

1.4.4 空肠黏膜形态

63日龄时,从每个重复挑取接近该重复平均体重的试验鸡1只,屠宰后取空肠中间部位1.5 cm左右,用4%多聚甲醛溶液固定,将固定好的肠段制成5 μm的切片,经苏木精-伊红(HE)染色后在400×显微镜下观测绒毛高度(VH)、隐窝深度(CD),并计算绒毛高度与隐窝深度比值(VH/CD)。

1.4.5 盲肠微生物区系

收集屠宰后试验鸡的盲肠食糜0.5 g左右,置于冻存管中,液氮速冻后保存于干冰中送至北京诺禾致源生物信息科技有限公司进行16S rRNA测序。采用Illumina MiSeq平台对构建的文库进行测序,获得有效数据,并对数据进行分析,分析盲肠内容物中微生物的相对丰度。

1.5 统计分析

试验数据通过SPSS 19.0统计软件进行均值的单因素方差分析(one-way ANOVA),在差异显著的基础上采用Duncan氏法进行组间多重比较,以P<0.05表示差异显著,0.05<P<0.10表示差异有显著的趋势。

2 结果

2.1 金银花茎叶粉对宁都黄鸡生长性能的影响

由表2可知,与CON组和ANT组相比,饲粮中添加1%~3%金银花茎叶粉对宁都黄鸡终末体重(63日龄体重)、ADG、ADFI和F/G均无显著影响(P>0.05)。
表2 金银花茎叶粉对宁都黄鸡生长性能的影响

Table 2 Effects of honeysuckle stem and leaf powder on growth performance of Ningdu yellow chickens

项目
Items		 组别 Groups SEM P值
P-value
CON ANT HO1 HO2 HO3
初始体重 IBW/g 330.51 330.58 330.53 331.14 331.03 0.16 0.62
终末体重 FBW/g 876.50 895.21 895.69 894.72 901.94 4.15 0.39
平均日增重 ADG/(g/d) 19.51 20.17 20.18 20.12 20.39 0.15 0.42
平均日采食量 ADFI/(g/d) 55.06 56.06 56.21 56.36 57.24 0.51 0.78
料重比 F/G 2.82 2.78 2.79 2.80 2.81 0.01 0.89

同行数据肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05),无字母或相同小写字母表示差异不显著(P>0.05)。下表同。

In the same row, values with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05), while with no letter or the same small letter superscripts mean no significant difference (P>0.05). The same as below.

2.2 金银花茎叶粉对宁都黄鸡血清免疫指标的影响

由表3可知,与CON组相比,HO2组和HO3组宁都黄鸡血清中DAO含量显著降低(P<0.05),ETX含量有下降的趋势(P=0.06)。与ANT组相比,HO2组宁都黄鸡血清中DAO含量显著降低(P<0.05)。与CON组相比,ANT组、HO1组、HO2组和HO3组宁都黄鸡血清中IgA、IgG、IgM和LZM含量无显著差异(P>0.05)。
表3 金银花茎叶粉对宁都黄鸡血清免疫指标的影响

Table 3 Effects of honeysuckle stem and leaf powder on serum immune indices of Ningdu yellow chickens

项目
Items		 组别Groups SEM P值
P-value
CON ANT HO1 HO2 HO3
免疫球蛋白A IgA/(μg/mL) 7.04 7.85 7.71 7.45 6.62 0.23 0.48
免疫球蛋白G IgG/(μg/mL) 13.44 13.51 13.06 14.25 14.62 0.38 0.70
免疫球蛋白M IgM/(μg/mL) 6.84 7.40 7.30 7.31 7.25 0.13 0.69
二胺氧化酶 DAO/(pg/mL) 119.52a 118.28ab 112.99abc 99.24c 103.57bc 2.14 <0.01
内毒素 ETX/(ng/L) 195.85 179.70 171.71 147.68 154.91 6.18 0.06
溶菌酶 LZM/(μg/L) 1.69 1.89 1.59 1.71 1.53 0.05 0.29

2.3 金银花茎叶粉对宁都黄鸡血清抗氧化指标的影响

由表4可知,与CON组相比,HO1组、HO2组和HO3组宁都黄鸡血清中MDA含量显著降低(P<0.05),HO1组和HO2组宁都黄鸡血清中T-SOD活性显著升高(P<0.05)。各组宁都黄鸡血清中GSH-Px活性和T-AOC无显著差异(P>0.05)。
表4 金银花茎叶粉对宁都黄鸡血清抗氧化指标的影响

