Effects of Capsaicin on Growth Performance, Nutrient Apparent Digestibility and Serum Biochemical and Antioxidant Parameters of Angus Crossbred Steers

WU Baoyun; YI Xin; MA Jinglei; ZHOU Zhenming; WU Hao

doi:10.12418/CJAN2023.158

2023 , Vol. 35 >Issue 3: 1675 - 1683

DOI: https://doi.org/10.12418/CJAN2023.158

RESEARCH PAPER

Effects of Capsaicin on Growth Performance, Nutrient Apparent Digestibility and Serum Biochemical and Antioxidant Parameters of Angus Crossbred Steers

WU Baoyun ,
YI Xin ,
MA Jinglei ,
ZHOU Zhenming ,
WU Hao ^,^*

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State Key Laboratory of Animal Nutrition, College of Animal Science and Technology, China Agricultural University, Beijing 100193, China

*associate professor, E-mail: wu2213@cau.edu.cn

Received date: 2022-08-16

Online published: 2023-03-16

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Abstract

This experiment was conduced to study the effects of capsaicin on growth performance, nutrient apparent digestibility and serum biochemical and antioxidant parameters of Angus crossbred steers, and to explore the potential application of capsaicin of Angus beef cattle in fattening stage. Thirty Angus crossbreed steers with good body condition and similar body weight were selected and randomly divided into control group (CON group) and experimental group (EXP group) with 15 animals per group. The CON group was fed a basal diet, and the EXP group was fed the basal diet supplemented with 1.5 g/d capsaicin per cattle. The pre-experimental period lasted for 14 days, and the experimental period lasted for 90 days. The results showed as follows: 1) there were no significant effect on the body weight, average daily gain, dry matter intake and feed to gain ratio between the two groups (P>0.05). 2) Compared with the CON group, the dry matter apparent digestibility and rumen microbial protein content of the EXP group were significantly increased (P<0.01), and the crude protein apparent digestibility was significantly increased (P<0.05). 3) On day 90, compared with the CON group, the activities of alanine aminotransferase and aspartate aminotransferase in serum of the EXP group were significantly increased (P<0.01), the serum albumin content was significantly increased (P<0.05), and the contents of urea and triglyceride in serum were significantly decreased (P<0.05). In conclusion, dietary supplementation of capsaicin can improve the dry matter and crude protein apparent digestibility of Angus crossbred steers, increase the rumen microbial protein synthesis and serum albumin content, increase the activities of alanine aminotransferase and aspartate aminotransferase in serum, and reduce the contents of urea and triglyceride in serum, but have no significant effects on growth performance and antioxidant capacity.[Chinese Journal of Animal Nutrition, 2023, 35(3):1675-1683]

Key words： capsaicin; growth performance; biochemical parameters; apparent digestibility

Cite this article

WU Baoyun , YI Xin , MA Jinglei , ZHOU Zhenming , WU Hao . Effects of Capsaicin on Growth Performance, Nutrient Apparent Digestibility and Serum Biochemical and Antioxidant Parameters of Angus Crossbred Steers[J]. Chinese Journal of Animal Nutrition, 2023 , 35(3) : 1675 -1683 . DOI: 10.12418/CJAN2023.158

目前,越来越多的新型畜禽饲料添加剂研究以植物提取物为基点展开,且在畜禽生长发育、免疫机能、肠道健康等方面都有很好的作用效果^[1],也得到了世界范围内的广泛认可。在反刍动物研究中,植物提取物能抑制有害菌生长,调控瘤胃微生物发酵,改变瘤胃发酵模式,提高营养物质利用率^[2]。辣椒作为茄科植物,在国内外种植面积广泛,经有机溶剂提取后可得到一系列的辣椒碱类似物,包括辣椒碱(capsaicin,CAP)、二氢辣椒碱(dihydrocapsaicin)和高二氢辣椒碱(high dihydro capsaicin)等^[3],其中辣椒碱又称为辣椒素,是一种辛辣的香草酰氨类生物碱,具有诱食、增加肠道消化酶活性、增强免疫力、缓解热应激等多种生物学功能^[4]。目前,单胃动物上有关辣椒碱的研究在生长性能、抗氧化性能、微生物发酵、血液指标、免疫功能和肉品质等方面均有涉及^[5⇓⇓-8],反刍动物上有关辣椒碱的研究多集中在奶牛^[9⇓-11],鲜有对肥育肉牛方面的研究。因此,本试验旨在通过动物饲养试验,研究辣椒碱对安格斯杂交阉牛生长性能、营养物质表观消化率及血清生化和抗氧化指标的影响,为后续辣椒碱在肉牛生产上的应用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

