动物营养学报 >

2025 , Vol. 37 >Issue 10: 6754 - 6765

DOI: https://doi.org/10.12418/CJAN2025.550

研究论文

中草药复合物对蛋鸡生产性能的影响及对蛋鸡输卵管炎性因子分泌的调节作用

  • 王萌 , 1 ,
  • 周娜娜 2 ,
  • 梁凤嘉 1 ,
  • 丁雪梅 1 ,
  • 白世平 1 ,
  • 曾秋凤 1 ,
  • 刘艳 1 ,
  • 张克英 1 ,
  • 王建萍 , 1, *
展开
  • 1 四川农业大学动物营养研究所,动物抗病营养教育部重点实验室,动物抗病营养与饲料农业农村部重点实验室,动物抗病营养四川省重点实验室,成都 611130
  • 2 通威农业发展有限公司,成都 610072
*王建萍,教授,博士生导师,E-mail:

王 萌(1999—),女,四川资阳人,硕士研究生,研究方向为家禽营养。E-mail:

Office editor: 菅景颖

收稿日期: 2025-01-24

  网络出版日期: 2025-10-15

基金资助

国家自然科学基金(32472931)

收起

Effects of Herbal Compound on Performance of Laying Hens and Its Regulatory Mechanisms on Secretion of Oviductal Inflammatory Factors of Laying Hens

  • WANG Meng , 1 ,
  • ZHOU Nana 2 ,
  • LIANG Fengjia 1 ,
  • DING Xuemei 1 ,
  • BAI Shiping 1 ,
  • ZENG Qiufeng 1 ,
  • LIU Yan 1 ,
  • ZHANG Keying 1 ,
  • WANG Jianping , 1, *
Expand
  • 1 Key Laboratory of Animal Disease-Resistance Nutrition of Sichuan Province, Key Laboratory of Animal Disease-Resistance Nutrition and Feed of Ministry of Agriculture and Rural Affairs, Key Laboratory of Animal Disease-Resistance Nutrition of Ministry of Education, Animal Nutrition Institute, Sichuan Agricultural University, Chengdu 611130, China
  • 2 Tongwei Agricultural Development Co., Ltd., Chengdu 610072, China
*professor, E-mail:

Received date: 2025-01-24

  Online published: 2025-10-15

Fold

摘要

本试验旨在通过研究中草药复合物(HC)对蛋鸡生产性能和蛋品质的影响,以及其对脂多糖(LPS)和有机化学制剂(OCR,有效成分为苯酚)联合攻毒下蛋鸡输卵管炎性因子分泌的调节作用,为保障输卵管健康、提高蛋鸡生产性能提供理论依据。试验分为饲养和攻毒2个阶段:饲养阶段采用单因素试验设计,设定饲粮中HC添加量分别为0和2 000 mg/kg,试验期为8周;攻毒阶段采用2×2双因素试验设计,因素1为LPS+OCR攻毒与否,因素2为HC添加与否,试验期为96 h。在饲养阶段,将192只蛋鸡随机分为2组(每组8个重复,每个重复12只鸡),分别饲喂HC添加量为0(CON组)和2 000 mg/kg(HC组)的饲粮;在攻毒阶段,从饲养阶段结束后的CON组和HC组中各选取健康无输卵管疾病的蛋鸡16只(每个重复选取2只),分别分为2个处理(1个处理进行攻毒,1个处理不进行攻毒),共4个处理(4个重复/处理,2只/重复),饲养48 h后对攻毒处理用LPS+OCR攻毒1次,攻毒48 h后采样。结果显示:1)在饲养阶段,饲粮中添加HC显著降低了蛋鸡的平均日采食量、料蛋比、鸡蛋的暗斑分值、血清中碱性磷酸酶(ALP)和天冬氨酸转氨酶(AST)活性(P<0.05),并显著提高了蛋壳强度和血清中还原型谷胱甘肽含量(P<0.05),但显著升高了血清中丙氨酸转氨酶(ALT)活性(P<0.05)。2)攻毒阶段,LPS+OCR攻毒显著增加了蛋鸡血清中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量(P<0.05),显著增加了输卵管膨大部、峡部和子宫部炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α和γ-干扰素(IFN-γ)含量(P<0.05),并显著降低膨大部、峡部和子宫部白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-10(IL-10)含量(P<0.05)。3)攻毒阶段,饲粮中添加HC显著降低了蛋鸡膨大部IL-1β、IL-6、IFN-γ含量(P<0.05),显著增加了膨大部IL-10含量(P<0.05),显著降低了峡部IL-6、TNF-α、IFN-γ含量(P<0.05),显著降低了子宫部IL-1β、IL-6含量(P<0.05),并显著增加子宫部IL-4、IL-10含量(P<0.05)。4)LPS+OCR攻毒和饲粮在蛋鸡输卵管(膨大部、峡部、子宫部)部分炎性因子含量上存在显著的互作效应(P<0.05),主要表现为饲粮中添加HC显著降低了攻毒蛋鸡膨大部、峡部和子宫部IFN-γ等促炎因子含量(P<0.05),同时显著提高了膨大部和峡部IL-4等抗炎因子含量(P<0.05)。综上所述,在饲养阶段,饲粮中添加2 000 mg/kg HC可改善机体抗氧化能力,减轻肝脏损害,提高蛋鸡的生产性能和蛋品质;在攻毒阶段,饲粮中添加2 000 mg/kg HC可调节血清和输卵管的炎症反应和增强机体抗氧化能力,从而保障蛋鸡的输卵管健康。

