Chinese Journal of Animal Nutrition >

2023 , Vol. 35 >Issue 2: 874 - 891

DOI: https://doi.org/10.12418/CJAN2023.085

RESEARCH PAPER

Effects of Lactobacillus salivarius SNK-6 and Dietary Crude Protein Levels on Performance， Egg Quality， Serum Biochemical Indices and Intestinal Tissue Morphology of Wenshang Luhua Chickens

  • LIU Wei , 1 ,
  • HAN Haixia 1 ,
  • LI Dapeng 1 ,
  • LEI Qiuxia 1 ,
  • YAN Huaxiang 2 ,
  • ZHOU Yan 1 ,
  • LIU Jie 1 ,
  • WANG Jie 1 ,
  • CAO Dingguo 1 ,
  • LI Huimin 1 ,
  • CHEN Fu 3 ,
  • LI Fuwei , 1, *
Expand
  • 1 Poultry Breeding Engineering Technology Center of Shandong Province， Institute of Poultry Science， Shandong Academy of Agricultural Sciences， Jinan 250100， China
  • 2 National Poultry Engineering Technology Center，Institute of Animal Husbandry and Veterinary Medicine， Shanghai Academy of Agricultural Sciences，Shanghai 201106， China
  • 3 Qingdao Agricultural University， Qingdao 266109， China
* associate professor， E-mail：

Received date: 2022-08-02

  Online published: 2023-02-13

Fold

Abstract

The study was conducted to investigate the effects of Lactobacillus salivarius SNK-6 and dietary crude protein （CP） levels on performance， egg quality， intestinal tissue morphology， and serum biochemical， antioxidant and immune indices of Wenshang Luhua chickens. A total of 432 healthy 40-week-old Wenshang Luhua hens were randomly divided into 6 groups with 6 replicates in each group and 24 chickens in each replicate. Using a two-factor with three levels experimental design， 0 and 2×108 CFU/kg Lactobacillus salivarius SNK-6 were supplemented to 14.5%， 15.5% and 16.5% CP level basal diets， respectively. The preparatory experiment period was 2 weeks， and the experiment period was 10 weeks. The results showed as follows： 1） dietary Lactobacillus salivarius SNK-6 had no significant effects on the performance of Wenshang Luhua chickens （P>0.05）. The average daily feed intake and laying rate in 15.5% and 16.5% CP level groups were significantly higher than those in 14.5% CP level group （P<0.05）. The interaction of Lactobacillus salivarius SNK-6 and dietary CP level had significant effects on the average daily feed intake and laying rate （P<0.05）. 2） Dietary Lactobacillus salivarius SNK-6 significantly increased the eggshell strength （P<0.05）. The yolk color in 16.5% CP level group was significantly higher than that in 15.5% and 14.5% CP level groups （P<0.05）. The interaction of Lactobacillus salivarius SNK-6 and dietary CP level had no significant effects on the egg quality indices （P>0.05）. 3） Dietary Lactobacillus salivarius SNK-6 significantly increased the contents of calcium and phosphorus in serum （P<0.05）. The uric acid content in serum in 15.5% and 16.5% CP level groups was significantly higher than that in 14.5% CP level group （P<0.05）. The interaction of Lactobacillus salivarius SNK-6 and dietary CP level had significant effects on the uric acid content in serum （P<0.05）. 4） Dietary Lactobacillus salivarius SNK-6 significantly increased the catalase activity in serum （P<0.05）. Dietary CP levels and the interaction of Lactobacillus salivarius SNK-6 and dietary CP level had no significant effects on the serum antioxidant indices （P>0.05）. 5） Dietary Lactobacillus salivarius SNK-6 significantly increased the immunoglobulin G content in serum and secretory immunoglobulin A content in cecum （P<0.05）. The interferon-α content in serum in 16.5% CP level group was significantly higher than that in 14.5% CP level group （P<0.05）， and the secretory immunoglobulin A content in cecum in 15.5% and 16.5% CP level groups was significantly higher than that in 14.5% CP level group （P<0.05）. The interaction of Lactobacillus salivarius SNK-6 and dietary CP level had significant effects on the immunoglobulin G content in serum and the secretory immunoglobulin A content in cecum （P<0.05）. 6） Dietary Lactobacillus salivarius SNK-6 significantly increased the villus height in jejunum and ileum （P<0.05）. The villus height and the ratio of villus height to crypt depth in duodenum and jejunum in 15.5% and 16.5% CP level groups were significantly higher than those in 14.5% CP level group （P<0.05）. The interaction of Lactobacillus salivarius SNK-6 and dietary CP level had significant effects on the villus height and the ratio of villus height to crypt depth in duodenum as well as the villus height in jejunum （P<0.05）. In conclusion， dietary 2×108 CFU/kg Lactobacillus salivarius SNK-6 can improve the eggshell strength， increase the contents of calcium， phosphorus and immunoglobulin G in serum and the secretory immunoglobulin A content in cecum， and improve the tissue morphology of small intestine of Wenshang Luhua chickens from 40 to 50 weeks of age； under these experimental conditions， the dietary CP level for Wenshang Luhua chickens from 40 to 50 weeks of age can be reduced to 15.5% by supplementing with 2×108 CFU/kg Lactobacillus salivarius SNK-6.

Key words： Lactobacillus salivarius; crude protein; Wenshang Luhua chickens; egg quality; intestinal tissue morphology

Cite this article

LIU Wei , HAN Haixia , LI Dapeng , LEI Qiuxia , YAN Huaxiang , ZHOU Yan , LIU Jie , WANG Jie , CAO Dingguo , LI Huimin , CHEN Fu , LI Fuwei . Effects of Lactobacillus salivarius SNK-6 and Dietary Crude Protein Levels on Performance， Egg Quality， Serum Biochemical Indices and Intestinal Tissue Morphology of Wenshang Luhua Chickens[J]. Chinese Journal of Animal Nutrition, 2023 , 35(2) : 874 -891 . DOI: 10.12418/CJAN2023.085

