动物营养学报 >

2024 , Vol. 36 >Issue 12: 7995 - 8004

DOI: https://doi.org/10.12418/CJAN2024.682

研究论文

罗伊氏乳杆菌LRA7对比格犬健康状况、营养物质表观消化率、免疫功能及抗氧化能力的影响

  • 张媛媛 , 1 ,
  • 赵梦迪 1, 2 ,
  • 梁爽 1 ,
  • 李悦垚 1 ,
  • 吴怡 1 ,
  • 李鑫康 1 ,
  • 李光玉 , 1, *
展开
  • 1 青岛农业大学动物科技学院,青岛 266109
  • 2 吉林农业大学动物科技学院,长春 130118
*李光玉,教授,博士生导师,E-mail:

张媛媛(1998—),女,山东临沂人,硕士研究生,从事宠物营养调控和饲料资源开发利用研究。E-mail:

Copy editor: 武海龙

收稿日期: 2024-06-28

  网络出版日期: 2024-12-12

基金资助

青岛农业大学高层次人才科研启动基金(1121021)

收起

Effects of Lactobacillus reuteri LRA7 on Health Condition, Nutrient Apparent Digestibility, Immune Function and Antioxidant Capacity of Beagle Dogs

  • ZHANG Yuanyuan , 1 ,
  • ZHAO Mengdi 1, 2 ,
  • LIANG Shuang 1 ,
  • LI Yueyao 1 ,
  • WU Yi 1 ,
  • LI Xinkang 1 ,
  • LI Guangyu , 1, *
Expand
  • 1 College of Animal Science and Technology, Qingdao Agricultural University, Qingdao 266109, China
  • 2 College of Animal Science and Technology, Jilin Agricultural University, Changchun 130118, China
*professor, E-mail:

Received date: 2024-06-28

  Online published: 2024-12-12

Fold

摘要

本试验旨在研究饲粮中添加罗伊氏乳杆菌LRA7对比格犬健康状况、营养物质表观消化率、免疫功能及抗氧化能力的影响。选取体重相近的成年健康比格犬32只,随机分为4组,每组8只。对照组(CON组)饲喂基础饲粮,益生菌添加组分别在基础饲粮基础上添加2×108(LR组)、2×109(MR组)和2×1010 CFU/d(HR组)的罗伊氏乳杆菌LRA7。预试期7 d,正试期28 d。结果表明:1)各组之间体温、呼吸频率、脉搏、粪便评分、生长性能和血常规等健康指标均无显著差异(P>0.05)。2)各组之间干物质、粗蛋白质、粗灰分和碳水化合物表观消化率均无显著差异(P>0.05)。MR组的粗脂肪表观消化率显著高于CON组和LR组(P<0.05)。3)HR组的血清尿素氮(UN)含量显著低于其他各组(P<0.05),血清分泌型免疫球蛋白A(sIgA)含量显著高于CON组和LR组(P<0.05)。4)MR组和HR组的血清超氧化物歧化酶(SOD)活性显著高于CON组和LR组(P<0.05),LR组、MR组和HR组的血清谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性显著高于CON组(P<0.05),HR组的血清丙二醛(MDA)含量显著低于其他各组(P<0.05)。综上所述,罗伊氏乳杆菌LRA7对比格犬的生长和健康状况无不良影响,能够提高粗脂肪表观消化率,改善免疫功能和抗氧化能力,该菌株可作为犬源益生菌产品候选菌株。

关键词： 罗伊氏乳杆菌; 犬; 营养物质表观消化率; 免疫功能; 抗氧化能力

本文引用格式

张媛媛 , 赵梦迪 , 梁爽 , 李悦垚 , 吴怡 , 李鑫康 , 李光玉 . 罗伊氏乳杆菌LRA7对比格犬健康状况、营养物质表观消化率、免疫功能及抗氧化能力的影响[J]. 动物营养学报, 2024 , 36(12) : 7995 -8004 . DOI: 10.12418/CJAN2024.682