关键词： 中草药复合物; 蛋鸡; 炎症; 生产性能; 抗氧化

本文引用格式

王萌 , 周娜娜 , 梁凤嘉 , 丁雪梅 , 白世平 , 曾秋凤 , 刘艳 , 张克英 , 王建萍 . 中草药复合物对蛋鸡生产性能的影响及对蛋鸡输卵管炎性因子分泌的调节作用[J]. 动物营养学报, 2025 , 37(10) : 6754 -6765 . DOI: 10.12418/CJAN2025.550

Abstract

This experiment aimed to investigate the effects of herbal compound (HC) on performance and egg quality of laying hens and its regulatory mechanisms on inflammatory cytokine secretion in oviduct tissues under lipopolysaccharide (LPS) combined with organic chemical reagent (OCR, the active ingredient was phenol) challenge, thereby providing theoretical foundations for enhancing performance and maintaining oviduct health. The experiment consisted of two phases: feeding phase and challenge phase. In the feeding phase, a single-factor experimental design was adopted with two levels of HC supplementation (0 and 2 000 mg/kg) in the diet, and the trial period was 8 weeks. In the challenge phase, a 2×2 double-factor experimental design was used, where factor 1 represented whether LPS+OCR was administered or not, and factor 2 indicated whether HC was supplemented or not, with a trial period of 96 hours. During the feeding phase, one hundred and ninety-two laying hens were randomly divided into two groups (each with 8 replicates and 12 hens per replicate) and fed diets containing either 0 (CON group) or 2 000 mg/kg of HC (HC group). During the challenge phase, sixteen healthy, tubal disease-free hens from CON group and HC group (2 per replicate) were selected for two treatments: one receiving LPS+OCR challenge and the other not. Four treatments were established (4 replicates per treatment, 2 hens per replicate), with all hens being challenged once after 48 hours of feeding using LPS+OCR. Samples were collected 48 hours post-challenge. The results showed as follows: 1) during the feeding phase, HC supplementation significantly reduced average daily feed intake, feed-to-egg ratio, dark-spotted score of egg, serum activities of alkaline phosphatase (ALP) and aspartate transaminase (AST) (P<0.05), while significantly improved eggshell strength and reduced glutathione (GSH) content (P<0.05). However, it significantly increased serum alanine aminotransferase (ALT) activity (P<0.05). 2) During the challenge phase, LPS+OCR challenge significantly elevated serum contents of interleukin-1β (IL-1β), interleukin-6 (IL-6) and tumor necrosis factor-α (TNF-α) (P<0.05), and significantly increased IL-1β, IL-6, TNF-α and interferon-γ (IFN-γ) in magnum, isthmus and uterus of oviduct (P<0.05), while significantly decreased interleukin-4 (IL-4) and interleukin-10 (IL-10) in these oviduct tissues (P<0.05). 3) HC supplementation during the challenge phase significantly reduced magnum IL-1β, IL-6 and IFN-γ contents (P<0.05), while significantly elevated magnum IL-10 content (P<0.05), significantly decreased isthmus IL-6, TNF-α and IFN-γ contents (P<0.05), significantly reduced uterine IL-1β and IL-6 contents (P<0.05), and significantly increased uterine IL-4 and IL-10 contents (P<0.05). 4) The LPS+OCR challenge and diet exhibited significant interactive effects on some inflammatory factor contents in the oviduct tissues (magnum, isthmus and uterus) of laying hens (P<0.05). Specifically, the addition of HC to the diet significantly reduced pro-inflammatory factors such as IFN-γ in these three oviduct tissues (P<0.05), while significantly increased anti-inflammatory factors including IL-4 in the magnum and isthmus of challenged laying hens (P<0.05). In summary, dietary supplementation with 2 000 mg/kg HC during the feeding phase can enhance the body antioxidant capacity, alleviate the hepatic injury, and improve the performance and egg quality of laying hens. During the challenge phase, dietary supplementation with 2 000 mg/kg HC can modulate the inflammatory responses in both serum and oviduct and enhance the antioxidant capacity of body, thereby maintaining oviduct health in laying hens.

Key words： herbal compound; laying hens; inflammation; performance; antioxidant

现代规模化、集约化养殖方式大大增加了蛋鸡体内的氧化应激和炎症反应,引起输卵管损伤,进而导致鸡蛋蛋品质不高、破损率增加和蛋鸡生产性能下降等问题[1]。我国是世界上最大的蛋鸡饲养国和鸡蛋生产及消费国[2],随着国家“减抗、禁抗”行动的推行,急需寻找一种安全高效、无残留、不易产生耐药性的天然绿色抗生素替代品,来增加蛋鸡的抗氧化和抗炎能力,保障输卵管健康,从而提高蛋鸡的生产性能,增加养殖户的经济收益。
中草药含有多种活性成分,具有调节机体代谢及免疫机能、提高生产性能和抗氧化能力的作用,同时因其安全无毒、无残留以及不产生耐药性的优势越来越被人们所关注[3]。蒲公英、益母草、党参和鸡血藤等中草药具有清热解毒、消肿散结、活血调经,养血生津、益气健脾等作用。蒲公英粗提物对于动物养殖过程中发生的氧化应激具有缓解的作用[4]。药理研究证实益母草具有抗菌、抗氧化、抗炎和镇痛作用[5]。党参提取物具有抗氧化、抗病毒、抗炎等作用,可改善肥胖诱导的小鼠体内葡萄糖代谢紊乱,缓解胰岛素抵抗,并改善脂质代谢[6-7]。而鸡血藤为补血活血的传统中药,具有抗炎和抗氧化的作用[8-9]。然而,在蒲公英、益母草、党参、鸡血藤联合添加对蛋鸡生产性能的影响和保障输卵管健康方面的研究尚不明确。因此,本试验尝试将蒲公英、益母草、党参、鸡血藤混合为中草药复合物(HC),将其添加到蛋鸡饲粮中,探讨该HC对蛋鸡生产性能的影响,并进一步探究其对脂多糖(LPS)和有机化学制剂(OCR,有效成分为苯酚)联合攻毒蛋鸡输卵管炎性因子分泌的调节作用,以明确该HC对蛋鸡输卵管健康的保障作用,为其在蛋鸡饲粮中的应用提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