目前，我国饲料一般都以玉米-豆粕型为主，但国产大豆产量远达不到需求量，导致我国饲料业大豆过度依赖于进口，这成为影响国家粮食安全的重要风险因素。国家蛋鸡产业技术体系提供的数据显示，2021年我国蛋鸡年消耗豆粕达1 100万t。随着人民对优质动物产品需求量的持续增加，饲料中大豆等蛋白质原料的缺口将越来越大。同时，蛋白质原料作为饲粮的重要组成成分，其成本在饲料配制的总成本中占到35%以上[1]，而2020—2021年2年间豆粕价格上涨超过20%[2]，成为影响畜产品价格波动的重要因素。研究表明，饲粮粗蛋白质（CP）水平每降低1个百分点，可减少8%~10%总氮的排放量[3]，并对畜禽健康和福利等具有重要意义[4]。作为实验室内最杰出的益生菌之一，乳杆菌已被广泛研究并应用于食品工业、畜牧业和医疗保健行业[5⇓-7]。其中，唾液乳杆菌（Lactobacillus salivarius）不仅具有较强的抗菌消炎[8]、免疫调控[9]和调节微生物群[10]的作用，而且能够促进蛋白质吸收和氨基酸转运与代谢[11-12]。因此，为适应大宗饲料原料供需趋紧的新形势，结合添加益生菌等添加剂构建豆粕减量提效的蛋鸡饲粮配方，促进饲料粮保供稳市，既是涉及粮食安全的国家重大需求，也是蛋鸡产业发展的最急需解决的瓶颈技术。张帅[13]研究了饲粮CP水平对汶上芦花鸡生产性能和蛋品质的影响，结果表明汶上芦花鸡31~36周龄适宜的饲粮CP水平为15.55%。齐明星等[14]研究了饲粮不同代谢能、CP水平对43周龄新杨绿壳蛋鸡生产性能、蛋品质及血清生化指标的影响，认为饲粮代谢能、CP水平分别为11.08 MJ/kg和15.00%时，更有利于绿壳蛋鸡产蛋后期生产性能的发挥和蛋品质的改善。Abou-Elkhair等[4]研究表明，低CP水平饲粮中添加色氨酸、苏氨酸和缬氨酸可改善肉鸡的生产性能、健康状况和免疫力。Zhou等[15]研究表明，在低CP水平饲粮中添加丝氨酸可能通过增强蛋鸡体液和回肠黏膜免疫功能，以及减轻回肠炎症来改善其生产性能。张思轩等[16]研究了在平衡6种可消化氨基酸条件下，不同类型低CP水平饲粮对蛋鸡生产性能、蛋品质及血清生化指标的影响无显著差异。刘婷等[17]和杨广达[18]研究表明，乳杆菌能够通过促进饲粮中氨基酸的平衡性吸收，使进入机体的各种氨基酸的组成和需要一致，促进机体氨基酸转运吸收和蛋白质合成。不过，目前关于饲粮降低CP水平的研究多集中在理想氨基酸模式和豆粕替代物等方面，对于通过在汶上芦花鸡饲粮中添加益生菌降低饲粮CP水平的研究还鲜见报道。因此，本试验通过研究在汶上芦花鸡不同CP水平饲粮中添加唾液乳杆菌SNK-6对其生产性能、蛋品质、血清生化指标和肠道组织形态的影响，为探明汶上芦花鸡产蛋期适宜的CP水平和添加唾液乳杆菌SNK-6在降低CP水平等方面的应用提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

唾液乳杆菌SNK-6为粉状，菌粉中活菌数为1.00×1011 CFU/g，由上海市农业科学院提供。

1.2 试验设计和饲养管理

试验于2021年6月1日起在山东省农业科学院家禽研究所试验鸡场进行。选取432只40周龄、体重相近的健康汶上芦花母鸡，随机分为6个组，每组6个重复，每个重复12只鸡。采用2因素3水平试验设计，参照《鸡饲养标准》（NY/T 33—2004），设计配制CP水平分别为14.5%、15.5%和16.5%的3种玉米-豆粕型基础饲粮，并根据唾液乳杆菌SNK-6（中试）产品说明书，在基础饲粮中分别添加0和2×108 CFU/kg唾液乳杆菌SNK-6（正试期开始时连续添加2 d，之后正试期每周末添加1次）；基础饲粮组成及营养水平见表1，试验设计见表2。采用3层层叠式笼养，试验期间试验鸡自由采食、饮水。预试期2周，期间按各重复统计产蛋量，结束时根据统计结果进行适当调整，使各组间在正试期开始时鸡体重和产蛋率均差异不显著（P>0.05），正试期10周。
表1 基础饲粮组成及营养水平（风干基础）

Table 1 Composition and nutrient levels of basal diets （air-dry basis）%

项目
Items		 饲粮CP水平 Dietary CP levels/%
14.5 15.5 16.5
原料 Ingredients
玉米 Corn 65.17 63.24 61.30
豆粕 Soybean meal 19.90 22.61 25.33
油粉 Oil powder 1.00 1.00 1.00
贝壳粉 Shell powder 10.00 10.00 10.00
小麦麸 Wheat bran 1.93 1.15 0.37
预混料 Premix1） 2.00 2.00 2.00
合计 Total 100.00 100.00 100.00
营养水平 Nutrient levels2）
代谢能 Metabolic energy/（MJ/kg） 11.33 11.33 11.33
粗蛋白质 Crude protein 14.50 15.50 16.50
蛋氨酸 Methionine 0.36 0.37 0.37
赖氨酸 Lysine 0.74 0.76 0.77
苏氨酸 Threonine 0.57 0.60 0.61
色氨酸 Tryptophan 0.16 0.17 0.18
半胱氨酸 Cysteine 0.24 0.25 0.25
异亮氨酸 Isoleucine 0.54 0.57 0.61
钙 Calcium 3.60 3.60 3.60
有效磷 Available phosphorus 0.32 0.32 0.32

1）预混料为每千克饲粮提供 The premix provided the following per kilogram of diets：VA 7 000 IU，VD3 2 500 IU，VE 15 IU，VK3 2.5 mg，VB1 1.5 mg，VB2 5.1 mg，VB6 4 mg，烟酸 niacin 35 mg，叶酸 folic acid 1 mg，泛酸 pantothenic acid 12 mg，Mn 62.5 mg，Zn 60 mg，Fe 70 mg，Cu 10 mg，I 1 mg，Se 0.5 mg，NaCl 3 g。

2）营养水平均为计算值。Nutrient levels were all calculated values.