Table 4 Effects of honeysuckle stem and leaf powder on serum antioxidant indices of Ningdu yellow chickens

项目
Items		 组别 Groups SEM P值
P-value
CON ANT HO1 HO2 HO3
丙二醛 MDA/(nmol/mL) 14.86a 12.36ab 10.08b 10.68b 9.07b 0.56 0.01
总超氧化物歧化酶 T-SOD/(U/mL) 10.44b 12.28ab 14.81a 13.58ba 11.26ab 0.38 <0.01
谷胱甘肽过氧化物酶 GSH-Px/(U/L) 322.01 356.56 328.12 369.38 393.06 11.54 0.37
总抗氧化能力
T-AOC/(μmol Trolox/mL)		 2.96 3.13 2.97 2.77 2.70 0.16 0.17

2.4 金银花茎叶粉对宁都黄鸡空肠黏膜形态的影响

由表5可知,HO1组、HO2组和HO3组宁都黄鸡空肠VH显著高于CON组和ANT组(P<0.05),HO2组和HO3组空肠VH/CD显著高于CON组和ANT组(P<0.05)。各组宁都黄鸡空肠CD没有显著差异(P>0.05)。
表5 金银花茎叶粉对宁都黄鸡空肠黏膜形态的影响

Table 5 Effects of honeysuckle stem and leaf powder on jejunal mucosal morphology of Ningdu yellow chickens

项目
Items		 组别 Groups SEM P值
P-value
CON ANT HO1 HO2 HO3
绒毛高度 VH/μm 1 013.00b 1 046.24b 1 194.83a 1 247.49a 1 179.11a 15.48 <0.01
隐窝深度 CP/μm 318.32 271.37 311.16 305.05 279.96 5.67 0.07
绒毛高度/隐窝深度比值 VH/CD 3.43b 3.92ab 4.26ab 4.64a 4.68a 0.11 <0.01

2.5 金银花茎叶粉对宁都黄鸡盲肠菌群的影响

2.5.1 金银花茎叶粉对宁都黄鸡盲肠菌群alpha多样性的影响

由表6可知,各组Shannon指数、Simpson指数、Dominance指数和Chao1指数均无显著差异(P>0.05)。
表6 金银花茎叶粉对宁都黄鸡盲肠菌群alpha多样性的影响

Table 6 Effects of honeysuckle stem and leaf powder on cecal microbial alpha diversity of Ningdu yellow chickens

项目
Items		 组别 Groups SEM P值
P-value
CON ANT HO1 HO2 HO3
Shannon指数 Shannon index 6.66 6.41 6.82 6.96 6.86 0.11 0.59
Simpson指数 Simpson index 0.97 0.97 0.97 0.98 0.98 0.00 0.40
Dominance指数 Dominance index 0.03 0.03 0.03 0.02 0.02 0.00 0.40
Chao1指数 Chao1 index 554.83 551.07 533.62 559.56 574.59 30.22 0.99

2.5.2 金银花茎叶粉对宁都黄鸡盲肠菌群组成的影响

由图1和表7可知,门水平上,各组盲肠菌群中均以拟杆菌门(Bacteroidota)的相对丰度最高,但各组间差异不显著(P>0.05);与CON组和ANT组相比,HO2组和HO3组脱铁杆菌门(Deferribacterota)的相对丰度显著升高(P<0.05),HO1组、HO2组和HO3组脱硫杆菌门(Desulfobacterota)的相对丰度显著升高(P<0.05);与CON组相比,ANT组、HO1组、HO2组和HO3组螺旋藻门(Spirochaetota)与酸杆菌门(Acidobacteriota)相对丰度显著降低(P<0.05)。
图1 宁都黄鸡盲肠菌群在门水平上的分布

Bacteroidota:拟杆菌门;Firmicutes:厚壁菌门;Euryarchaeota:广古菌门;Fusobacteriota:梭杆菌门;Deferribacterota:脱铁杆菌门;Spirochaetota:螺旋藻门;Proteobacteria:变形菌门;Synergistota:互养菌门;Desulfobacterota:脱硫杆菌门;Acidobacteriota:酸杆菌门;Others:其他。