试验所用HC由40%蒲公英粉、20%益母草粉、30%党参粉和10%鸡血藤粉组成,经代谢组学测定(上海派森诺生物科技股份有限公司),其主要活性成分为生物碱225.19 mg/g,有机酸81.37 mg/g,黄酮26.99 mg/g,木酚素4.96 mg/g。LPS溶液的配制:将LPS(Sigma)溶于一定量的磷酸盐缓冲溶液(PBS,pH=7.2,Solarbio)中,使LPS浓度达到3.7 mg/mL;OCR溶液配制:按照25%液化苯酚、2.5%吐温-20(Tween-20)、2.5%司班-20(Span-20)、10%葡萄糖、60% PBS(pH=7.2,Solarbio)的比例混合而成。攻毒试剂LPS+OCR溶液参考前人研究[10-11]配制:将LPS溶液和OCR溶液按照1∶1(体积比)进行混合,于锥形瓶中密封保存,备用。

1.2 试验设计

试验分为饲养和攻毒2个阶段,试验周期共为60 d。饲养阶段采用单因素试验设计,选取192只55周龄的健康海兰灰蛋鸡,随机分为2组,每组8个重复,每个重复12只鸡,分别饲喂添加0(CON组)和2 000 mg/kg HC(HC组)的基础饲粮,试验期为8周。攻毒阶段采用2×2双因素试验设计,即LPS+OCR攻毒与否[灌注PBS(-)、灌注LPS+OCR溶液(+)]和添加HC与否(基础饲粮、基础饲粮+2 000 mg/kg HC),在饲养阶段结束后,从CON组和HC组各选取健康无输卵管疾病(蛋鸡精神状态良好,产蛋率不低于《海兰灰饲养手册》对应饲养阶段的平均产蛋率,泄殖腔处干净无分泌物,所产鸡蛋蛋壳表面干净光滑无血迹)的蛋鸡16只(每个重复选取2只鸡),并分别随机分为2个处理,共形成LPS+OCR(-)+CON、LPS+OCR(-)+HC、LPS+OCR(+)+CON和LPS+OCR(+)+HC 4个处理(4个重复/处理,2只鸡/重复)。饲养48 h后对需攻毒的处理灌注1次LPS+OCR溶液进行攻毒,不需攻毒的处理则灌注等量的PBS,攻毒后48 h后采样。
攻毒方法:一人保定蛋鸡,使泄殖腔朝上,用手按压泄殖腔两侧,使输卵管口暴露,另一人将LPS+OCR溶液灌注到输卵管子宫部,灌注完成后将蛋鸡倒置5 min再放回笼中。每只鸡灌注剂量为2 mL。
基础饲粮参考《鸡饲养标准》(NY/T 33—2004)配制,其组成及营养水平见表1。试验所用饲粮形态为粉料,HC采用逐级混匀的方式添加到基础饲粮中。
表1 基础饲粮组成及营养水平(饲喂基础)

Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet (as-fed basis) %

项目Items 含量Content
原料Ingredients
玉米Corn 62.06
豆粕Soybean meal (43%) 25.55
大豆油Soybean oil 1.00
碳酸钙CaCO3 9.50
磷酸氢钙CaHPO4 1.00
L-赖氨酸盐酸盐L-Lys·HCl 0.05
DL-蛋氨酸DL-Met 0.20
苏氨酸Thr 0.02
碳酸氢钠NaHCO3 0.10
氯化钠NaCl 0.25
氯化胆碱Choline chloride (50%) 0.10
维生素和矿物质预混料
Vitamin and mineral premix1)		 0.17
合计Total 100.00
营养水平Nutrient levels2)
代谢能ME/(MJ/kg) 11.40
粗蛋白质CP 16.12
钙Ca 3.96
总磷TP 0.46
可消化赖氨酸DLys 0.76
可消化蛋氨酸DMet 0.42
可消化苏氨酸DThr 0.52
可消化色氨酸DTrp 0.22

1)预混料为每千克饲粮提供The premix provides the following per kg of the diet:VA 8 000 IU,VD3 2 000 IU,VE 20 IU,VK3 3.2 mg,VB1 1.2 mg,VB2 6.4 mg,VB6 4.0 mg,VB12 0.2 mg,叶酸 folic acid 1 mg,烟酰胺nicotinamide 40.0 mg,泛酸 pantothenic acid 12.0 mg,生物素 biotin 1.11 mg,Fe (FeSO4·H2O) 60.0 mg,Cu (CuSO4·5H2O) 8.0 mg,Mn (MnSO4·H2O) 60.0 mg,Zn (ZnSO4·H2O) 80.0 mg,Se (Na2SeO3) 0.30 mg,I (KI) 0.35 mg。2)代谢能为计算值,其余为实测值。ME is a calculated value, while the others are measured values.