试验所使用辣椒碱采购自某生物科技有限公司,为白色颗粒状固体,产品主要有效成分为天然辣椒碱(0.5%)。

1.2 试验设计

试验选用体况良好、体重[(510.54±41.27) kg]相近、健康无病的安格斯杂交阉牛30头,按照单因子完全随机化设计,随机分为对照组(CON组)和试验组(EXP组),每组15头牛。CON组饲喂基础饲粮,EXP组在基础饲粮中每头牛补充1.5 g/d的辣椒碱。预试期14 d,正试期90 d。其中,正试期按照2阶段肥育方式,第1阶段(1~59 d)饲粮精粗比为55:45,第2阶段(60~90 d)饲粮精粗比为65:35。根据美国国家科学、工程和医学研究院(NASEM)《肉牛营养需要》(2016)配制饲粮,基础饲粮组成及营养水平见表1。

表1 基础饲粮组成及营养水平(干物质基础)

Table 1 Composition and nutrient levels of basal diets (DM basis)%

项目 Items	含量 Content
项目 Items	第1阶段 First stage	第2阶段 Second stage
原料 Ingredients
玉米 Corn	31.90	37.70
豆粕 Soybean meal	9.35	11.05
枣粉 Jujube powder	8.25	9.75
食盐 NaCl	1.10	1.30
磷酸氢钙 CaHPO₄	1.10	1.30
小苏打 NaHCO₃	1.10	1.30
预混料 Premix¹⁾	2.20	2.60
全株玉米青贮 Whole-plant corn silage	24.75	19.25
玉米秸秆 Corn stalker	20.25	15.75
合计 Total	100.00	100.00
营养水平 Nutrient levels²⁾
粗蛋白质 CP	11.33	11.94
中性洗涤纤维 NDF	41.75	33.84
维持净能 NE_m/(MJ/kg)	6.74	6.91
增重净能 NE_g/(MJ/kg)	4.27	4.50
总可消化养分 TDN	68.75	69.94
项目 Items	含量 Content
项目 Items	第1阶段 First stage	第2阶段 Second stage
钙 Ca	0.50	0.52
磷 P	0.43	0.48

1)每千克预混料含 One kg of the premix contained:VA 150 000~450 000 IU,VD₃ 40 000~120 000 IU,DL-α-生育酚 DL-α-tocopherol 400 mg,Co 250~750 mg,Fe 1 000~5 000 mg,Mn 1 000~3 000 mg,Zn 1 500~3 700 mg,Ca 100 000~250 000 mg,P 3 000 mg,NaCl 150 000~300 000 mg。

2)维持净能、增重净能和总可消化养分为计算值,其余为实测值。NE_m, NE_g and TDN were calculated values, while the others were measured values.

1.3 饲养管理

试验开始前对试验牛进行驱虫、打耳标,每天08:00和16:00各饲喂1次,1组牛为1个圈舍,每个圈舍设有12个采食槽,牛只全天自由采食,自由饮水。

1.4 样品采集

每7 d采集2次饲料和剩料样本,65 ℃烘干至恒重,粉碎过1 mm筛用于测定其干物质(DM)含量。

在正试期第1天和第90天,通过尾根静脉采集血液样本,静置30 min后,4 ℃、4 000 r/min离心10 min,离心结束后取血清分装于0.5 mL的离心管中,-20 ℃冷冻保存,用于测定血清生化和抗氧化指标。

在正试期第90天,通过口腔采集试验牛瘤胃液,用于瘤胃微生物蛋白含量的测定;通过直肠采集试验牛粪便样品,65 ℃烘干至恒重,用于营养物质表观消化率的测定。

1.5 测定指标与方法

1.5.1 生长性能指标

在正试期的第1天、第60天及第90天晨饲前称重并记录体重数据,计算平均日增重(ADG);根据采食量自动记录系统采集每头牛的每日采食量,结合测定的饲粮干物质含量计算干物质采食量(DMI);利用干物质采食量和平均日增重计算料重比(F/G)。计算公式如下:

平均日增重(kg/d)=(初始体重-终末体重)/试验天数;

干物质采食量(kg/d)=每日采食量×饲粮干物质含量;