Abstract

The aim of this experiment was to investigate the effects of dietary Lactobacillus reuteri LRA7 on health condition, nutrient apparent digestibility, immune function and antioxidant capacity of beagle dogs. Thirty-two adult healthy Beagles with similar body weight were selected and randomly divided into four groups with eight dogs in each group. Dogs in the control group (CON group) were fed a basal diet, and others in probiotic addition groups were fed basal diets supplemented with 2×108, 2×109 and 2×1010 CFU/d Lactobacillus reuteri LRA7, respectively. The pre-test period was 7 d, and the formal period was 28 d. The results showed as follows: 1) there were no significant differences in health indices such as body temperature, respiratory rate, pulse, fecal scores, growth performance and blood routine of dogs (P>0.05). 2) There was no significant difference in dry matter, crude protein, crude ash, and carbohydrate apparent digestibility of dogs (P>0.05). The ether extract apparent digestibility of MR group was significantly higher than that of the CON and LR groups (P<0.05). 3) The serum urea nitrogen (UN) content of HR group was significantly lower than that of other groups (P>0.05), and the serum secretory immunoglobulin A (sIgA) content was significantly higher than that of CON and LR groups (P<0.05). 4) The serum superoxide dismutase (SOD) activity of MR and HR groups was significantly higher than that of CON and LR groups (P<0.05), the serum glutathione peroxidase (GSH-Px) activity of LR, MR and HR groups was significantly higher than that of CON group (P<0.05), and the serum malondialdehyde (MDA) content of HR group was significantly lower than that of other groups (P<0.05). In conclusion, Lactobacillus reuteri LRA7 has no adverse effects on the growth and health status of beagle dogs, can increase the ether extract apparent digestibility, improve immune function and antioxidant capacity, and this strain can be used as a candidate strain for probiotic products of canine origin.

Key words： Lactobacillus reuteri; dogs; nutrient apparent digestibility; immune function; antioxidant capacity

肠道菌群是一个重要的动态肠道生态系统,有促进营养物质消化吸收、内分泌和免疫调节等多种生理功能[1]。在数十亿的肠道微生物中,多样化和有益菌群的存在是维持肠道健康的关键因素[2-3]。先前的研究表明,肠道菌群的改善对于肠道炎症性疾病、癌症、肥胖症、糖尿病和腹泻等方面具有有益作用[4⇓-6]。从2020年起,在饲料“全面禁抗”的背景下,寻找和开发新型绿色添加剂来替代抗生素,进一步提高动物营养与保健成为行业的关键。益生菌被认为是一种安全的活体微生物,益生菌对动物机体健康的贡献值超过了其营养价值[7]。因此,益生菌的开发利用引起了人们的关注。
乳酸菌作为一种重要的益生菌,在食品工业和生物技术领域有着广泛的应用。乳酸菌分泌抗菌肽抑制病原菌在上皮细胞定植,提高机体免疫力、预防疾病和调节肠道菌群的有益作用已经得到证实[8-9]。研究表明,在饲粮中添加罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)DSM 32203具有改善犬粪便质量的效果[10]。Wang等[11]研究表明,在饲粮中添加1×109 CFU/mL的清酒乳杆菌能够增加犬体重和提高抗氧化能力。Mao等[12]在饲粮中添加1×108 CFU/mL的嗜酸乳杆菌,结果表明,补充嗜酸乳杆菌对犬的体重和营养物质表观消化率无显著影响,但能够显著降低胆固醇含量,增加血清免疫球蛋白A(immunoglobulin A,IgA)含量和总抗氧化能力(total antioxidant capacity,T-AOC),从而调节机体脂质代谢和抗氧化能力。Kumar等[13]将从犬粪便中分离出的约氏乳杆菌应用到犬饲粮中,结果表明,与对照组相比,添加益生菌可显著提高犬的免疫功能,降低粪便中氨含量。有研究表明,由于菌株的物种特异性,使用宿主源益生菌可以减少菌株对宿主本身肠道稳态的干扰[14]。此外,Johnson等[15]对宿主源和非宿主源益生菌研究发现,宿主源益生菌在胃肠道中的黏附性和持久性更好。宿主源益生菌在进化过程中更适应宿主的肠道环境,因此,宿主源益生菌是更优的选择。
据《2023年宠物市场消费白皮书》的数据显示,2023年中国养犬数量从2022年5 119万只增加到5 273万只,并且随着健康养宠新理念的发展,宠物主更加关注宠物健康。因此,益生菌、益生元等具有益生作用的功能性宠物食品应运而出。罗伊氏乳杆菌是乳酸菌中的一种具有代表性的重要细菌。但犬源罗伊氏乳杆菌在犬上的研究和应用较少。因此,本研究旨在探究在饲粮中添加犬源罗伊氏乳杆菌LRA7对犬健康状况、营养物质表观消化率、免疫功能和抗氧化能力的影响,以期为犬源罗伊氏乳杆菌LRA7在宠物益生菌产品的应用提供数据参考。