表2 试验设计

Table 2 Experiment design

组别
Groups		 饲粮CP水平
Dietary CP levels/%		 唾液乳杆菌SNK-6添加水平
Lactobacillus salivarius SNK-6 supplemental levels/（CFU/kg）
Ⅰ 14.5 0
Ⅱ 14.5 2×108
Ⅲ 15.5 0
Ⅳ 15.5 2×108
Ⅴ 16.5 0
Ⅵ 16.5 2×108

1.3 指标测定及方法

1.3.1 生产性能和蛋品质测定

试验期间，以重复为单位记录每天的产蛋数、蛋重、不合格蛋数（破蛋、软蛋、畸形蛋、砂壳蛋数）和每周的采食量；试验结束后，以重复为单位计算每组的平均日采食量、平均蛋重、产蛋率、不合格蛋率和料蛋比。
正试期结束时（第10周末），每个重复随机抽取6个鸡蛋测定蛋品质。采用游标卡尺测定鸡蛋的纵径和横径，计算蛋形指数（蛋形指数=纵径/横径）；采用色差仪（5SE型，英国TSS公司）分别测定鸡蛋钝端、中端和尖端的蛋壳颜色，3个部位测定的平均值代表测定值；采用蛋壳强度测试仪（FGV-10XY型，日本Nidec公司）测定蛋壳强度；采用多功能蛋品质检测仪（EMT-5200型，日本Robotmation公司）测定蛋重、蛋黄颜色、蛋白高度和哈氏单位；使用40目筛过滤蛋清，过滤后的蛋清为稀蛋清，其余为浓蛋清，采用电子天平称量蛋黄重、浓蛋清重、稀蛋清重和蛋壳重，分别计算蛋黄比例（蛋黄比例=蛋黄重/蛋重）、蛋壳比例（蛋壳比例=蛋壳重/蛋重）和浓稀蛋清比（浓稀蛋清比=浓蛋清/稀蛋清）；采用蛋壳厚度测量仪（NFN-380型，日本FHK公司）分别测量鸡蛋钝端、中端和尖端蛋壳厚度，3个部位测定的平均值代表测定值。

1.3.2 血清生化、抗氧化和免疫指标测定

试验结束时，每个重复选取1只鸡，空腹12 h后翅静脉采血4 mL，静置1 h后3 500 r/min 离心10 min，取上清置于-80 ℃冰箱保存。使用全自动血液生化分析系统（AU5400，Beckman Coulter，美国）测定血清中总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、球蛋白（GLB）、尿素氮（UN）、尿酸（UA）、总胆固醇（T-CHO）、甘油三酯（TG）和葡萄糖（GLU）含量；血清中钙（Ca）和磷（P）含量，碱性磷酸酶（AKP）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和过氧化氢酶（CAT）活性，以及总抗氧化能力（T-AOC）和丙二醛（MDA）含量采用南京建成生物工程研究所试剂盒进行测定；血清中免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白M（IgM）、干扰素-α（INF-α）、干扰素-β（INF-β）、白细胞介素-1β（IL-1β）和白细胞介素-6（IL-6）含量采用武汉基因美生物科技有限公司试剂盒进行测定。

1.3.3 肠道组织形态和盲肠分泌型免疫球蛋白A含量（sIgA）测定

试验结束后，快速解剖翅静脉采血后的鸡，取3 cm左右盲肠，使用玻片刮取肠黏膜后收集于冻存管中，-20 ℃保存，使用武汉基因美生物科技有限公司试剂盒测定盲肠sIgA含量；取十二指肠、空肠和回肠中段约2 cm，使用4%多聚甲醛进行固定，使用乙醇对肠道组织脱水，然后用二甲苯清洗后进行浸蜡、包埋、切片和苏木精-伊红（HE）染色，在显微镜下观察拍照，通过Image-Pro Plus软件测量小肠各肠断绒毛高度和隐窝深度，并计算绒毛高度/隐窝深度值。

1.4 数据统计分析

试验数据利用Excel 2010整理后应用SAS 9.2软件中的一般线性模型（GLM）程序进行方差分析，以重复为试验单元，模型的主要效应包括饲粮是否添加SNK-6和CP水平以及二者之间的互作效应；F检验显著差异者，以最小显著差异（LSD）法比较平均值间的差异显著性；结果以“平均值±标准差”表示，P<0.05为差异显著，0.05≤P<0.10为差异有显著趋势。

2 结果与分析

2.1 唾液乳杆菌SNK-6和饲粮CP水平对汶上芦花鸡生产性能的影响

由表3可知，饲粮添加唾液乳杆菌SNK-6有提高汶上芦花鸡平均日采食量（P=0.074）和降低不合格蛋率（P=0.057）的趋势。饲粮CP水平对平均日采食量和产蛋率有显著影响（P<0.05），其中15.5%和16.5%CP水平组平均日采食量和产蛋率显著高于14.5%CP水平组（P<0.05）；随着CP水平的降低，料蛋比有升高的趋势（P=0.092）。唾液乳杆菌SNK-6和饲粮CP水平的互作效应对平均日采食量和产蛋率有显著影响（P<0.05），其中Ⅵ组平均日采食量显著高于Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅴ组（P<0.05），Ⅳ组和Ⅴ组显著高于Ⅰ组和Ⅱ组（P<0.05），Ⅳ组显著高于Ⅰ组~Ⅲ组（P<0.05），Ⅱ和Ⅲ组显著高于Ⅰ组（P<0.05）；Ⅳ组和Ⅵ组产蛋率显著高于Ⅰ组和Ⅱ组（P<0.05），Ⅲ组和Ⅴ组显著高于Ⅰ组（P<0.05）。
表3 唾液乳杆菌SNK-6和饲粮CP水平对汶上芦花鸡生产性能的影响

Table 3 Effects of Lactobacillus salivarius SNK-6 and dietary CP levels on performance of Wenshang Luhua chickens