Fig.1 Distribution of cecal microbiota at phylum level of Ningdu yellow chickens

表7 宁都黄鸡盲肠菌群在门水平上的相对丰度

Table 7 Relative abundance of cecal microbiota at phylum level of Ningdu yellow chickens%

项目
Items		 组别 Groups SEM P值
P-value
CON ANT HO1 HO2 HO3
拟杆菌门 Bacteroidota 62.10 64.21 52.43 56.52 58.12 1.74 0.20
厚壁菌门 Firmicutes 26.38 24.64 33.62 31.02 27.90 1.52 0.34
广古菌门 Euryarchaeota 0.89 0.83 1.93 0.34 1.26 0.05 0.89
梭杆菌门 Fusobacteriota 0.01 0.04 0.02 0.03 0.01 0.00 0.23
脱铁杆菌门 Deferribacterota 0.28b 0.48b 0.62ab 1.11a 2.39a 0.22 0.01
螺旋藻门 Spirochaetota 2.79a 0.02b 0.06b 0.04b 0.04b 0.34 0.04
变形菌门 Proteobacteria 1.51 3.60 2.71 3.46 2.22 0.37 0.34
互养菌门 Synergistota 1.29 2.02 1.43 1.69 2.30 0.21 0.58
脱硫杆菌门 Desulfobacterota 1.48b 1.70b 2.91a 2.36a 2.57a 0.17 0.03
酸杆菌门 Acidobacteriota 1.84a 0.65b 0.29b 0.50b 0.61b 0.02 0.01
由图2和表8可知,在属水平上,各组盲肠菌群中均以拟杆菌属(Bacteroides)、理研菌科_RC9_肠道群(Rikenellaceae_RC9_gut_group)和Muribaculaceae等为优势菌属;与ANT组相比,添加金银花茎叶粉的各试验组粪杆菌属(Faecalibacterium)的相对丰度显著降低(P<0.05);与CON组相比,ANT组、HO1组、HO2组和HO3组普雷沃氏菌科_UCG-001(Prevotellaceae_UCG-001)的相对丰度显著降低(P<0.05),HO2组和HO3组黏螺旋菌属(Mucispirillum)的相对丰度显著升高(P<0.05)。
图2 宁都黄鸡盲肠菌群在属水平上的分布

Bacteroides:拟杆菌属;Rikenellaceae_RC9_gut_group:理研菌科_RC9_肠道群;Megamonas:巨单胞菌属;Faecalibacterium:粪杆菌属;Methanobrevibacter:甲烷短杆菌属;Prevotellaceae_UCG-001:普雷沃氏菌科_UCG-001;Fusobacterium:梭杆菌属;Lactobacillus:乳杆菌属;Mucispirillum:黏螺旋菌属;Others:其他。

Fig.2 Distribution of cecal microbiota at genus level of Ningdu yellow chickens

表8 宁都黄鸡盲肠菌群在属水平上的相对丰度

Table 8 Relative abundance of cecal microbiota at genus level of Ningdu yellow chickens%

项目
Items		 组别 Groups SEM P值
P-value
CON ANT HO1 HO2 HO3
拟杆菌属 Bacteroides 24.98 23.91 22.97 16.12 17.56 1.51 0.24
理研菌科_RC9_肠道群
Rikenellaceae_RC9_gut_group		 15.42 14.86 6.28 10.32 12.01 0.73 0.27
Muribaculaceae 1.70 3.17 2.38 6.50 2.77 1.42 0.23
巨单胞菌属 Megamonas 0.89 2.14 4.86 0.23 0.26 0.68 0.19
粪杆菌属 Faecalibacterium 1.46b 3.41a 1.53b 0.96b 1.06b 0.26 0.01
甲烷短杆菌属 Methanobrevibacter 0.89 0.83 1.93 0.34 1.26 0.46 0.88
普雷沃氏菌科_UCG-001
Prevotellaceae_UCG-001		 2.35a 0.56b 0.49b 0.59b 0.45b 0.18 0.01
梭杆菌属 Fusobacterium 0.008 0.004 0.022 0.032 0.013 0.004 0.23
乳杆菌属 Lactobacillus 1.39 1.68 1.37 0.58 1.96 0.39 0.89
黏螺旋菌属 Mucispirillum 0.29c 0.48c 0.62c 1.11b 2.39a 0.74 <0.01

