1 材料与方法
1.1 试验材料
1.2 试验设计
表1 基础饲粮组成及营养水平(风干基础)Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet (air-dry basis)% |
| 项目 Items | 含量 Content |
|---|---|
| 原料 Ingredients | |
| 玉米 Corn | 38.00 |
| 小麦面粉 Wheat flour | 25.00 |
| 葡萄糖 Glucose | 5.00 |
| 豆粕 Soybean meal | 18.00 |
| 发酵豆粕 Fermented soybean meal | 6.00 |
| 乳化油粉 Emulsified oil powder | 3.00 |
| 石粉 Limestone | 1.00 |
| 磷酸氢钙 CaHPO4 | 1.00 |
| 氯化胆碱 Choline chloride | 0.05 |
| 酸化剂 Acidifier | 0.30 |
| 植酸酶 Phytase | 0.04 |
| L-赖氨酸 L-Lys | 0.80 |
| L-苏氨酸 L-Thr | 0.25 |
| DL-蛋氨酸 DL-Met | 0.18 |
| L-色氨酸 L-Try | 0.08 |
| 氯化钠 NaCl | 0.20 |
| 多矿预混料 Multi-mineral premix1) | 0.80 |
| 多维预混料 Multi-vitamin premix2) | 0.10 |
| 抗氧化剂 Antioxidant | 0.05 |
| 防霉剂 Fungicide | 0.10 |
| 乳猪复合酶 Suckling pig complex enzyme3) | 0.05 |
| 合计 Total | 100.00 |
| 营养水平 Nutrient levels4) | |
| 消化能 DE/(MJ/kg) | 14.23 |
| 净能 NE/(MJ/kg) | 10.46 |
| 干物质 DM | 88.94 |
| 粗蛋白质 CP | 19.21 |
| 粗脂肪 EE | 3.27 |
| 粗灰分 Ash | 5.60 |
| 钙 Ca | 0.77 |
| 总磷 TP | 0.43 |
| 赖氨酸 Lys | 1.32 |
| 蛋氨酸 Met | 0.43 |
| 苏氨酸 Thr | 0.83 |
| 色氨酸 Trp | 0.24 |
| 中性洗涤纤维 NDF | 53.80 |
| 酸性洗涤纤维 ADF | 3.75 |
1) 多矿预混料为每千克饲粮提供 Multi-mineral premix provided the following per kilogram of the diet:Fe 120 mg,Cu 125 mg,Mn 30 mg,Zn 80 mg,I 10 mg,Se 0.5 mg。 2)多维预混料为每千克饲粮提供 Multi-vitamin premixed provided the following per kilogram of the diet:VA 9 000 IU,VD3 3 000 IU,VE 50 IU,VK3 10 mg,VB1 0.4 mg,VB2 6.6 mg,VB6 0.8 mg,VB12 16 mg,烟酸 nicotinic acid 29 mg,泛酸 pantothenic acid 14.36 mg,叶酸 folic acid 0.4 mg,生物素 biotin 0.018 mg。 3)乳猪复合酶组成 Composition of suckling pig complex enzyme:木聚糖酶活性 xylanase activity≥10 000 U/g,β-甘露聚糖酶活性 β-mannanase activity≥1 200 U/g,半乳糖苷酶活性 galactosidase activity≥200 U/g,淀粉酶活性 amylase activity≥2 000 U/g,水分 moisture≤10.0%,β-葡聚糖酶活性 β-glucanase activity 21 000 U/g,纤维素酶活性 cellulase activity 2 300 U/g,果胶酶活性 pectase activity 23 000 U/g,蛋白酶活性 proteinase activity 24 500 U/g。 4) 消化能和净能根据《中国饲料成分及营养价值表(2023年第34版)》计算而得,其他营养水平均为测定值。DE and NE were calculated according to Tables of China Feed Composition and Nutritional Value (34th Edition,2023),while the other nutrient levels were measured values. |
1.3 饲养管理
1.4 测定指标及方法
1.4.1 生长性能
平均日增重=(末重-初重)/饲养天数;
平均日采食量=总采食量/饲养天数;
料重比=总采食量/总增重。
1.4.2 腹泻情况记录
腹泻率(%)=[(试验期内每组仔猪腹泻头数×腹泻天数)/(每组试验仔猪头数×试验天数)]×100。
表2 腹泻评分标准Table 2 Diarrhea scoring criteria |
| 腹泻程度 Degree of diarrhea | 标准 Standard | 评分 Score |
|---|---|---|
| 正常 Normal | 干燥,成形或者粒形 | 0 |
| 轻度 Mild | 软粪,能成形 | 1 |
| 中度 Moderate | 稠状,不成形,粪水无分离现象 | 2 |
| 严重 Serious | 液状,不成形,粪水无有离现象 | 3 |