项目
Items		 平均日采食量
Average daily
feed intake/
（g/d）		 产蛋率
Laying
rate/%		 平均蛋重
Average egg
weight/g		 料蛋比
Feed/egg		 不合格蛋率
Unqualified
egg ratio/%
组别 Groups
Ⅰ 95.69±0.37e 54.98±2.42c 49.72±4.37 3.53±0.46 0.31±0.12
Ⅱ 96.49±0.50d 57.93±2.16bc 48.51±4.56 3.46±0.44 0.22±0.11
Ⅲ 96.97±0.41cd 60.39±2.22ab 50.03±4.56 3.24±0.40 0.32±0.12
Ⅳ 97.75±0.36ab 63.10±2.31a 48.70±4.12 3.20±0.38 0.18±0.06
Ⅴ 97.51±0.39bc 61.59±2.37ab 51.37±5.11 3.11±0.42 0.29±0.10
Ⅵ 98.33±0.46a 63.94±2.01a 50.33±4.37 3.08±0.35 0.26±0.06
主效应分析 Main effect analysis
饲粮CP水平
Dietary CP levels/%		 14.5 96.09±0.59b 56.46±2.61b 49.12±4.37 3.50±0.40 0.27±0.11
15.5 97.36±0.55a 61.74±2.51a 49.37±3.95 3.22±0.35 0.25±0.12
16.5 97.92±0.59a 62.77±2.35a 50.85±4.29 3.10±0.35 0.27±0.08
唾液乳杆菌SNK-6添加水平
Lactobacillus salivarius
SNK-6 supplemental
levels/（CFU/kg）		 0 96.72±0.88 58.99±3.66 50.37±4.13 3.29±0.41 0.31±0.10
2×108 97.52±0.90 61.66±3.38 49.18±3.87 3.25±0.38 0.22±0.08
P值 P-value
饲粮CP水平 Dietary CP level 0.001 0.001 0.498 0.092 0.753
唾液乳杆菌SNK-6
Lactobacillus salivarius SNK-6		 0.074 0.128 0.536 0.815 0.057
饲粮CP水平×唾液乳杆菌
SNK-6 Dietary CP level×Lactobacillus
salivarius SNK-6		 0.001 0.003 0.970 0.692 0.503

同列数据肩标不同小写字母表示差异显著（P<0.05），无字母或相同小写字母表示差异不显著（P>0.05）。下表同。

In the same column， values with different small letter superscripts mean significant difference （P<0.05）， while with no letter or the same small letter superscripts mean no significant difference （P>0.05）. The same as below.

2.2 唾液乳杆菌SNK-6和饲粮CP水平对汶上芦花鸡蛋品质的影响

由表4可知，饲粮添加唾液乳杆菌SNK-6可显著提高蛋壳强度（P<0.05）。饲粮CP水平对蛋黄颜色有显著影响（P<0.05），其中16.5%CP水平组蛋黄颜色显著高于15.5%和14.5%CP水平组（P<0.05）；随着CP水平的降低，蛋白高度有降低的趋势（P=0.096）。唾液乳杆菌SNK-6和饲粮CP水平的互作效应对蛋品质指标均无显著影响（P>0.05）。
表4 唾液乳杆菌SNK-6和饲粮CP水平对汶上芦花鸡蛋品质的影响

Table 4 Effects of Lactobacillus salivarius SNK-6 and dietary CP levels on egg quality of Wenshang Luhua chickens

项目
Items		 蛋重
Egg
weight/g		 蛋形指数
Egg shape
index		 蛋壳颜色
Egg shell
color		 蛋壳强度
Eggshell
hardness/
（kg/cm2）		 蛋壳厚度
Egg shell
thickness/
mm		 蛋壳比例
Egg shell
ratio/%		 蛋黄比例
Egg yolk
ratio/%		 蛋黄颜色
Yolk color		 蛋白高度
Albumen
height/mm		 哈氏单位
Haugh unit		 浓稀蛋清比
Thick white/
thin white/%
组别 Groups
Ⅰ 49.70
±4.14		 1.33
±0.05		 56.07
±6.26		 4.28
±0.67		 40.79
±3.37		 11.31
±1.18		 34.06
±2.08		 5.51
±1.13		 4.41
±0.43		 69.05
±10.29		 1.66
±0.59
Ⅱ 48.78
±3.37		 1.32
±0.03		 54.18
±6.08		 4.98
±0.67		 41.79
±3.32		 11.62
±1.14		 34.86
±2.21		 5.54
±2.40		 4.43
±1.03		 72.29
±12.00		 1.74
±0.67
Ⅲ 49.98
±3.30		 1.31
±0.05		 59.94
±7.00		 4.18
±0.69		 38.86
±3.64		 10.87
±1.00		 33.96
±2.30		 7.58
±1.28		 4.73
±0.93		 70.13
±10.27		 1.97
±0.64
Ⅳ 49.10
±0.96		 1.34
±0.04		 50.98
±6.28		 4.76
±0.72		 39.93
±3.54		 9.96
±11.21		 34.89
±2.39		 7.62
±2.54		 4.76
±1.10		 73.70
±14.30		 2.07
±0.08
Ⅴ 51.59
±4.76		 1.33
±0.04		 54.21
±4.90		 4.22
±0.93		 39.39
±2.85		 10.91
±0.87		 33.06
±1.89		 8.16
±1.40		 5.26
±0.92		 75.92
±10.18		 1.62
±0.49
Ⅵ 50.71
±3.59		 1.32
±0.04		 52.39
±5.88		 4.91
±0.61		 40.32
±3.10		 11.19
±0.03		 33.83
±2.03		 8.18
±2.26		 5.67
±0.96		 78.83
±9.70		 1.68
±0.54
主效应分析 Main effect analysis
饲粮CP水平
Dietary CP
levels/%		 14.5 49.24
±3.41		 1.33
±0.04		 55.13
±5.62		 4.63
±0.71		 41.29
±3.04		 11.47
±1.05		 34.46
±1.97		 5.53
±1.68b		 4.42
±0.71		 70.67
±10.15		 1.70
±0.57
15.5 49.54
±2.23		 1.33
±0.04		 55.46
±7.71		 4.47
±0.71		 39.40
±3.26		 11.04
±1.03		 34.43
±2.16		 7.60
±1.80b		 4.75
±0.91		 71.92
±11.31		 2.02
±0.41
16.5 51.15
±3.80		 1.33
±0.04		 53.30
±4.94		 4.56
±0.80		 39.86
±2.71		 11.05
±0.87		 33.45
±1.80		 8.17
±1.68a		 5.52
±0.86		 77.38
±9.03		 1.65
±0.46
唾液乳杆菌SNK-6添加水平
Lactobacillus salivarius
SNK-6 supplemental
levels/（CFU/kg）		 0 50.42
±3.67		 1.32
±0.04		 56.74
±5.87		 4.22
±0.67b		 39.68
±2.99		 11.03
±0.91		 33.69
±1.88		 7.08
±1.64		 4.83
±0.81		 71.70
±9.43		 1.75
±0.53
2×108 49.53
±2.66		 1.33
±0.33		 52.52
±5.45		 4.88
±0.58a		 40.68
±3.00		 11.34
±1.01		 34.53
±1.99		 7.11
±2.40		 4.95
±1.05		 74.94
±10.93		 1.83
±0.47
项目
Items		 蛋重
Egg
weight/g		 蛋形指数
Egg shape
index		 蛋壳颜色
Egg shell
color		 蛋壳强度
Eggshell
hardness/
（kg/cm2）		 蛋壳厚度
Egg shell
thickness/
mm		 蛋壳比例
Egg shell
ratio/%		 蛋黄比例
Egg yolk
ratio/%		 蛋黄颜色
Yolk color		 蛋白高度
Albumen
height/mm		 哈氏单位
Haugh unit		 浓稀蛋清比
Thick white/
thin white/%
P值 P-value
饲粮CP水平 Dietary CP level 0.345 0.945 0.576 0.729 0.318 0.490 0.414 0.042 0.096 0.298 0.228
唾液乳杆菌SNK-6
Lactobacillus salivarius SNK-6		 0.563 0.901 0.133 0.042 0.489 0.505 0.374 0.976 0.789 0.510 0.738
饲粮CP水平×唾液乳杆菌
SNK-6 Dietary CP level×Lactobacillus
salivarius SNK-6		 0.396 0.491 0.130 0.242 0.345 0.456 0.364 0.150 0.155 0.352 0.371