1 材料与方法

1.1 试验材料

试验菌株罗伊氏乳杆菌LRA7由本实验室从成年健康比格犬胃肠道分离鉴定获得,由实验室完成了益生特性和安全性评价,菌株保存于武汉中国典型培养物保藏中心,保藏编号为CCTCC NO:M2023982。本试验中,取-80 ℃保存菌液接种于MRS肉汤培养基于37 ℃摇床进行菌株活化,然后以2%(V/V)的接种量将菌株传代3次,同时采用平板计数法进行活菌计数。试验期间,每天取培养18 h后菌液,按照平板计数的结果分别稀释至1×108、1×109和1×1010 CFU/mL备用。

1.2 试验设计与饲养管理

动物试验由青岛农业大学试验动物伦理委员会批准(批准号:DWKJ202402211)。
选取(2.50±0.35)周岁、体重相近的成年健康比格犬32只,随机分为4组,每组8只,公母各占1/2。对照组(CON组)饲喂基础饲粮,益生菌添加组分别在基础饲粮基础上添加2×108(LR组)、2×109(MR组)和2×1010 CFU/d(HR组)的罗伊氏乳杆菌LRA7。试验期共35 d,其中预试期7 d,正试期28 d。
每次饲喂时取1 mL稀释至相应浓度的菌悬液滴加到每只犬的饲粮中混匀饲喂,早晚各饲喂1次,每只犬每天共口服给药2 mL。试验前对试验犬进行疫苗注射和驱虫,且试验前1个月内未服用益生菌。试验前对犬舍和用具进行清扫和消毒,试验期间每只犬单舍饲养,犬舍温度为(21±2) ℃,相对湿度为(55±5)%。按照犬体重的代谢能需要量计算每天饲喂量,计算公式为95×体重0.75,分别在07:00和17:00进行饲喂,自由饮水。每天清理犬舍保证犬舍干净舒适,每天记录犬的采食量和进行粪便评分,每周称重和测量体温、呼吸和脉搏,观察犬的精神状态和健康状况。

1.3 基础饲粮

参考NRC(2006)犬猫营养需要和美国饲料管理协会(AAFCO)提供的犬营养需要配制基础饲粮,其组成及营养水平见表1。
表1 基础饲粮组成及营养水平(风干基础)

Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet (air-dry basis) %

原料Ingredients 含量Content 营养水平Nutrient levels2) 含量Content
膨化玉米Extrusion corn 40.0 粗蛋白质CP 22.38
膨化豆粕Puffed soybean meal 13.0 粗脂肪EE 5.29
膨化小麦粉Puffed wheat flour 12.7 粗灰分Ash 5.77
麦麸Wheat bran 10.0 碳水化合物Carbohydrate 58.37
鸡肉粉Chicken meal 10.0 粗纤维CF 3.91
肉骨粉Meat and bone meal 9.0 钙Ca 0.81
豆油Soybean oil 2.0 总磷TP 0.76
磷酸氢钙CaHPO4 0.8 赖氨酸Lys 1.34
石粉Limestone 0.1 蛋氨酸+胱氨酸Met+Cys 0.98
赖氨酸Lys 0.9 总能GE/(MJ/kg) 17.43
蛋氨酸Met 0.5 消化能DE/(MJ/kg) 14.92
预混料Premix1) 1.0 代谢能ME/(MJ/kg) 14.69
合计Total 100.0

1)每千克预混料含有 One kilogram of premix contained the following:VA 625 000 IU,VD3 100 000 IU,VE 6 000 IU,VK3 200 mg,VB1 1 250 mg,VB2 900 mg,VB6 750 mg,VB12 2.25 mg,生物素 biotin 10 mg,叶酸 folic acid 150 mg,烟酸 nicotinic acid 2 500 mg,泛酸钙 calcium pantothenate 1 750 mg,VC 10 050 mg,胆碱 choline 240 000 mg,Fe 9 600 mg,Cu 1 800 mg,Zn 7 800 mg,Mn 4 800 mg,I 144 mg,Co 24 mg,Se 30 mg。

2)碳水化合物、总能、消化能和代谢能为计算值,其余为实测值。Carbohydrate, GE, DE and ME were calculated values, while the others were measured values.