料重比=干物质采食量/平均日增重。

1.5.2 血清生化指标

血清生化指标采用日立全自动生化仪测定,测定指标包括谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性及总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLB)、尿素(UREA)、总胆红素(T-BIL)、葡萄糖(GLU)、总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)含量。

1.5.3 血清抗氧化指标

血清抗氧化指标采用比色法,使用试剂盒(南京建成生物工程研究所)测定,测定指标包括丙二醛(MDA)含量和总抗氧化能力(T-AOC)。

1.5.4 微生物蛋白含量

参考Makkar等^[12]的考马斯亮蓝法,使用酶标仪(AW-87,北京科动力仪器有限公司)测定瘤胃微生物蛋白含量。

1.5.5 营养物质表观消化率

营养物质表观消化率采用盐酸不溶灰分(AIA)法测定,饲粮和粪便中AIA、干物质、中性洗涤纤维(NDF)和粗蛋白质(CP)含量测定参照张丽英^[13]方法测定。根据饲粮和粪样中AIA含量测定营养物质表观消化率,计算公式如下:

某营养物质表观消化率(%)=100×[1-(RAIA/MAIA×Mn/Rn)]。

式中:RAIA为饲粮中AIA含量;MAIA为粪样中AIA含量;Mn为粪样中某营养物质含量;Rn为饲粮中某营养物质含量。

1.6 数据处理

使用Excel 2010软件对数据进行初步整理,采用SAS 9.4的一般线性模型(GLM)对初步整理的数据进行单因素方差分析(one-way ANOVA)以及Duncan氏法多重比较检验。结果用平均值和均值标准误(SEM)表示,P<0.05表示差异显著,P<0.01表示差异极显著,0.05<P<0.10表示有提高或降低的趋势。

2 结果

2.1 辣椒碱对安格斯肉牛生长性能的影响

由表2可知,辣椒碱对安格斯肉牛的体重、平均日增重、干物质采食量和料重比均无显著影响(P>0.05)。

表2 辣椒碱对安格斯肉牛生长性能的影响

Table 2 Effects of CAP on growth performance of Angus beef cattle

项目 Items	时间 Time	组别 Groups		SEM	P值 P-value
项目 Items	时间 Time	CON	EXP	SEM	P值 P-value
体重 BW/kg	第1天 Day 1	503.37	507.47	8.74	0.82
	第60天 Day 60	578.40	576.73	9.02	0.93
	第90天 Day 90	611.57	610.67	8.77	0.96
平均日增重 ADG/(kg/d)	第1~59天 Days 1 to 59	1.31	1.16	0.05	0.14
	第60~90天 Days 60 to 90	1.52	1.30	0.09	0.23
	第1~90天 Days 1 to 90	1.35	1.21	0.04	0.12
干物质采食量 DMI/(kg/d)	第1~59天 Days 1 to 59	12.31	12.20	0.24	0.82
	第60~90天 Days 60 to 90	11.74	12.04	0.24	0.56
	第1~90天 Days 1 to 90	12.03	12.12	0.22	0.98
料重比 F/G	第1~59天 Days 1 to 59	9.80	10.39	0.38	0.44
	第60~90天 Days 60 to 90	8.57	9.64	0.65	0.42
	第1~90天 Days 1 to 90	8.87	9.89	0.31	0.10

	同行数据肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05),不同大写字母表示差异极显著(P<0.01),无字母表示差异不显著(P>0.05)。下表同。
	In the same row, values with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05), and with different capital letter superscripts mean significant difference (P<0.01), while with no letter superscripts mean no significant difference (P>0.05). The same as below.

2.2 辣椒碱对安格斯肉牛营养物质表观消化率和瘤胃微生物蛋白含量的影响

由表3可知,与CON组相比,EXP组干物质表观消化率和瘤胃微生物蛋白含量极显著升高(P<0.01),粗蛋白质表观消化率显著升高(P<0.05),中性洗涤纤维表观消化率无显著差异(P>0.05)。

表3 辣椒碱对安格斯肉牛营养物质表观消化率和瘤胃微生物蛋白含量的影响

Table 3 Effects of CAP on nutrient apparent digestibility and rumen MCP content of Angus beef cattle