1.3 饲养管理

所有动物试验均按照《四川农业大学实验动物饲养与使用准则》开展,并经四川农业大学动物伦理委员(中国成都)会批准(批准号SICAU-AWC-2023-564)。所有蛋鸡饲养在环境可控的鸡舍内(四川农业大学教学试验基地)。饲养管理按常规饲养管理程序进行,每周进行1次严格消毒,定期打扫圈舍卫生,保持室温在20~22 ℃,采用的光照程序为16L∶8D。试验期间所有鸡只自由采食和饮水,每天饲喂2次(09:00、15:00),于每天16:00记录蛋鸡产蛋情况。进行不同处理的蛋鸡均匀分布在鸡舍内,以减小环境的影响。

1.4 指标测定

1.4.1 饲粮营养成分

粗蛋白质、钙、总磷含量分别采用凯氏定氮法(GB/T 6432—2018)、高锰酸钾法(GB/T 6436—2018)和分光光度法(GB/T 6437—2018)测定;氨基酸含量参考GB/T 18246—2019中原理,使用LA8080全自动氨基酸分析仪测定;代谢能参考《中国饲料成分及营养价值表(2022年第33版)》计算得出。

1.4.2 生产性能

试验期间以重复为单位,每日记录产蛋数、产蛋重、不合格蛋(脏蛋、畸形蛋、破蛋、软蛋、沙壳蛋)数量和采食量,计算产蛋率、平均蛋重、不合格蛋率、平均日采食量和料蛋比。

1.4.3 蛋品质

在试验的第28、56天,在每个重复随机选鸡蛋4枚(32枚/组),采用蛋壳强度测定仪(ETG-1601A,日本Robotmation公司)测定蛋壳强度;采用蛋品质自动分析仪(EMT-5200型,日本Robotmation公司)测定蛋白高度、哈氏单位;采用千分尺测定蛋壳厚度(取蛋壳中部、钝端和尖端的平均值);在试验的第28、56天,在每个重复随机选鸡蛋4枚(32枚/组),将鸡蛋收集并储存5 d后依据王德贺[12]报道的4级分类法对鸡蛋进行暗斑评分。暗斑评分标准:1级暗斑蛋表现为不透光,极少数细微亮点,无黑斑;2级暗斑蛋表现为轻度透光,较多细微亮点,无黑斑;3级暗斑蛋表现为中度透光,大量细微亮点,少量黑斑;4级暗斑蛋表现为高度透光和各种亮点,大量黑斑。图1为暗斑蛋4级分类图。
图1 暗斑蛋4级分类图

从左到右依次为1级、2级、3级、4级暗斑蛋。

Fig.1 4-level classification diagram of dark-spotted eggs[12]

From left to right, they are grade 1, grade 2, grade 3 and grade 4 dark-spotted eggs.

1.4.4 血清生化指标

在饲养阶段结束时和攻毒后48 h,每个重复随机选取1只蛋鸡,翅下静脉采血,离心后取血清于-20 ℃保存。使用全自动生化分析仪测定血清中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)和碱性磷酸酶(ALP)活性。

1.4.5 血清和输卵管抗氧化指标

攻毒后48 h后,先禁食8 h,然后每个重复随机选择1只蛋鸡,颈静脉放血处死,取输卵管膨大部、峡部和子宫部的中部,液氮速冻后于-80 ℃保存。按照试剂盒(南京建成生物工程研究所)说明书,测定血清和输卵管(膨大部、峡部、子宫部)还原型谷胱甘肽(GSH)含量。

1.4.6 血清和输卵管炎性细胞因子

按照试剂盒(南京建成生物工程研究所)说明书,测定血清和输卵管(膨大部、峡部、子宫部)白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-10(IL-10)和γ-干扰素(IFN-γ)含量。

1.5 数据统计分析

利用SAS 9.4软件对试验结果进行方差分析。饲养阶段数据采用单因素方差分析,组间差异采用t检验(t test);而攻毒阶段数据采用双因素方差分析,模型主效应包括LPS+OCR攻毒和饲粮效应以及两者间的互作效应,当方差分析显著时,采用Duncan氏法进行多重检验。所有数据均以平均值和均值标准误(SEM)表示,P<0.05表示差异显著。

2 结果

2.1 HC对蛋鸡生产性能和蛋品质的影响(饲养阶段)

由表2可知,与CON组相比,饲粮中添加HC显著降低了蛋鸡的第5~8周的平均日采食量、第1~8周的平均日采食量和第5~8周的料蛋比(P<0.05)。蛋鸡各阶段的产蛋率、平均蛋重和不合格蛋率在CON组和HC组之间皆无显著差异(P>0.05)。
表2 HC对蛋鸡生产性能的影响

Table 2 Effects of HC on performance of laying hens (n=12)