1.4 样品采集

采用全收粪法进行代谢试验,在结束前3 d(第26~28天)收集32只犬的全部粪便。每天将每只犬的粪便喷洒10%硫酸溶液进行固氮,分别放入单独的塑料袋中,置于-20 ℃保存备用。试验结束后将3 d收集的粪便进行解冻并充分混合,称取200 g左右粪便先在80 ℃下杀菌2 h,然后将温度降至65 ℃烘干至恒重,测定水分含量。将烘干后的粪便粉碎并过40目筛待测。在试验第29天早上,晨饲前用一次性负压采血管采集犬前肢静脉血5 mL于促凝管中,静止30 min后离心收集血清,于-80 ℃保存备用。另取3 mL血液于抗凝管中,立即颠倒混合6~8次,进行血常规检测。

1.5 测定指标及方法

1.5.1 生长性能

每周对所有试验动物在晨饲前进行空腹称重,试验期间每天记录饲喂量和剩料量,计算平均日增重(ADG)和平均日采食量(ADFI):
ADFI(g/d)=(总采食量-总剩料量)/试验天数;
ADG(kg/d)=(末重-初重)/试验天数。

1.5.2 体温、呼吸频率和脉搏

体温测定方法为:使用电子体温计检测犬的体温,将体温计放于犬大腿内侧无毛处,3~5 min体温计发出结束提示音后取出体温计,读取并记录体温。呼吸频率测定方法为:在犬安静时,站在其侧后方,根据犬胸廓和腹壁的起伏动作进行计数。脉搏测定方法为:在犬后肢股内测动脉处检查,在犬的侧后方,一手握住犬的后肢,另一手伸入犬的股内测,用手指轻轻按压犬的动脉,记录1 min内的脉搏数。

1.5.3 粪便评分

每天观察犬粪便情况,参考Freel等[16]的5分评分方法进行粪便评分:0分=无粪便;1分=水样腹泻;1.5分=腹泻;2分=潮湿,不成形;2.5分=潮湿,部分成形;3分=潮湿,成形;3.5分=形状良好,黏稠;4分=形状良好;4.5分=坚硬干燥;5分=坚硬干燥且易碎。

1.5.4 营养物质表观消化率

根据国标方法对饲粮和粪便中的水分(GB/T 6435—2014)、粗蛋白质(GB/T 6432—2018)、粗脂肪(GB/T 6433—2006)、粗灰分(GB/T 6438—2007)、钙(GB/T 6436—2018)、总磷(GB/T 6437—2018)含量进行测定。氨基酸含量使用氨基酸自动分析仪进行测定。饲粮能量水平参考NRC(2006)方法进行计算[17],碳水化合物含量和营养物质表观消化率计算公式如下:
碳水化合物含量(%)=干物质含量-粗蛋白质含量-粗脂肪含量-粗灰分含量;
某营养物质表观消化率(%)=[(该营养物质摄入量-粪中该营养物质含量)/该营养物质摄入量]×100。

1.5.5 血液指标

血常规指标采用五分类全自动血细胞分析仪(优利特电子集团有限公司)的CBC+5Diff模式进行分析。采用试剂盒(苏州格锐思生物科技有限公司)检测血清谷丙转氨酶(alanine transaminase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性和尿素氮(urea nitrogen,UN)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量及T-AOC,免疫指标使用酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒(江苏酶免实业有限公司)测定血清免疫球蛋白G(immunoglobulin G,IgG)和分泌型免疫球蛋白A(secretory immunoglobulin A,sIgA)含量。

1.6 数据分析

使用Excel 2019进行数据记录和整理,采用SPSS 26.0统计软件进行单因素方差分析和Duncan氏法多重比较,结果以“平均值±标准差”表示,P<0.05表示差异显著。

2 结果

2.1 罗伊氏乳杆菌LRA7对犬体温、呼吸频率、脉搏和粪便评分的影响

由图1可知,犬体温在37.05~37.48 ℃,呼吸频率在31~42次/min,脉搏在99~110次/min,粪便评分在3~4分,以上指标各组之间均无显著差异(P>0.05)。
图1 罗伊氏乳杆菌LRA7对犬体温、呼吸频率、脉搏和粪便评分的影响

数据标无字母表示差异不显著(P>0.05)。

Fig.1 Effects of Lactobacillus reuteri LRA7 on body temperature, respiratory rate, pulse and fecal scores of dogs (n=8)

Values with no letter mean no significant difference (P>0.05).