项目 Items	组别 Groups		SEM	P值 P-value
项目 Items	CON	EXP	SEM	P值 P-value
干物质表观消化率 DM apparent digestibility/%	72.32^B	73.20^A	0.07	<0.01
中性洗涤纤维表观消化率 NDF apparent digestibility/%	85.27	85.11	0.40	0.84
粗蛋白质表观消化率 CP apparent digestibility/%	63.64^b	65.75^a	0.51	0.04
瘤胃微生物蛋白含量 Rumen MCP content/(μg/mL)	12.97^B	18.50^A	0.63	<0.01

2.3 辣椒碱对安格斯肉牛血清生化和抗氧化指标的影响

由表4可知,正试期第1天,2组之间各血清生化和抗氧化指标无显著差异(P>0.05)。正试期第90天,与CON组相比,EXP组血清谷丙转氨酶活性和谷草转氨酶活性极显著升高(P<0.01),血清白蛋白含量显著升高(P<0.05),血清尿素和甘油三酯含量显著降低(P<0.05),血清总蛋白含量有增加的趋势(P=0.07),其他血清生化和抗氧化指标无显著差异(P>0.05)。

表4 辣椒碱对安格斯肉牛血清生化和抗氧化指标的影响

Table 4 Effects of CAP on serum biochemical and antioxidant parameters of Angus beef cattle

项目 Items	组别 Groups		SEM	P值 P-value
项目 Items	CON	EXP	SEM	P值 P-value
第1天 Day 1
谷丙转氨酶 ALT/(U/L)	29.94	30.83	0.87	0.16
谷草转氨酶 AST/(U/L)	90.26	91.95	1.90	0.67
总蛋白 TP/(g/L)	74.38	74.57	0.77	0.90
白蛋白 ALB/(g/L)	42.59	42.35	0.52	0.82
球蛋白 GLB/(g/L)	31.79	32.22	1.00	0.83
尿素 UREA/(mmol/L)	5.49	5.25	0.17	0.47
总胆红素 T-BIL/(μmol/L)	4.97	5.03	0.14	0.83
葡萄糖 GLU/(mmol/L)	5.16	5.20	0.06	0.73
总胆固醇 TC/(mmol/L)	3.43	3.38	0.07	0.16
甘油三酯 TG/(mmol/L)	0.19	0.20	0.01	0.83
总抗氧化能力 T-AOC/(U/mL)	0.28	0.28	0.01	0.64
丙二醛 MDA/(nmol/mL)	2.88	3.57	0.21	0.11
第90天 Day 90
谷丙转氨酶 ALT/(U/L)	34.34^B	40.92^A	0.68	<0.01
谷草转氨酶 AST/(U/L)	76.55^B	84.06^A	1.30	<0.01
总蛋白 TP/(g/L)	69.95	72.91	0.66	0.07
白蛋白 ALB/(g/L)	37.34^b	38.64^a	0.36	0.03
球蛋白 GLB/(g/L)	32.61	34.26	0.64	0.98
尿素 UREA/(mmol/L)	3.53^a	3.28^b	0.05	0.02
总胆红素 T-BIL/(μmol/L)	1.83	1.89	0.04	0.23
葡萄糖 GLU/(mmol/L)	4.95	5.07	0.04	0.79
项目 Items	组别 Groups		SEM	P值 P-value
项目 Items	CON	EXP	SEM	P值 P-value
总胆固醇 TC/(mmol/L)	2.96	2.98	0.07	0.83
甘油三酯 TG/(mmol/L)	0.25^a	0.22^b	0.01	0.02
总抗氧化能力 T-AOC/(U/mL)	0.232	0.235	0.01	0.10
丙二醛 MDA/(nmol/mL)	3.92	4.21	0.18	0.43