2.3 唾液乳杆菌SNK-6和饲粮CP水平对汶上芦花鸡血清生化指标的影响

由表5可知，饲粮添加唾液乳杆菌SNK-6可显著提高汶上芦花鸡血清Ca、P含量（P<0.05），有降低血清ALB（P=0.071）、UN（P=0.055）、TG（P=0.081）和GLU（P=0.090）含量的趋势。饲粮CP水平对血清UA含量有显著影响（P<0.05），其中15.5%和16.5%CP水平组血清UA含量显著高于14.5%CP水平组（P<0.05）；随着饲粮CP水平的降低，血清GLB（P=0.052）、UN（P=0.076）和GLU（P=0.074）有降低的趋势。唾液乳杆菌SNK-6和饲粮CP水平的互作效应对血清UA含量有显著影响（P<0.05），其中Ⅴ组血清UA含量显著高于Ⅰ组和Ⅱ组（P<0.05），Ⅲ组和Ⅳ组显著高于Ⅱ组（P<0.05）。
表5 唾液乳杆菌SNK-6和饲粮CP水平对汶上芦花鸡血清生化指标的影响

Table 5 Effects of Lactobacillus salivarius SNK-6 and dietary CP levels on serum biochemical indices of Wenshang Luhua chickens

2.4 唾液乳杆菌SNK-6和饲粮CP水平对汶上芦花鸡血清抗氧化指标的影响

由表6可知，饲粮添加唾液乳杆菌SNK-6能够显著提高汶上芦花鸡血清CAT活性（P<0.05），有降低血清MDA含量的趋势（P=0.088）。饲粮CP水平以及唾液乳杆菌SNK-6和饲粮CP水平的互作效应对血清抗氧化指标均无显著影响（P>0.05）。
表6 唾液乳杆菌SNK-6和饲粮CP水平对汶上芦花鸡血清抗氧化指标的影响

Table 6 Effects of Lactobacillus salivarius SNK-6 and dietary CP levels on serum antioxidant indices of Wenshang Luhua chickens

项目
Items		 总抗氧化能力
T-AOC/
（U/mL）		 谷胱甘肽过
氧化物酶
GSH-Px/（U/mL）		 过氧化氢酶
CAT/
（U/mL）		 超氧化物
歧化酶
SOD/（U/mL）		 丙二醛
MDA/
（nmol/mL）
组别 Groups
Ⅰ 6.03±1.02 429.95±69.51 3.35±0.18 247.76±18.95 6.55±1.15
Ⅱ 6.53±0.82 434.39±58.27 3.53±0.23 258.67±17.26 5.74±1.35
Ⅲ 7.02±1.17 433.71±61.18 3.39±0.11 266.51±21.39 6.31±0.91
Ⅳ 7.29±1.21 438.51±55.33 3.67±0.26 271.57±19.81 5.50±0.83
Ⅴ 7.20±0.75 443.86±62.85 3.54±0.13 268.19±16.50 6.28±1.22
Ⅵ 7.39±0.92 440.92±66.16 3.75±0.20 276.26±20.70 5.41±1.09
主效应分析 Main effect analysis
饲粮CP水平
Dietary CP levels/%		 14.5 6.28±0.87 432.17±57.42 3.44±0.21 253.22±17.28 6.15±1.21
15.5 7.16±1.07 436.11±52.24 3.53±0.24 269.04±18.65 5.91±0.90
16.5 7.30±0.76 442.39±57.74 3.65±0.19 272.23±17.32 5.85±1.14
唾液乳杆菌SNK-6添加水平
Lactobacillus salivarius SNK-6
supplemental levels/（CFU/kg）		 0 6.75±1.02 435.84±56.30 3.43±0.15b 260.82±19.20 6.38±0.96
2×108 7.07±0.95 437.94±52.12 3.65±0.22a 268.83±18.49 5.55±0.97
P值 P-value
饲粮CP水平 Dietary CP level 0.147 0.768 0.133 0.174 0.658
唾液乳杆菌SNK-6
Lactobacillus salivarius SNK-6		 0.502 0.936 0.024 0.381 0.088
饲粮CP水平×唾液乳杆菌SNK-6
Dietary CP level×Lactobacillus
salivarius SNK-6		 0.156 0.807 0.161 0.126 0.274