2.2 罗伊氏乳杆菌LRA7对犬生长性能的影响

由表2可知,各组之间末重、ADG和ADFI均无显著差异(P>0.05)。
表2 罗伊氏乳杆菌LRA7对犬生长性能的影响

Table 2 Effects of Lactobacillus reuteri LRA7 on growth performance of dogs (n=8)

项目
Items		 组别Groups P值
P-value
CON LR MR HR
初重Initial weight/kg 11.59±0.83 11.81±1.36 11.93±1.61 11.86±1.69 0.966
末重Final weight/kg 12.49±0.92 12.89±1.60 13.11±1.58 12.54±1.73 0.812
平均日增重ADG/(kg/d) 0.03±0.01 0.04±0.01 0.04±0.03 0.02±0.01 0.213
平均日采食量ADFI/(g/d) 341.25±20.23 346.50±29.03 352.88±35.22 346.50±35.46 0.900

同行数据肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05),相同或无字母表示差异不显著(P>0.05)。下表同。

In the same row, values with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05), while with the same or no letter superscripts mean no significant difference (P>0.05). The same as below.

2.3 罗伊氏乳杆菌LRA7对犬营养物质表观消化率的影响

由表3可知,各组之间干物质、粗蛋白质、粗灰分和碳水化合物表观消化率均无显著差异(P>0.05)。MR组的粗脂肪表观消化率显著高于CON组和LR组(P<0.05)。
表3 罗伊氏乳杆菌LRA7对犬营养物质表观消化率的影响

Table 3 Effects of Lactobacillus reuteri LRA7 on nutrient apparent digestibility of dogs (n=8) %

项目
Items		 组别Groups P值
P-value
CON LR MR HR
干物质DM 78.05±1.26 78.03±1.59 78.75±1.44 77.35±2.74 0.522
粗蛋白质CP 80.26±2.34 79.90±2.80 80.45±1.69 76.67±4.62 0.064
粗脂肪EE 88.51±4.01a 87.38±1.80a 93.03±2.75b 90.14±3.92ab 0.010
粗灰分Ash 27.30±6.27 25.34±9.06 30.35±7.00 30.40±8.13 0.491
碳水化合物Carbohydrate 78.08±0.86 78.60±1.44 78.61±1.60 77.91±2.32 0.766

2.4 罗伊氏乳杆菌LRA7对犬血常规指标的影响

由表4可知,各组之间血常规指标均无显著差异(P>0.05),且数值均在正常范围内。
表4 罗伊氏乳杆菌LRA7对犬血常规指标的影响

Table 4 Effects of Lactobacillus reuteri LRA7 on blood routine indices of dogs (n=8)

项目
Items		 组别Groups 正常范围
Regular range		 P值
P-value
CON LR MR HR
白细胞WBC/(×109个/L) 10.89±2.21 10.64±2.76 11.09±2.26 11.16±2.60 6.00~17.00 0.975
淋巴细胞
Lymph/(×109个/L)		 2.23±0.73 2.18±0.79 2.51±0.87 2.41±0.44 0.83~4.69 0.769
单核细胞
Mon/(×109个/L)		 1.16±0.24 1.25±0.28 1.12±0.18 1.25±0.39 0.14~1.97 0.748
中性粒细胞
NEU/(×109个/L)		 7.27±1.83 6.85±2.06 7.01±1.56 7.11±1.91 3.62~11.32 0.973
嗜碱性粒细胞
BASO/(×109个/L)		 0.01±0.01 0.01±0.01 0.01±0.00 0.02±0.02 0.00~0.12 0.691
血红蛋白HGB/(g/L) 171.75±36.51 155.00±10.28 162.13±6.69 146.88±13.73 110.00~190.00 0.118
平均红细胞血红蛋白含量
MCH/pg		 25.60±0.93 25.55±1.16 25.81±0.76 25.56±1.20 21.00~28.00 0.951
红细胞
RBC/(×1012个/L)		 2.23±0.73 2.18±0.79 2.51±0.87 2.41±0.44 5.10~8.50 0.769
平均红细胞体积
MCV/fL		 66.65±1.50 65.65±2.63 65.71±1.65 64.99±2.32 62.00~78.00 0.470
血小板
PLT/(×109个/L)		 225.63±86.16 158.00±80.75 207.13±53.65 246.25±89.87 117.00~460.00 0.165