项目
Items		 产蛋率
Laying rate/%		 平均蛋重
Average egg
weight/g		 不合格蛋率
Percentage of
unqualified eggs/%		 平均日采食量
ADFI/g		 料蛋比
F/E
第1~4周Weeks 1 to 4
CON组CON group 89.33 62.95 4.83 118.49 2.12
HC组HC group 89.91 62.71 3.17 115.82 2.06
均值标准误SEM 1.853 0.343 0.910 1.127 0.041
P值P-value 0.826 0.635 0.217 0.116 0.305
第5~8周Weeks 5 to 8
CON组CON group 88.21 62.81 5.98 119.14 2.16
HC组HC group 90.93 62.60 3.47 115.97 2.04
均值标准误SEM 1.520 0.330 1.167 0.874 0.032
P值P-value 0.225 0.651 0.151 0.023 0.022
第1~8周Weeks 1 to 8
CON组CON group 88.76 62.88 5.41 118.82 2.13
HC组HC group 90.42 62.65 3.32 115.86 2.05
均值标准误SEM 1.526 0.329 0.977 0.918 0.032
P值P-value 0.456 0.635 0.154 0.041 0.080

P<0.05表示差异显著。下表同。

P<0.05 mean significant difference. The same as below.

由表3可知,与CON组相比,饲粮中添加HC显著降低了第4周时鸡蛋暗斑分值(P<0.05),显著提高了第8周时鸡蛋蛋壳强度(P<0.05)。第4周和第8周时鸡蛋的哈氏单位、蛋白高度和蛋壳厚度在CON组和HC组之间皆无显著差异(P>0.05)。
表3 HC对蛋鸡蛋品质的影响

Table 3 Effects of HC on egg quality of laying hens (n=32)

项目
Items		 蛋壳强度
Eggshell
strength/(kg/cm2)		 蛋壳厚度
Eggshell
thickness/mm		 暗斑分值
Dark-spotted score		 蛋白高度
Albumen
height/mm		 哈氏单位
Haugh unit
第4周Week 4
CON组CON group 3.96 0.37 2.45 8.25 89.41
HC组HC group 4.00 0.37 2.06 8.10 89.15
均值标准误SEM 0.091 0.003 0.085 0.116 0.681
P值P-value 0.802 0.997 0.006 0.383 0.787
第8周Week 8
CON组CON group 3.84 0.37 2.24 7.75 87.83
HC组HC group 4.04 0.37 1.97 8.12 89.29
均值标准误SEM 0.066 0.003 0.118 0.193 1.013
P值P-value 0.041 0.802 0.136 0.201 0.323

2.2 HC对蛋鸡血清抗氧化和生化指标的影响(饲养阶段)

由表4可知,与CON组相比,饲粮中添加HC显著降低了血清中ALP和AST活性(P<0.05),但显著升高了GSH含量和ALT活性(P<0.05)。
表4 HC对蛋鸡血清抗氧化和生化指标的影响

Table 4 Effects of HC on antioxidant and biochemical indexes in serum of laying hens (n=10)

项目
Items		 还原型谷胱甘肽
GSH/(μmol/L)		 碱性磷酸酶
ALP/(U/L)		 丙氨酸转氨酶
ALT/(U/L)		 天冬氨酸转氨酶
AST/(U/L)
CON组CON group 0.17 139.38 18.49 178.53
HC组HC group 0.66 108.49 21.56 150.52
均值标准误SEM 0.142 10.107 0.901 6.736
P值P-value 0.032 0.047 0.034 0.011

2.3 HC对LPS+OCR攻毒蛋鸡血清生化指标和炎性细胞因子的影响(攻毒阶段)

由表5可知,LPS+OCR攻毒蛋鸡血清中AST活性和促炎因子IL-1β、IL-6、TNF-α含量显著高于未攻毒蛋鸡(PLPS+OCR<0.05,PLPS+OCR是以LPS+OCR攻毒作为主效应的P值,下同);饲粮中添加HC显著降低蛋鸡血清中AST活性、IL-1β含量(PDiet<0.05,PDiet是以饲粮作为主效应的P值,下同)。LPS+OCR攻毒与饲粮的互作效应对蛋鸡血清中TNF-α含量有显著影响(PInteraction<0.05,PInteraction是以LPS+OCR攻毒和饲粮的互作效应作为主效应的P值,下同),具体表现为:无论饲粮中是否添加HC,LPS+OCR攻毒均会显著增加蛋鸡血清中TNF-α含量(P<0.05)。
表5 HC对LPS+OCR攻毒蛋鸡血清生化指标和炎性细胞因子的影响

Table 5 Effects of HC on biochemical indexes and inflammatory cytokines in serum of laying hens challenged with LPS+OCR (n=4)

项目
Items		 碱性磷酸酶
ALP/(U/L)		 丙氨酸
转氨酶
ALT/(U/L)		 天冬氨酸
转氨酶
AST/(U/L)		 白细胞
介素-1β
IL-1β/(pg/mL)		 白细胞
介素-6
IL-6/(pg/mL)		 肿瘤坏
死因子-α
TNF-α/(pg/mL)
处理Treatments
LPS+OCR(-)+CON 529.50 14.54 222.20 44.91 19.13 55.76b
LPS+OCR(-)+HC 384.75 16.73 163.69 40.63 17.53 61.40b
LPS+OCR(+)+CON 809.25 16.19 244.70 74.71 31.18 82.30a
LPS+OCR(+)+HC 697.00 12.82 221.67 60.12 29.04 77.12a
均值标准误SEM 148.296 1.678 14.368 3.652 1.405 2.099
LPS+OCR攻毒LPS+OCR challenge
- 457.13 15.63 192.94 42.77 18.33 58.58
+ 753.13 14.50 233.18 67.42 30.11 79.71
饲粮Diet
CON 669.38 15.36 233.45 59.81 25.15 69.03
HC 540.88 14.77 192.68 50.38 23.29 69.26
主效应P值P-value of main effects
LPS+OCR攻毒
LPS+OCR challenge		 0.069 0.513 0.016 <0.001 <0.001 <0.001
饲粮Diet 0.403 0.731 0.015 0.024 0.210 0.914
LPS+OCR攻毒×饲粮
LPS+OCR challenge×diet		 0.915 0.124 0.241 0.183 0.851 0.024