3 讨论

3.1 金银花茎叶粉对宁都黄鸡生长性能的影响

已有研究利用先进的分离、分析技术发现金银花及其枝叶中均含有数量不等的黄酮类、有机酸类和挥发油等活性物质,部分金银花叶片中总黄酮含量还高于金银花[7-8]。郭玉等[9]通过检测同一来源的金银花花朵和叶片中绿原酸和总黄酮含量发现,花朵和叶片中绿原酸的含量分别为2.7%和2.3%,总黄酮含量分别为6.5%和7.9%。此外,金银花枝叶中还含有丰富的蛋白质、氨基酸、维生素和微量元素等多种营养成分[10-11]。由此可见,金银花枝叶作为饲料具有较高的应用价值。本试验结果表明,饲粮中添加抗生素和1%~3%金银花茎叶粉对36~63日龄宁都黄鸡的63日龄体重、ADG、ADFI和F/G的改善作用虽未达到显著水平,但从均值上看提高了ADG和降低F/G,说明金银花茎叶粉的添加不会影响宁都黄鸡的生长性能。张俊丽等[12]的研究也发现,在西门塔尔牛饲粮中添加金银花枝条粉对生长性能没有显著影响,且在一定程度上提高了生长性能,这与本研究结果一致。金银花茎叶对畜禽生长性能有积极的效果可能与金银花茎叶中含有绿原酸和黄酮等有效成分有关,虽然有效成分的含量与金银花花朵中存在一量的差距。

3.2 金银花茎叶粉对宁都黄鸡免疫功能的影响

DAO是一种由小肠黏膜和纤毛细胞产生的具有高度活性的胞内酶[13],LZM是机体重要的非特异性免疫因子[14],ETX是肠腔内致病菌的分解产物[15],当机体受到外界环境刺激,肠道防御功能遭遇攻击时,肠黏膜通透性增加,DAO和ETX等大分子物质会透过肠黏膜屏障进入血液循环,引起机体不适,因此DAO、ETX常用来评估肠道黏膜屏障的通透性[13]。本研究中,饲粮中添加2%的金银花茎叶粉显著降低了宁都黄鸡血清中DAO含量,添加2%和3%的金银花茎叶粉则有使肉鸡血清ETX含量下降的趋势,表明添加金银花茎叶粉能够减轻肠道黏膜损伤程度,发挥积极的肠道保护屏障作用,保障宁都黄鸡健康生长。研究报道,金银花的有效成分绿原酸具有激活小鼠肠道干细胞和上皮细胞再生,从而改善肠道形态或器官生长的作用[16]。另有研究报道,金银花中的有效成分多糖类物质和绿原酸会刺激肠道产生免疫因子,提高Th1细胞分化能力,调节肠黏膜免疫因子分泌,进而增强肠道免疫屏障[17]。因此,本试验中,宁都黄鸡血清中DAO和ETX含量的变化可能与金银花茎叶中含有的黄酮和绿原酸等生物活性物质有关。

3.3 金银花茎叶粉对宁都黄鸡抗氧化能力的影响

正常情况下,动物代谢过程产生的活性氧自由基会被体内固有抗氧化系统清除,自由基的生成和清除处于动态平衡中,一旦平衡被破坏,过量的自由基会攻击细胞膜、蛋白质、DNA等生物大分子,引起细胞损伤和凋亡[18]。目前,各种药理研究已经证实金银花叶粗提物中的绿原酸、多糖和木犀草苷等活性成分具有较强的抗氧化活性,可清除体内超氧离子自由基,提高免疫力,延缓衰老。阳巧梅等[19]报道,饲粮中添加0.10%、0.15%的金银花提取物能够显著升高黔邵花猪血清中T-AOC和T-SOD活性。符运斌[20]报道,饲粮中添加金银花提取物后可降低试验牛血清中MDA含量,显著提高GSH-Px、T-SOD活性和T-AOC。本研究结果发现,饲粮中添加1%~3%的金银花茎叶粉可显著提高宁都黄鸡血清中T-SOD活性,并显著降低血清中MDA含量,与上述研究结果基本一致。