2.5 唾液乳杆菌SNK-6和饲粮CP水平对汶上芦花鸡血清免疫指标和盲肠sIgA含量的影响

由表7可知，饲粮添加唾液乳杆菌SNK-6能够显著提高汶上芦花鸡血清IgG和盲肠sIgA含量（P<0.05），有提高血清IL-6含量的趋势（P=0.080）。饲粮CP水平对血清INF-α和盲肠sIgA含量有显著影响（P<0.05），其中16.5%CP水平组血清INF-α含量显著高于14.5%CP水平组（P<0.05），15.5%和16.5%CP水平组盲肠sIgA含量显著高于14.5%CP水平组（P<0.05）；随着饲粮CP水平的降低，血清IgA（P=0.089）和IgG（P=0.060）含量有降低的趋势。唾液乳杆菌SNK-6和饲粮CP水平的互作效应对血清IgG和盲肠sIgA含量有显著影响（P<0.05），Ⅳ组~Ⅵ组血清IgG含量显著高于Ⅰ组（P<0.05），Ⅳ组和Ⅵ组盲肠sIgA含量显著高于其他组（P<0.05），Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅴ组盲肠sIgA含量显著高于Ⅰ组（P<0.05）。
表7 唾液乳杆菌SNK-6和饲粮CP水平对汶上芦花鸡血清免疫指标和盲肠sIgA含量的影响

Table 7 Effects of Lactobacillus salivarius SNK-6 and dietary CP levels on serum immune indices and cecal sIgA content of Wenshang Luhua chickens

项目
Items		 白细胞
介素-1β
IL-1β/
（pg/mL）		 白细胞
介素-6
IL-6/
（pg/mL）		 干扰素-α
INF-α/
（pg/mL）		 干扰素-β
INF-β/
（pg/mL）		 免疫球
蛋白A
IgA/（μg/mL）		 免疫球
蛋白G
IgG/（μg/mL）		 免疫球
蛋白M
IgM/（ng/mL）		 分泌型免
疫球蛋白A
sIgA/（μg/g）
组别 Groups
Ⅰ 6.80±0.90 73.21±6.19 71.22±7.98 50.26±13.86 8.04±1.13 0.96±0.29b 66.06±12.56 15.16±1.73c
Ⅱ 6.69±1.16 78.66±5.83 73.86±7.36 48.41±11.73 8.62±1.09 1.37±0.35ab 68.17±12.73 18.33±1.56b
Ⅲ 7.26±0.51 74.54±4.92 78.37±7.81 56.91±10.25 9.01±1.15 1.30±0.24ab 70.31±12.14 18.86±1.92b
Ⅳ 7.63±0.98 80.07±6.01 81.04±7.35 57.37±14.19 9.57±1.11 1.77±0.17a 73.04±12.36 22.38±1.77a
Ⅴ 7.19±1.07 79.52±5.41 81.17±7.64 55.85±12.37 9.19±1.06 1.48±0.33a 71.05±12.80 19.26±1.69b
Ⅵ 7.58±0.83 84.06±7.58 86.32±7.11 58.43±9.83 9.77±1.14 1.79±0.20a 76.41±12.09 22.49±1.26a
主效应分析 Main effect analysis
饲粮CP水平
Dietary CP levels/%		 14.5 6.75±0.93 75.94±6.15 72.54±7.02b 49.34±11.53 8.33±1.04 1.17±0.36 67.12±11.37 16.75±2.28b
15.5 7.45±0.73 77.31±5.77 79.71±6.94ab 57.14±11.07 9.29±1.06 1.54±0.32 71.68±11.06 20.62±2.54a
16.5 7.39±0.88 81.79±6.39 83.75±7.18a 57.14±10.09 9.48±1.03 1.64±0.30 73.73±11.52 20.88±2.22a
唾液乳杆菌SNK-6添加水平
Lactobacillus salivarius SNK-6
supplemental levels/（CFU/kg）		 0 7.08±0.77 75.76±5.59 76.92±8.09 54.34±11.05 8.75±1.10 1.25±0.34b 69.14±11.08 17.76±2.49b
2×108 7.30±0.98 80.93±6.15 80.41±8.31 54.74±11.47 9.32±1.10 1.64±0.30a 72.54±11.32 21.07±2.45a
P值 P-value
饲粮CP水平 Dietary CP level 0.196 0.135 0.043 0.258 0.089 0.060 0.352 0.013
唾液乳杆菌SNK-6
Lactobacillus salivarius SNK-6		 0.610 0.080 0.381 0.941 0.286 0.018 0.529 0.012
饲粮CP水平×唾液乳杆菌SNK-6
Dietary CP level×Lactobacillus
salivarius SNK-6		 0.337 0.335 0.241 0.337 0.111 0.023 0.373 0.001

2.6 唾液乳杆菌SNK-6和饲粮CP水平对汶上芦花鸡肠道组织形态的影响

由表8可知，饲粮添加唾液乳杆菌SNK-6可显著提高汶上芦花鸡空肠和回肠绒毛高度（P<0.05），有提高空肠（P=0.082）和回肠（P=0.056）绒毛高度/隐窝深度值的趋势。饲粮CP水平对十二指肠和空肠绒毛高度和绒毛高度/隐窝深度值有显著影响（P<0.05），其中15.5%和16.5%CP水平组十二指肠和空肠绒毛高度和绒毛高度/隐窝深度值均显著高于14.5%CP水平组（P<0.05）。唾液乳杆菌SNK-6和饲粮CP水平的互作效应对十二指肠绒毛高度和绒毛高度/隐窝深度值有显著影响（P<0.05），对空肠绒毛高度有显著影响（P<0.05），其中Ⅳ组~Ⅵ组十二指肠绒毛高度显著高于Ⅰ组和Ⅱ组（P<0.05），Ⅳ组~Ⅵ组十二指肠绒毛高度/隐窝深度值显著高于Ⅰ组~Ⅲ组（P<0.05），Ⅲ组十二指肠绒毛高度/隐窝深度值显著高于Ⅰ组和Ⅱ组（P<0.05），Ⅳ组和Ⅵ组空肠绒毛高度显著高于其他组（P<0.05），Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅴ组空肠绒毛高度显著高于Ⅰ组（P<0.05）。
表8 唾液乳杆菌SNK-6和饲粮CP水平对汶上芦花鸡肠道组织形态的影响