-:攻毒;+:不攻毒;CON:基础饲粮;HC:添加HC饲粮。同列数据肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05)。下表同。

-: challenge; +: no challenge; CON: basal diet; HC: HC-supplemented diet. Values in the same column with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05). The same as below.

2.4 HC对LPS+OCR攻毒蛋鸡膨大部抗氧化指标和炎性细胞因子的影响(攻毒阶段)

由表6可知,LPS+OCR攻毒蛋鸡膨大部IL-1β、IL-6、TNF-α和IFN-γ含量显著高于未攻毒蛋鸡(PLPS+OCR<0.05),同时GSH、IL-4和IL-10含量显著低于未攻毒的蛋鸡(PLPS+OCR<0.05)。饲粮中添加HC显著降低蛋鸡膨大部IL-1β、IL-6和IFN-γ的含量(PDiet<0.05),同时显著增加蛋鸡膨大部中IL-10含量(PDiet<0.05)。LPS+OCR攻毒与饲粮的互作效应对蛋鸡膨大部IL-1β、IL-6、IL-4、TNF-α、IFN-γ含量有显著影响(PInteraction<0.05),具体表现为:对于攻毒蛋鸡,饲粮中添加HC显著降低膨大部IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-γ含量(P<0.05),显著提高IL-4含量(P<0.05);但对于未攻毒蛋鸡,饲粮中添加HC仅显著提高膨大部IL-6、IFN-γ含量(P<0.05)。
表6 HC对LPS+OCR攻毒蛋鸡膨大部抗氧化指标和炎性细胞因子的影响

Table 6 Effects of HC on antioxidant indexes and inflammatory cytokines in magnum of laying hens challenged with LPS+OCR (n=4)

项目
Items		 还原型
谷胱甘肽
GSH/
(μmol/g prot)		 白细胞
介素-1β
IL-1β/
(pg/g prot)		 白细胞
介素-6
IL-6/
(pg/g prot)		 肿瘤坏
死因子-α
TNF-α/
(pg/g prot)		 白细胞
介素-4
IL-4/
(pg/g prot)		 白细胞
介素-10
IL-10/
(pg/g prot)		 γ-干扰素
IFN-γ/
(pg/g prot)
处理Treatments
LPS+OCR(-)+CON 29.62 52.82c 17.53c 48.79c 44.50a 70.27 214.22c
LPS+OCR(-)+HC 23.36 47.19c 26.23b 57.41c 41.16ab 84.52 238.43b
LPS+OCR(+)+CON 11.37 87.80a 35.71a 98.63a 32.45c 52.16 321.31a
LPS+OCR(+)+HC 13.59 66.71b 19.42c 73.53b 38.99b 64.52 258.79b
均值标准误SEM 5.722 3.278 1.426 4.264 1.246 1.990 7.313
LPS+OCR攻毒LPS+OCR challenge
- 26.49 50.00 21.88 53.10 42.83 77.39 226.32
+ 12.48 77.25 27.57 86.08 35.72 58.34 290.05
饲粮Diet
CON 20.49 70.31 26.62 73.71 38.48 61.21 267.76
HC 18.47 56.95 22.83 65.47 40.07 74.52 248.61
主效应P值P-value of main effects
LPS+OCR攻毒
LPS+OCR challenge		 0.031 <0.001 0.002 <0.001 <0.001 <0.001 <0.001
饲粮Diet 0.730 0.002 0.021 0.077 0.225 <0.001 0.022
LPS+OCR攻毒×饲粮
LPS+OCR challenge×diet		 0.473 0.036 <0.001 0.002 0.002 0.644 <0.001

2.5 HC对LPS+OCR攻毒蛋鸡峡部抗氧化指标和炎性细胞因子的影响(攻毒阶段)

由表7可知,LPS+OCR攻毒的蛋鸡峡部IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-γ含量显著高于未攻毒的蛋鸡(PLPS+OCR<0.05),且IL-4、IL-10含量显著低于未攻毒的蛋鸡(PLPS+OCR<0.05)。饲粮中添加HC显著降低蛋鸡峡部IL-6、TNF-α、IFN-γ含量(PDiet<0.05)。LPS+OCR攻毒与饲粮的互作效应对蛋鸡峡部IL-1β、IFN-γ、IL-4、IL-10含量有显著影响(PInteraction<0.05),具体表现为:对于攻毒蛋鸡,饲粮中添加HC显著降低峡部IL-1β、IFN-γ含量(P<0.05),显著提高IL-4、IL-10含量(P<0.05);对于未攻毒蛋鸡,饲粮中添加HC却显著降低峡部IL-4、IL-10含量(P<0.05),显著提高IFN-γ含量(P<0.05)。
表7 HC对LPS+OCR攻毒蛋鸡峡部抗氧化指标和炎性细胞因子的影响