2.5 罗伊氏乳杆菌LRA7对犬血清肝脏功能、肾脏功能和免疫功能指标的影响

由表5可知,各组之间血清ALT、AST活性和IgG含量均无显著差异(P>0.05)。HR组的血清UN含量显著低于其他各组(P<0.05),HR组的血清sIgA含量显著高于CON组和LR组(P<0.05)。
表5 罗伊氏乳杆菌LRA7对犬血清肝脏功能、肾脏功能和免疫功能指标的影响

Table 5 Effects of Lactobacillus reuteri LRA7 on serum liver function, kidney function and immune function indices of dogs (n=8)

项目
Items		 组别Groups P值
P-value
CON LR MR HR
谷丙转氨酶ALT/(U/mL) 3.33±1.19 3.54±0.83 3.97±0.67 3.79±1.06 0.562
谷草转氨酶AST/(U/mL) 2.78±0.48 2.64±0.30 2.73±0.40 2.94±0.25 0.417
尿素氮UN/(mmol/L) 11.45±4.81b 10.49±5.49b 9.29±5.57b 4.25±3.00a 0.028
免疫球蛋白G IgG/(μg/mL) 136.87±74.14 174.38±38.43 174.72±33.96 193.47±23.13 0.125
分泌型免疫球蛋白A
sIgA/(μg/mL)		 8.04±1.45b 7.94±0.55b 8.81±1.42ab 9.51±0.75a 0.030

2.6 罗伊氏乳杆菌LRA7对犬血清抗氧化指标影响

由表6可知,各组之间血清T-AOC无显著差异(P>0.05)。MR组和HR组的血清SOD活性显著高于CON组和LR组(P<0.05),LR组、MR组和HR组的血清GSH-Px活性显著高于CON组(P<0.05),HR组的血清MDA含量显著低于其他各组(P<0.05)。
表6 罗伊氏乳杆菌LRA7对犬血清抗氧化指标影响

Table 6 Effects of Lactobacillus reuteri LRA7 on serum antioxidant indices of dogs (n=8)

项目
Items		 组别Groups P值
P-value
CON LR MR HR
总抗氧化能力T-AOC/(μmol/mL) 0.29±0.02 0.29±0.04 0.28±0.03 0.28±0.01 0.759
超氧化物歧化酶SOD/(U/mL) 114.63±21.07b 133.96±27.90b 170.74±38.51a 175.80±29.49a 0.001
谷胱甘肽过氧化物酶
GSH-Px/(U/mL)		 525.97±37.00b 559.36±15.23a 564.26±6.34a 558.73±7.93a 0.003
丙二醛MDA/(nmol/mL) 0.39±0.12a 0.37±0.15a 0.38±0.07a 0.25±0.05b 0.039

3 讨论

3.1 罗伊氏乳杆菌LRA7对犬健康状况和营养物质表观消化率的影响

整个试验期间,所有试验动物未发现异常临床症状,健康状况良好。犬的体温、呼吸、脉搏等健康指标均在正常范围内,罗伊氏乳杆菌LRA7对犬的健康参数无不良影响。Lee等[18]研究表明,膳食补充乳酸菌能够改善犬的粪便评分,提高粪便质量。本研究结果显示,对照组与益生菌添加组犬的粪便评分无显著差异,所有粪便保持在理想的粪便评分范围内(3~4分)。另有研究表明,乳酸菌能够产生细菌素、有机酸、胞外多糖等物质,增加饲料的适口性和营养物质含量,促进营养物质的消化吸收,有利于提高动物生长性能[19]。而Metras等[20]和Panasevich等[21]研究表明,补充乳酸菌不影响犬的营养物质表观消化率。本研究中,罗伊氏乳杆菌LRA7对干物质、粗蛋白质、碳水化合物表观消化率无显著影响,与前人的研究结果一致,但是HR组的粗脂肪表观消化率显著高于CON组和LR组。有研究报道,益生菌可以通过产生消化酶来刺激消化道中消化酶活性,提高肠道中消化酶的数量和活性,从而提高营养物质表观消化率[22]。因此,推测罗伊氏乳杆菌LRA7提高饲粮粗脂肪表观消化率可能与脂肪酶的产生有关,并且可能存在一定的剂量效应。