Table 8 Effects of Lactobacillus salivarius SNK-6 and dietary CP levels on intestinal tissue morphology of Wenshang Luhua chickens

3 讨论

3.1 唾液乳杆菌SNK-6和饲粮CP水平对汶上芦花鸡生产性能的影响

Lv等[19]研究表明，饲粮添加唾液乳杆菌能够显著降低蛋鸡料蛋比，对产蛋率和平均蛋重无显著影响。本研究中，饲粮添加唾液乳杆菌SNK-6有提高汶上芦花鸡平均日采食量的趋势，这与Naseem等[20]的研究结果一致。同时，饲粮添加唾液乳杆菌SNK-6有降低不合格蛋率的趋势，这可能归因于唾液乳杆菌具有提高蛋壳强度的作用[21]。先前的研究表明，降低饲粮CP水平能够降低蛋鸡生产性能[22⇓-24]，本研究中15.5%和16.5%CP水平组平均日采食量和产蛋率显著高于14.5%CP水平组，且随着饲粮CP水平的降低，料蛋比有升高的趋势。这可能因为低CP水平饲粮中总氮水平不足[25]，必需氨基酸不平衡[26]，非必需氨基酸和小肽等无法得到有效地补充，影响了蛋白质利用[27]。唾液乳杆菌SNK-6和饲粮CP水平的互作效应对平均日采食量和产蛋率有显著影响，其中Ⅳ组与Ⅴ组和Ⅵ组相比平均日采食量和产蛋率差异不显著，Ⅳ组平均日采食量显著高于Ⅰ组~Ⅲ组，Ⅳ组产蛋率显著高于Ⅰ组和Ⅱ组，说明饲粮添加唾液乳杆菌SNK-6可降低饲粮CP水平从16.5%降至15.5%对汶上芦花鸡生产性能的影响。

3.2 唾液乳杆菌SNK-6和饲粮CP水平对汶上芦花鸡蛋品质的影响

Lv等[19]研究表明，唾液乳杆菌能够显著提高哈氏单位和蛋白高度。Xu等[28]研究表明，唾液乳杆菌对蛋黄比例和蛋白高度没有显著影响，但能够显著提高蛋壳强度和蛋壳厚度，有提高哈氏单位的趋势。本研究中，饲粮添加唾液乳杆菌SNK-6可显著提高蛋壳强度，这可能是因为乳杆菌具有促进家禽肠道中维生素和矿物元素吸收利用的作用[29-30]。车彦卓等[31]研究表明，饲粮氨基酸平衡模式下CP水平由16.50%降低至14.85%未显著影响鸡蛋的平均蛋重、蛋清重、浓蛋白重、蛋白高度、哈氏单位和蛋清比例等蛋品质指标，CP水平降低至13.20%时则显著降低了平均蛋重、蛋清重、浓蛋白重和蛋白高度。本研究中，16.5%CP水平组蛋黄颜色显著高于15.5%和14.5%CP水平组，这与张帅[13]的试验结果一致，这可能与低CP水平组饲料原料中小麦麸中的着色剂含量少有关。国际上通常用蛋白高度和哈氏单位作为蛋清品质评定的指标，蛋白高度越高，蛋清越浓稠，蛋清品质越好[32]。车彦卓等[27]研究表明，在氨基酸平衡模式下，饲粮CP水平由16.50%降至14.85%未显著影响试验末期鸡蛋的蛋白高度；而在本研究中，随着饲粮CP水平的降低，蛋白高度有降低的趋势，说明饲粮过低的CP水平会导致蛋鸡体内蛋白质合成不足或者抑制蛋白质合成，进而影响蛋清品质[33]。此外，唾液乳杆菌SNK-6和饲粮CP水平的互作效应对蛋品质指标均无显著影响，说明唾液乳杆菌SNK-6和饲粮CP水平的互作效应对汶上芦花鸡蛋品质的影响较小，但是改变唾液乳杆菌SNK-6添加量或者提高饲粮CP水平差异是否存在互作效应还需通过进一步试验进行研究。

3.3 唾液乳杆菌SNK-6和饲粮CP水平对汶上芦花鸡血清生化指标的影响

血清生化指标能够反映出动物机体的健康状况、物质吸收和代谢情况。Shokryazdan等[34]研究表明，唾液乳杆菌C11、C12和C13能够显著降低肉鸡血清T-CHO和TG含量。Panda等[35]研究表明，唾液乳杆菌可降低白来航蛋种鸡的血清胆固醇含量。本研究中，饲粮添加唾液乳杆菌SNK-6能够显著提高汶上芦花鸡血清Ca、P含量，这可能与乳杆菌在增殖过程中可产生短链脂肪酸，能够降低肠道pH，形成酸性环境，从而有利于增加矿物质的溶解度，促进Ca、P等矿物质的吸收有关[36]。此外，饲粮添加唾液乳杆菌SNK-6有降低血清ALB、UN、TG和GLU含量的趋势，而这些指标都能够反映机体氨基酸代谢和利用状况，其中血清UN是蛋白质分解的最终产物，UN含量下降是蛋白质利用率提高的结果，表明唾液乳杆菌可能具有改善汶上芦花鸡氨基酸的利用、增加蛋白质沉积的作用。Ozek等[39]研究表明，随着饲粮CP水平的降低，血清UN和UA含量有升高的趋势；殷若新[38]研究表明，济宁百日鸡在饲粮CP水平为15%~17%时，随着饲粮CP水平的提高，血清UA含量呈现下降趋势；官丽辉等[39]研究表明，不同CP水平饲粮对产蛋中期塞北乌骨鸡各血液生化指标的影响均无显著性差异。本研究中，15.5%和16.5%CP水平组血清UA含量显著高于14.5%CP水平组，且随着饲粮CP水平的降低，血清GLB、UN和GLU含量有降低的趋势，这可能因为不同日龄、不同的家禽品种对CP的需要量不同，所以血液指标受饲粮CP水平的影响程度不同。唾液乳杆菌SNK-6和饲粮CP水平的互作效应对血清UA含量有显著影响，Ⅴ组血清UA含量显著高于Ⅰ组和Ⅱ组，Ⅲ组和Ⅳ组显著高于Ⅱ组，说明饲粮CP水平对血清UA含量的影响较大，饲粮添加唾液乳杆菌SNK-6对其影响较小。