Table 7 Effects of HC on antioxidant indexes and inflammatory cytokines in isthmus of laying hens hallenged with LPS+OCR (n=4)

项目
Items		 还原型
谷胱甘肽
GSH/
(μmol/g prot)		 白细胞
介素-1β
IL-1β /
(pg/g prot)		 白细胞
介素-6
IL-6/
(pg/g prot)		 肿瘤坏
死因子-α
TNF-α/
(pg/g prot)		 白细胞
介素-4
IL-4/
(pg/g prot)		 白细胞
介素-10
IL-10/
(pg/g prot)		 γ-干扰素
IFN-γ/
(pg/g prot)
处理Treatments
LPS+OCR(-)+CON 238.23 50.70c 22.68 64.87 44.45a 75.89a 203.84d
LPS+OCR(-)+HC 261.53 56.14bc 18.21 50.98 35.59b 62.47b 263.88b
LPS+OCR(+)+CON 415.71 80.88a 32.95 91.15 30.52c 50.18c 335.16a
LPS+OCR(+)+HC 294.17 65.89b 26.24 82.96 37.21b 67.43b 228.84c
均值标准误SEM 82.692 3.923 1.265 4.640 1.193 1.976 7.770
LPS+OCR攻毒LPS+OCR challenge
- 249.88 53.42 20.44 57.92 40.02 69.18 233.86
+ 354.94 73.39 29.59 87.05 33.87 58.81 282.00
饲粮Diet
CON 326.97 65.79 27.81 78.01 37.48 63.04 269.50
HC 277.85 61.02 22.22 66.97 36.40 64.95 246.36
主效应P值P-value of main effects
LPS+OCR攻毒
LPS+OCR challenge		 0.228 <0.001 <0.001 <0.001 <0.001 <0.001 <0.001
饲粮Diet 0.564 0.247 0.001 0.035 0.381 0.352 0.012
LPS+OCR攻毒×饲粮
LPS+OCR challenge×diet		 0.398 0.023 0.395 0.550 <0.001 <0.001 <0.001

2.6 HC对LPS+OCR攻毒蛋鸡子宫部抗氧化指标和炎性细胞因子的影响(攻毒阶段)

由表8可知,LPS+OCR攻毒蛋鸡子宫部IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-γ含量显著高于未攻毒蛋鸡(PLPS+OCR<0.05),且IL-4、IL-10含量显著低于未攻毒蛋鸡(PLPS+OCR<0.05)。饲粮中添加HC显著降低蛋鸡子宫部IL-1β、IL-6含量(PDiet<0.05),同时显著升高IL-4、IL-10含量(PDiet<0.05)。LPS+OCR攻毒与饲粮的互作效应对蛋鸡子宫部IL-6、TNF-α、IFN-γ含量有显著影响(PInteraction<0.05),具体表现为:对于攻毒蛋鸡,饲粮中添加HC显著降低子宫部IL-6、TNF-α、IFN-γ含量(P<0.05);对于未攻毒蛋鸡,饲粮中添加HC显著降低子宫部IL-6含量(P<0.05),但显著提高TNF-α含量(P<0.05)。
表8 HC对LPS+OCR攻毒蛋鸡子宫部抗氧化指标和炎性细胞因子的影响

Table 8 Effects of HC on antioxidant indexes and inflammatory cytokines in uterus of laying hens hallenged with LPS+OCR (n=4)

项目
Items		 还原型
谷胱甘肽
GSH /
(μmol/g prot)		 白细胞
介素-1β
IL-1β/
(pg/g prot)		 白细胞
介素-6
IL-6/
(pg/g prot)		 肿瘤坏
死因子-α
TNF-α /
(pg/g prot)		 白细胞
介素-4
IL-4/
(pg/g prot)		 白细胞
介素-10
IL-10/
(pg/g prot)		 γ-干扰素
IFN-γ/
(pg/g prot)
处理Treatments
LPS+OCR(-)+CON 606.54 59.67 28.91b 45.67c 37.45 63.99 227.46c
LPS+OCR(-)+HC 600.69 55.89 21.96c 65.42b 45.65 81.85 238.11c
LPS+OCR(+)+CON 398.85 81.85 36.69a 85.21a 27.73 51.11 315.38a
LPS+OCR(+)+HC 509.86 66.22 20.99c 56.24bc 37.71 69.09 274.63b
均值标准误SEM 70.039 3.146 1.450 4.515 1.439 2.199 10.069
LPS+OCR攻毒LPS+OCR challenge
- 603.61 57.78 25.43 55.55 41.55 72.92 232.78
+ 454.36 74.03 28.84 70.72 32.72 60.10 295.01
饲粮Diet
CON 502.69 70.76 32.80 65.44 32.59 57.55 271.42
HC 555.27 61.05 21.47 60.83 41.68 75.47 256.37
主效应P值P-value of main effects
LPS+OCR攻毒
LPS+OCR challenge		 0.054 <0.001 0.037 0.006 <0.001 <0.001 <0.001
饲粮Diet 0.467 0.009 <0.001 0.328 <0.001 <0.001 0.161
LPS+OCR攻毒×饲粮
LPS+OCR challenge×diet		 0.420 0.084 0.011 <0.001 0.548 0.978 0.025