1.4.3 血清生化和抗氧化指标
1.4.4 养分表观消化率
养分表观消化率(%)=100×[1-(A/B)×(C/D)]。
1.4.5 粪便微生物
1.5 数据统计分析
2 结果与分析
2.1 饲粮中添加不同来源微生态制剂对断奶仔猪生长性能的影响
表3 饲粮中添加不同来源微生态制剂对断奶仔猪生长性能的影响Table 3 Effects of adding different sources of microecological preparations to diets on growth performance of weaned piglets |
| 项目 Items | 组别 Groups | |||
|---|---|---|---|---|
| AN | LBL | HBL | EF | |
| 始重 IW/kg | 12.30±0.02 | 12.31±0.07 | 12.28±0.11 | 12.27±0.07 |
| 末重 FW/kg | 27.13±1.00c | 28.36±0.21bc | 29.12±0.28ab | 30.14±0.98a |
| 平均日增重 ADG/kg | 0.54±0.02c | 0.57±0.01b | 0.60±0.01ab | 0.61±0.02a |
| 平均日采食量 ADFI/kg | 1.00±0.24ab | 0.93±0.44b | 1.01±0.00ab | 1.08±0.04a |
| 料重比 F/G | 1.84±0.08a | 1.62±0.05b | 1.68±0.03ab | 1.76±0.10ab |
同行数据肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05),相同或无字母表示差异不显著 (P>0.05)。下表同。 | |
In the same row, values with different small letter superscripts mean significant differences (P<0.05), while with the same or no letter superscripts mean no significant differences (P>0.05). The same as below. |
2.2 饲粮中添加不同来源微生态制剂对断奶仔猪粪便评分和腹泻率的影响
表4 饲粮中添加不同来源微生态制剂对断奶仔猪粪便指数和腹泻率的影响Table 4 Effects of adding different sources of microecological preparations to diets on fecal index and diarrhea rate of weaned piglets |
| 项目 Items | 组别 Groups | |||
|---|---|---|---|---|
| AN | LBL | HBL | EF | |
| 粪便指数 Fecal index | 0.55±0.25 | 1.62±1.80 | 0.31±0.47 | 0.84±0.72 |
| 腹泻率 Diarrhea rate/% | 1.40±0.73 | 4.76±5.02 | 0.85±1.32 | 2.09±1.66 |
2.3 饲粮中添加不同来源微生态制剂对断奶仔猪血清生化指标的影响
表5 饲粮中添加不同来源微生态制对断奶仔猪血清生化指标的影响Table 5 Effects of adding different sources of microecological preparations to diets on serum biochemical indexes of weaned piglets |
| 项目 Items | 组别 Groups | |||
|---|---|---|---|---|
| AN | LBL | HBL | EF | |
| 免疫球蛋白A IgA/(μg/mL) | 537.10±22.98b | 588.13±30.92a | 573.39±15.10ab | 591.13±25.36a |
| 免疫球蛋白G IgG/(mg/mL) | 15.06±1.14 | 15.93±0.78 | 15.93±1.07 | 16.25±0.59 |
| 免疫球蛋白M IgM/(mg/mL) | 14.39±1.61 | 12.85±1.51 | 15.24±1.19 | 12.70±1.77 |
| 白细胞介素-2 IL-2/(pg/mL) | 215.45±7.05b | 235.70±16.18a | 217.48±6.20b | 226.55±10.87ab |
| 白细胞介素-4 IL-4/(pg/mL) | 36.67±0.94b | 42.71±4.56a | 38.74±2.35ab | 38.90±1.76ab |
| 白细胞介素-6 IL-6/(pg/mL) | 443.63±39.64b | 482.78±39.42ab | 452.52±22.23ab | 488.27±48.21a |
| 白细胞介素-10 IL-10/(pg/mL) | 104.86±10.84 | 110.78±6.90 | 89.18±21.32 | 91.61±30.10 |
| 肿瘤坏死因子-α TNF-α/(pg/mL) | 133.31±3.70c | 140.83±3.52ab | 140.96±3.99ab | 146.56±8.55a |
| 干扰素-γ INF-γ/(pg/mL) | 23.39±1.46 | 24.89±1.80 | 23.21±0.86 | 24.36±1.75 |
2.4 饲粮中添加不同来源微生态制剂对断奶仔猪血清抗氧化指标的影响