3.4 唾液乳杆菌SNK-6和饲粮CP水平对汶上芦花鸡血清抗氧化指标的影响

T-AOC可在一定程度上反映机体的抗氧化性能[40]。SOD、GSH-Px和CAT形成了氧化损伤的保护系统[41]。MDA含量的高低可反映体内脂质过氧化水平[42]。曹青青[43]联合生物组学及代谢组学研究发现，唾液乳杆菌GZPH2能调节豹纹鳃棘鲈肠道菌群并促进功能性代谢物产生，增强机体抗氧化能力。本研究中，饲粮添加唾液乳杆菌SNK-6能够显著提高汶上芦花鸡血清CAT活性，有降低血清MDA含量的趋势，说明饲粮添加唾液乳杆菌SNK-6可能具有改善CAT活性，降低机体脂质过氧化产物MDA含量，缓解氧化损伤的功能。刘少凯等[44]研究表明，随着饲粮CP水平的升高，7~12周龄略阳乌鸡机体抗氧化功能具有显著增强的趋势。本研究中，饲粮CP水平以及唾液乳杆菌SNK-6和饲粮CP水平的互作效应对血清抗氧化指标均无显著影响，说明在本试验条件下，饲粮CP水平的影响未达到使机体受到氧化损伤及细胞损伤的程度。

3.5 唾液乳杆菌SNK-6和饲粮CP水平对汶上芦花鸡免疫功能的影响

蛋鸡血液、肠道中白细胞介素、干扰素等细胞因子[45-46]和免疫球蛋白含量[47]的高低能反映其免疫力。Varada等[48]研究表明，唾液乳杆菌能够提高机体免疫力。本研究中，饲粮添加唾液乳杆菌SNK-6能够显著提高汶上芦花鸡血清IgG和盲肠sIgA含量，有提高血清IL-6含量的趋势，这可能与唾液乳酸杆菌的免疫调节、抗炎和抗感染等益生特性有关[49]。官丽辉等[39]研究表明，与塞北乌骨鸡高和低CP水平饲粮相比，中CP水平饲粮可以提高血清IgA、IgM和IgG含量。张恒硕[50]研究表明，不同CP水平对63周龄京白1号蛋鸡血清IgA、IgM和IgG以及白细胞介素-4（IL-4）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量均无显著影响。本试验中，16.5%CP水平组汶上芦花鸡血清INF-α含量显著高于14.5%CP水平组，15.5%和16.5%CP水平组盲肠sIgA含量显著高于14.5%CP水平组，且随着饲粮CP水平的降低，血清IgA和IgG含量有降低的趋势，这可能与低CP水平饲粮会降低家禽组织中细胞因子的表达量有关[15]。本研究中，唾液乳杆菌SNK-6和饲粮CP水平的互作效应对血清IgG和盲肠sIgA含量有显著影响，Ⅳ组~Ⅵ组血清IgG含量显著高于Ⅰ组，Ⅳ组和Ⅵ组盲肠sIgA含量显著高于其他组，Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅴ组盲肠sIgA含量显著高于Ⅰ组，说明饲粮中添加唾液乳杆菌SNK-6可降低饲粮CP水平从16.5%降至15.5%对汶上芦花鸡免疫功能的影响。

3.6 唾液乳杆菌SNK-6和饲粮CP水平对汶上芦花鸡肠道组织形态的影响

小肠绒毛的高度、粗细以及排列密度代表着该段肠道接触食糜的多少，与食糜接触越多，对营养物质的摄入就越充分。隐窝深度与肠上皮细胞的增殖率成反比，细胞成熟率上升的表观即为隐窝深度下降，营养物质利用率升高。绒毛高度/隐窝深度值则是小肠功能的综合体现，绒毛高度/隐窝深度值提高说明小肠的消化吸收能力增强[51-52]。Sureshkumar等[53]研究表明，饲粮添加唾液乳杆菌对鸡小肠绒毛高度和隐窝深度无显著影响。本试验中，饲粮添加唾液乳杆菌SNK-6可显著提高汶上芦花鸡空肠和回肠绒毛高度，有提高空肠和回肠绒毛高度/隐窝深度值的趋势，这可能与唾液乳杆菌具有改善肠道菌群，产生短链脂肪酸等肠道调节功能有关[10]。Yu等[54]研究发现，饲粮CP水平降低3~6个百分点，虽然不影响仔猪的回肠形态结构，但会降低十二指肠和空肠绒毛高度以及空肠绒毛高度/隐窝深度值，提高空肠隐窝深度；Almeida等[55]也得出了类似的试验结论。本试验中，15.5%和16.5%CP水平组十二指肠和空肠绒毛高度、绒毛高度/隐窝深度值均显著高于14.5%CP水平组，说明降低饲粮CP水平会降低小肠的消化吸收能力[56]，这可能与饲粮中未补充合成氨基酸有关。本试验中，唾液乳杆菌SNK-6和饲粮CP水平的互作效应对十二指肠绒毛高度和绒毛高度/隐窝深度值有显著影响，对空肠绒毛高度有显著影响，Ⅳ组~Ⅵ组十二指肠绒毛高度显著高于Ⅰ组和Ⅱ组，Ⅳ组~Ⅵ组十二指肠绒毛高度/隐窝深度值显著高于Ⅰ组~Ⅲ组，Ⅲ组十二指肠绒毛高度/隐窝深度值显著高于Ⅰ组和Ⅱ组，Ⅳ组和Ⅵ组空肠绒毛高度显著高于其他组，Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅴ组空肠绒毛高度显著高于Ⅰ组，说明饲粮添加唾液乳杆菌SNK-6可降低饲粮CP水平从16.5%降至15.5%对汶上芦花鸡肠道组织形态的影响。

4 结论

饲粮添加2×108 CFU/kg唾液乳杆菌SNK-6可显著提高40~50周龄汶上芦花鸡蛋壳强度，提高血清Ca、P、IgG和盲肠sIgA含量，改善小肠组织形态。本试验条件下，通过在饲粮中添加2×108 CFU/kg唾液乳杆菌SNK-6，40~50周龄汶上芦花鸡饲粮CP水平可降低至15.5%。

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