3 讨论

3.1 HC对蛋鸡的影响

研究证实,中草药及其提取物具有相对较高的安全性和较低的副作用,能改善家禽的机体健康、生产性能和蛋品质[13-14]。研究显示,在饲粮中加入蒲公英多糖后,显著提高了蛋鸡的产蛋率[15]。同时,有研究显示,在饲粮中添加500 mg/kg的蒲公英提高了肉鸡饲料转化率[16]。也有研究表明,饲粮中添加益母草能显著提高蛋鸡的产蛋率、平均日产蛋量,并降低料蛋比,显著提高蛋壳强度[17]。党参含有多种生物活性成分,如多糖、皂苷、黄酮等[18]。有研究发现,饲粮中添加党参茎叶粉可以提高肉仔鸡的生长性能和抗氧化能力[19]。一项研究显示,鸡血藤提取物能够降低小鼠肝脏中铁浓度,提高肝脏抗氧化能力,促进修复肝脏组织损伤[20]。在本研究中,与饲喂基础饲粮的蛋鸡相比,饲粮中添加HC显著降低了蛋鸡的平均日采食量和料蛋比,同时降低了鸡蛋的暗斑分值,提高了蛋壳强度。
产蛋高峰期过后的蛋鸡摄入高能量会加大肝脏的代谢负担,导致蛋鸡脂代谢紊乱,增加肝脏中的脂肪沉积,因此老龄蛋鸡更易发生脂肪肝综合征[21-22]。转氨酶是非特异性细胞内功能酶,它是反映肝实质损害的指标,主要包括ALT和AST,测定血清中AST、ALT活性有利于肝脏功能异常的诊断和鉴别[23]。ALP是反映胆汁淤滞为主的酶,血清中ALP活性升高往往提示肝胆出现问题[24]。本试验结果表明,饲粮中添加HC通过降低蛋鸡血清中ALP、AST活性,提高GSH含量和ALT活性,增强了蛋鸡的抗氧化能力,减轻了肝脏损伤。但本试验结果显示,HC可升高蛋鸡血清中ALT活性,与预期相悖,其具体原因有待深入研究。饲粮中添加HC提高了蛋鸡血清抗氧化能力,可能与中草药内富含黄酮类、多酚类、多糖类等活性物质有关,这些活性物质不仅可为机体提供营养,还可以调节机体的健康,进而改善机体的抗氧化功能。

3.2 HC对LPS+OCR攻毒蛋鸡的影响

在一项对54个大规模蛋鸡养殖场的研究中发现,约1/5的鸡患有输卵管炎,表明此病在蛋鸡集约化养殖模式中的高发性[25]。而姬晓琪[26]研究发现,输卵管炎造模组蛋鸡血清中白细胞介素-2(IL-2)、IL-6、TNF-α和IFN-γ含量显著增加。近年也有研究者使用LPS+OCR进行蛋鸡输卵管炎造模,其中OCR破坏蛋鸡输卵管黏膜,LPS导致输卵管产生炎症[10]。当蛋鸡受到这种负面刺激时,会改变体内炎性因子的分泌,产生输卵管炎症反应[11]。有研究显示,当蛋鸡的输卵管受到LPS+OCR攻毒时,会导致输卵管子宫部、膨大部、峡部IFN-γ、TNF-α和IL-6的mRNA表达水平升高[10]。本试验中,LPS+OCR攻毒增加了蛋鸡血清和输卵管各部的IL-1β、IL-6、TNF-α含量。以上结果表明,LPS+OCR攻毒会促进蛋鸡输卵管炎性因子分泌,降低抗氧化能力,成功导致蛋鸡输卵管发生炎症反应。
Li等[27]研究发现,蒲公英多糖可通过调节急性肠炎模型小鼠体内炎症因子和抗氧化活性物质的表达来缓解肠道炎症。而Wu等[28]研究发现,益母草提取物降低了LPS诱导的小鼠和牛子宫内膜中Toll样受体4(TLR4)的表达和炎症因子的分泌,从而缓解子宫内膜炎。Chen等[29]的研究也表明,党参提取物通过调节巨噬细胞的能力,有效抑制炎性细胞因子IL-6、IL-1β和TNF-α的产生,并减轻LPS诱导的小鼠败血症。同时,在Jin等[30]的LPS诱导炎症的体内外试验中,鸡血藤能够减少炎性细胞因子TNF-α、IL-6和IL-1β的含量。本研究表明,饲粮中添加2 000 mg/kg HC降低了蛋鸡血清和输卵管各部的炎性因子含量,以增强抗炎和抗氧化能力等方式减轻蛋鸡输卵管炎症反应。由此可知,LPS+OCR攻毒导致蛋鸡输卵管炎症反应,HC对其输卵管炎性损伤的预防效果可能与HC的抗炎作用有关,具体影响机制还需要进一步研究。

4 结论

在饲养阶段,饲粮中添加HC(2 000 mg/kg)对蛋鸡生产性能、蛋品质以及机体健康有改善作用。LPS和OCR联合攻毒会影响蛋鸡输卵管各部的抗氧化指标、生化指标、炎性细胞因子分泌,在受到攻毒刺激后,连续摄入8周HC(2 000 mg/kg)的蛋鸡输卵管各部的抗氧化能力和炎性因子分泌情况要优于未摄入HC的蛋鸡。这表明HC可以增加蛋鸡的抗氧化和抗炎能力,减轻蛋鸡机体和输卵管的炎症反应,从而达到保障输卵管健康的作用。

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