表6 饲粮中添加不同来源微生态制剂对断奶仔猪血清抗氧化指标的影响Table 6 Effects of adding different sources of microecological preparations to diets on serum antioxidant indexes of weaned piglets |
| 项目 Items | 组别 Groups | |||
|---|---|---|---|---|
| AN | LBL | HBL | EF | |
| 总抗氧化能力 T-AOC/(mmol/L) | 0.47±0.16a | 0.47±0.25a | 0.31±0.08ab | 0.27±0.11b |
| 超氧化物歧化酶 SOD/(U/mL) | 136.82±5.14ab | 133.37±9.24b | 144.97±9.41a | 143.25±8.36ab |
| 丙二醛 MDA/(nmol/mL) | 8.31±2.74a | 7.11±3.14ab | 7.64±2.95a | 4.45±0.77b |
| 过氧化氢酶 CAT/(U/mL) | 9.86±3.31b | 14.63±3.08a | 9.03±3.81b | 9.44±1.76b |
2.5 饲粮中添加不同来源微生态制剂对断奶仔猪养分表观消化率的影响
表7 饲粮中添加不同来源微生态制剂对断奶仔猪养分表观消化率的影响Table 7 Effects of adding different sources of microecological preparations to diets on apparent digestibility of nutrients of weaned piglets% |
| 项目 Items | 组别 Groups | |||
|---|---|---|---|---|
| AN | LBL | HBL | EF | |
| 干物质 DM | 83.85±1.48a | 76.02±1.16b | 83.70±1.48a | 82.95±0.29a |
| 粗蛋白质 CP | 78.17±1.92b | 67.92±1.63c | 81.07±2.30a | 77.35±0.40b |
| 粗脂肪 EE | 55.21±3.85a | 50.92±4.92b | 50.59±4.80b | 50.99±5.68b |
2.6 饲粮中添加不同来源微生态制剂对断奶仔猪粪便微生物的影响
2.6.1 Alpha多样性分析
图1 微生物Alpha多样性稀释曲线分析AN:抗生素组 antibiotic group;LBL:低浓度地衣芽孢杆菌制剂组 low concentration Bacillus licheniformis group;HBL:高浓度地衣芽孢杆菌制剂组 high concentration Bacillus licheniformis group;EF:粪肠球菌制剂组 Enterococcus faecalis group。下图同 the same as below。 Fig.1 Analysis of microbial Alpha diversity dilution curve |
表8 饲粮中添加不同来源微生态制剂对断奶仔猪粪便菌群Alpha多样性的影响Table 8 Effects of adding different sources of microecological preparations to diets on Alpha diversity of fecal microbiota of weaned piglets |
| 项目 Items | 组别 Groups | |||
|---|---|---|---|---|
| AN | LBL | HBL | EF | |
| Sobs指数 Sobs index | 481.75±31.01 | 498.00±86.14 | 440.25±88.47 | 428.50±74.88 |
| Shannon指数 Shannon index | 3.39±0.26 | 3.50±0.63 | 3.10±0.40 | 2.84±0.44 |
| Ace指数 Ace index | 567.46±14.76 | 581.06±73.53 | 518.60±94.90 | 540.25±69.42 |
| Chao1指数 Chao1 index | 587.23±29.14a | 588.59±74.94a | 520.33±90.09b | 561.87±76.75a |
| Simpson指数 Simpson index | 0.12±0.03 | 0.12±0.07 | 0.19±0.09 | 0.20±0.10 |
| Coverage指数 Coverage index | 0.996 2±0.000 4 | 0.996 3±0.000 3 | 0.996 6±0.000 7 | 0.996 0±0.000 5 |
2.6.2 Beta多样性分析
2.6.3 粪便微生物门、属水平组成和差异微生物