3.2 罗伊氏乳杆菌LRA7对犬血常规及血清肝脏功能、肾脏功能和免疫指标的影响

血常规指标是临床健康检查的重要指标之一。红细胞是血液中数量最多的细胞,是运输氧气的媒介;白细胞是具有防御作用的免疫细胞;血小板作为血液的有形成分之一,在止血、伤口愈合、炎症反应等方面具有重要作用[23]。本研究中,对照组与益生菌添加组的血常规指标检测结果均在正常范围内。因此,从血液学方面说明罗伊氏乳杆菌LRA7对犬健康无不良影响。在犬中,血清ALT和AST是检测肝细胞膜损伤和坏死的最特异性肝脏酶,是犬肝脏功能的主要检测指标,其活性升高可能会出现肝脏功能的损伤[24]。Lucena等[24]研究表明,给犬补充屎肠球菌SF68不影响血清AST活性。而Strompfová等[25]研究表明,在比格犬饲粮中添加水解酵母导致血清AST和ALT活性显著增加。本试验中,罗伊氏乳杆菌LRA7对犬血清AST和ALT活性无显著影响,说明罗伊氏乳杆菌LRA7不会增加犬的肝脏负担。UN是评价动物机体肾脏功能的重要指标,血清UN含量升高可能会导致肾脏损伤[26]。血清UN含量是机体蛋白质代谢的产物,血清UN含量在一定范围内降低,说明机体对饲料中氮和氨基酸的利用率提高[27]。本研究中,HR组的血清UN含量显著低于其他各组,说明罗伊氏乳杆菌LRA7可能会减轻肾脏负担,同时具有提高饲料氮利用率的能力。
此外,益生菌在机体免疫方面发挥重要作用。Velez等[28]研究表明,益生菌能够通过调节性T细胞将辅助型T细胞2(Th2)转变为辅助型T细胞1(Th1),产生IgG,从而提高机体免疫功能。益生菌还可以产生黏液和sIgA,sIgA是体液免疫的主要成分,尤其是加强和维持肠道黏膜部位的免疫监视,在肠道屏障方面具有至关重要的作用[29]。本研究中,罗伊氏乳杆菌LRA7对血清IgG含量无显著影响,但是HR组的血清sIgA含量显著高于CON组和LR组,推测罗伊氏乳杆菌LRA7可能会通过免疫系统更好地维持肠道健康,从而改善机体免疫功能。Xu等[30]研究表明,饲粮中补充干酪乳杆菌、植物乳杆菌和动物双歧乳杆菌组成的混合益生菌可提高老年犬血清IgG和粪便sIgA含量。

3.3 罗伊氏乳杆菌LRA7对犬血清抗氧化指标的影响

氧化是机体细胞代谢的必须过程。氧化应激是活性氧和活性氮等在动物机体累积的结果,比如超氧阴离子自由基、羟基自由基和脂质过氧化自由基等[31]。当机体受到氧化应激时产生的高浓度活性氧,会导致机体衰老以及引发各种慢性疾病[32]。目前,有节制、均衡的抗氧化饮食被认为可能是恢复细胞良好的新陈代谢和中和过量自由基的有效方法[31]。有研究表明,微生物具有自己的抗氧化系统,能够产生多种抗氧化活性代谢产物,维持机体较低的自由基水平,减少氧化损伤[33]。SOD可以清除细胞代谢过程中产生的有害物质,是细胞抵御氧化损伤的第一道防线[34]。GSH-Px可以通过分解过氧化氢来防止细胞氧化损伤,被认为是最重要的羟自由基清除者[35]。MDA是细胞中多不饱和脂肪酸过氧化的最终产物之一,是机体氧化能力检测的重要指标[36]。Wang等[11]研究表明,在犬饲粮中添加109 CFU/mL的清酒乳杆菌可显著提高血清SOD和GSH-Px活性。本试验中,益生菌添加组的血清GSH-Px活性显著高于对照组,MR组和HR组的血清SOD活性显著高于CON组和LR组,并且HR组的血清MDA含量显著低于其他各组,说明嗜酸乳杆菌LRA7有益于提高犬的机体抗氧化能力。

4 结论

罗伊氏乳杆菌LRA7对比格犬的生长和健康状况无不良影响,能够显著提高粗脂肪表观消化率,改善肾脏功能,提高机体免疫功能和抗氧化能力。因此,罗伊氏乳杆菌LRA7可作为一种犬源益生菌产品的候选菌株。

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