3.4 金银花茎叶粉对宁都黄鸡肠道形态的影响

肠道上皮结构是营养物质消化和吸收的基础,其结构完整性对肠道健康至关重要。通过肠道形态变化可以揭示肠道健康状况,并评估肠道营养吸收效果[21]。其中,肠道VH、CD及其二者比值是衡量肠道结构完整性的关键指标[22]。梁小瑞[23]研究发现,金银花水提取物能够促进肉鸡十二指肠和空肠绒毛的生长,提高闭锁小带蛋白-1(ZO-1)、闭锁蛋白(occludin)和闭合蛋白(claudin)的表达。Meng等[24]的研究也发现,金银花能够提高草鱼肠上皮的微绒毛长度和肌肉厚度,增强claudin-c和occludin的mRNA表达。本试验结果显示,饲粮中添加金银花茎叶粉可以显著提高宁都黄鸡空肠VH和VH/CD,这一试验结果证明金银花茎叶粉对宁都黄鸡肠道形态有改善作用。联系上文金银花茎叶粉对宁都黄鸡免疫功能影响的结果,金银花茎叶粉对宁都黄鸡肠道形态的改善作用可能与金银花茎叶粉中的生物活性物质有关,这些活性物质能够降低血清DAO、ETX含量,从而保护了肠黏膜屏障的完整性,在一定程度上改善了宁都黄鸡的肠道形态;此外,金银花茎叶粉改善宁都黄鸡肠道发育的功能还可能与金银花茎叶粉中生物活性物质绿原酸和多糖类物具有激活肠道干细胞和上皮细胞再生的作用有关。

3.5 金银花茎叶粉对宁都黄鸡肠道菌群的影响

肠道菌群和肠道黏膜构成了动物肠道的生物屏障,在维持肠道消化吸收和免疫调节方面起着重要作用,而盲肠是肠道菌群的主要聚集部位,有着丰富多样的微生物群落[25]。家禽盲肠菌群结构在门水平上主要以厚壁菌门、拟杆菌门、放线菌门与变形菌门为主,其中厚壁菌门与拟杆菌门为优势菌群[26]。本试验结果显示,在宁都黄鸡盲肠菌群中厚壁菌门与拟杆菌门的相对丰度较高,二者相对丰度占80%以上,为绝对优势菌群,其次为广古菌门、变形菌门、互养菌门和脱硫杆菌门。不同研究肠道菌群结构的不同可能与鸡的品种、饲养环境以及饲粮组成有关。梁小瑞[23]研究显示,添加1 g/kg的金银花可显著增加肉鸡肠道菌群多样性,提高有益菌乳杆菌属(Lactobacillus)和未分类毛螺旋菌科相关菌属(uncultured_bacterium_f_Lachnospiraceae)占比,保护肠黏膜免疫功能。Chen等[27]发现,在断奶仔猪饲粮中添加1 000 mg/kg金银花提取物显著增加了仔猪盲肠中微生物alpha多样性,在门水平上厚壁菌门和拟杆菌门的相对丰度增加,变形菌门的相对丰度降低,属水平上乳杆菌属、普氏菌属、厌氧弧菌属和异普氏菌属的相对丰度增加。本研究结果显示,金银花茎叶粉能够增加宁都黄鸡盲肠菌群中厚壁菌门的相对丰度,显著增加脱铁杆菌门和脱硫杆菌门的相对丰度,并显著降低酸杆菌门和粪杆菌属的相对丰度。厚壁菌门参与机体营养物质消化吸收与能量代谢过程,厚壁菌门下的粪杆菌属是发酵产生短链脂肪酸的主要菌群之一,短链脂肪酸可以提高肠上皮屏障功能,抑制有害菌的定植[28]。由此可知,在饲粮中添加金银花茎叶粉可提高宁都黄鸡肠道菌群中有益菌的丰度以及短链脂肪酸的含量,改善肠道菌群结构。

4 结论

饲粮中添加金银花茎叶粉可以提高宁都黄鸡的免疫功能和抗氧化能力,改善肠道形态结构和调节盲肠菌群组成,且在维护肠道机械屏障的完整性方面优于抗生素。本试验条件下,金银花茎叶粉可应用到肉鸡饲粮中,且以添加2%时效果较佳。

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