图3 断奶仔猪粪便微生物OTU水平物种Venn图(A)和群落饼图(B)Firmicutes: 厚壁菌门;Actinobacteriota: 放线菌门; Bacteroidota: 拟杆菌门; Spirochaetota: 螺旋菌门; Verrucomicrobiota: 疣菌门; Clostridium_sensu_stricto_1:狭义梭菌属1;Lactobacillus:乳杆菌属;Terrisporobacter: 土孢杆菌属;Streptococcus: 链球菌属;Subdoligranulum: 罕见小球菌属; norank_f_norank_o_Clostridia_UCG-014: 未分类梭菌属UCG-014;Blautia: 布劳特氏菌属;Olsenella: 欧尔森菌属; Christensenellaceae_R-7_group: 克里斯滕森菌科_R-7群;norank_f_Muribaculaceae: 未分类的拟杆菌门;norank_f_norank_o_RF39: 未分类_RF3;Ruminococcus_gauvreauii_group: 瘤胃球菌属群;Pseudoramibacter: 假分枝杆菌属;Clostridium_sensu_stricto_6: 狭义梭菌属6;Marvinbryantia: 马文氏菌属;Catenibacterium: 链杆菌属; norank_f_Butyricicoccaceae: 未分类丁酸球菌科;Other: 其他。 Fig.3 Venn plot (A) and community pie chart (B) of OTU level species in fecal microbiota of weaned piglets |
图4 断奶仔猪粪便微生物组成Firmicutes: 厚壁菌门;Actinobacteriota: 放线菌门;Bacteroidota: 拟杆菌门;Spirochaetota: 螺旋菌门;Verrucomicrobiota: 疣菌门;Clostridium_sensu_stricto_1: 狭义梭菌属1;Lactobacillus: 乳杆菌属;Streptococcus: 链球菌属;Terrisporobacter: 土孢杆菌属;Subdoligranulum: 罕见小球菌属;norank_f_norank_o_Clostridia_UCG-014: 未分类梭菌属UCG-014;Blautia: 布劳特氏菌属;Olsenella: 欧尔森菌属;Christensenellaceae_R-7_group: 克里斯滕森菌科_R-7群;norank_f_Muribaculaceae: 未分类的拟杆菌门;norank_f_norank_o_RF39: 未分类_RF3;Ruminococcus_gauvreauii_group: 瘤胃球菌属群;Pseudoramibacter: 假分枝杆菌;Clostridium_sensu_stricto_6: 狭义梭菌属6;Marvinbryantia: 马文氏菌属;Catenibacterium: 链杆菌属;norank_f_Butyricicoccaceae: 未分类丁酸球菌科;Akkermansia: 阿克曼菌属;Others: 其他。 Fig.4 Microbial composition of feces of weaned piglets |
2.6.4 粪便微生物LEfSe分析
2.6.5 粪便微生物功能预测
图6 仔猪粪便BugBase表型预测分析Facultatively_Anaerobic: 兼性厌氧; Forms_Biofilms: 生物膜形成;Gram_Negative: 革兰氏阴性;Anaerobic: 需氧型;Contains_Mobile_Elements: 移动元件;Potentially_Pathogenic: 潜在致病性; Anaerobic: 厌氧型;Gram_Positive: 革兰氏阳性;Stress_Tolerant: 氧化胁迫耐受。 “*”表示显著相关(P<0.05)。 “*” indicates a significant correlation (P<0.05). Fig.6 Prediction analysis of BugBase phenotype in piglet feces |
2.6.6 粪便微生物与血清指标相关性分析
图7 仔猪粪便差异微生物与血清指标相关性分析g_norank_f_Butyricicoccaceae: 未分类丁酸球菌科;g_Bacillus: 芽孢杆菌属;p_Cyanobacteria: 蓝藻门;g_norank_f_norank_o_Gastranaerophilales: 未分类葡萄球菌;g_Enterococcus: 肠球菌属;g_norank_f_Selenomonadaceae: 未分类月形单胞菌科;IgA:免疫球蛋白A immunoglobulin A;IgG:免疫球蛋白G immunoglobulin G;IgM:免疫球蛋白M immunoglobulin M;IL-2:白细胞介素-2 interleukin-2;IL-4:白细胞介素-4 interleukin-4;IL-6:白细胞介素-6 interleukin-6;IL-10:白细胞介素-10 interleukin-19;TNF-α:肿瘤坏死因子-α tumor necrosis factor-alpha;INF-γ:干扰素-γ interferon-gamma;MDA:丙二醛 malonaldehyde;SOD:超氧化物歧化酶 superoxide dismutase;CAT:过氧化氢酶 catalase;T-AOC:总抗氧化能力 total antioxidant capacity。 “*”表示显著相关(P<0.05);“**”表示极显著相关(P<0.01)。“*” indicates a significant correlation (P<0.05); “**” indicates a very significant association (P<0.01). Fig.7 Correlation analysis between differential microorganisms in piglet feces and serum in indexes |

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