3 讨论

3.1 辣椒碱对安格斯肉牛营养物质表观消化率、瘤胃微生物蛋白含量和生长性能的影响

营养物质表观消化率可以用来评定饲粮营养物质在畜禽体内的消化情况,各营养物质表观消化率的高低都与畜禽生长性能表现密切相关。Cardozo等^[14]研究表明,辣椒辣素会通过刺激瘤胃中肽酶活性产生小肽和游离氨基酸,促进瘤胃微生物合成微生物蛋白,与本试验研究结果一致,说明辣椒碱可能通过在瘤胃中合成更多微生物蛋白,提高饲粮中氮的利用,提高粗蛋白质表观消化率。也有研究表明,饲粮中添加过瘤胃辣椒油树脂的泌乳奶牛,其干物质、有机物和粗蛋白质表观消化率线性增加^[15],可能与辣椒素具有提高小肠胰蛋白酶和糜蛋白酶活性^[16]以及提高空肠黏膜中淀粉酶和蛋白酶活性的作用有关^[7],最终提高干物质和粗蛋白质表观消化率。给生长母羊补充肉桂醛、丁香酚和辣椒油树脂可以显著升高中性洗涤纤维表观消化率^[17],与本试验结果不一致,其原因可能是复合植物提取物中肉桂醛和丁香酚均有提高纤维消化率的作用^[18-19]。De Souza等^[20]报道,饲粮中添加丁香酚、肉桂醛和辣椒提取物对安格斯杂交阉牛的终末体重、平均日增重、干物质采食量和饲料转化效率均没有显著影响,与本试验结果一致,也与在羔羊饲粮中添加辣椒提取物的结果^[21]相同。Hernández等^[22]研究发现,在比利时蓝牛的生长阶段,添加肉桂醛、香芹酚和辣椒素对终末体重、平均日增重、干物质采食量和料重比均无显著影响;在育肥阶段,添加肉桂醛、香芹酚和辣椒素则会通过降低采食量来降低料重比,说明辣椒碱作用于牛只不同生长阶段所表现的生长性能可能不一样。而胡宇超^[23]在饲粮中添加发酵麸皮多糖、肉桂醛、丁香酚和辣椒油树脂复合营养素发现,杜寒杂交母羊的干物质采食量、终末体重和平均日增重均有所增加,这可能与不同的试验动物、添加剂量和添加剂类别等有关。

有报道称,辣椒素能够增加高脂肪饮食小鼠的血浆瘦素含量,降低3T3-L1前脂肪细胞中甘油三酯含量^[24],减少包括过氧化酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)和脂肪酸结合蛋白4(FABP4)等在内的脂肪形成标志物的生成量以及脂肪酸合酶(FASN)和硬脂酰辅酶去饱和酶(SCD)等脂肪生成相关基因的表达^[25],影响脂肪合成,此外,辣椒素治疗后还能够通过引发牛骨髓间充质干细胞凋亡来抑制脂肪沉积^[26],说明辣椒碱有抑制脂肪沉积的效果。有报道称脂肪沉积所需能值要高于蛋白质沉积^[27],即同等能值下,肌肉的沉积量比脂肪的沉积量多,抑制脂肪沉积就有更多的能量作用于蛋白质沉积,促进肌纤维发育,肌细胞可以产生ATP,在畜禽生长过程中利用肌细胞产能来维持运动,干物质和粗蛋白质表观消化率有显著提高也说明更多的蛋白质被消化吸收再充分利用,与本试验中肉牛体重变化不明显的结果相对应。有研究表明,给育肥牛补充过瘤胃保护辣椒素对干物质采食量、平均日增重、饲料转化效率、屠宰率、背膘厚以及肋眼面积均没有显著影响,但有改善胴体产量等级和大理石花纹评分及质量等级的趋势^[28],还可以降低公鼠皮下脂肪的比重,增加肌肉重量^[29],降低文昌鸡腿肌脂肪含量^[8],提高肉鸭肌肉红度值^[30],说明辣椒碱可能在一定程度上会改善畜禽的屠宰性能和肉品质,本试验结论后续还需通过屠宰试验做进一步印证。

3.2 辣椒碱对安格斯肉牛血清生化和抗氧化指标的影响

谷丙转氨酶和谷草转氨酶是评定畜禽体内有机物、蛋白质和脂肪转化的重要指标,也与机体心脏和肝脏功能密切相关。本试验中,饲粮中添加辣椒碱提高了血清谷丙转氨酶和谷草转氨酶活性,这2种酶都由肝细胞分泌,其活性的升高可能与肉牛代谢器官肝脏活性的增强有关^[31],而肝脏活性的增强可能与干物质和粗蛋白质表观消化率的提高有关。血清总蛋白、白蛋白、球蛋白和尿素等指标能反映蛋白质降解吸收情况,本试验中,饲粮中添加辣椒碱可以增加血清总蛋白和白蛋白含量,说明机体内有更多的蛋白质被降解吸收进入血液;此外,EXP组尿素含量显著减少,体内尿素的循环利用增强,瘤胃微生物使尿素快速转化为氨来改善蛋白质周转代谢^[30],与本试验中瘤胃微生物蛋白合成量的增加有关。Ünlü等^[21]在羔羊饲粮中添加300 mg/kg辣椒提取物,血清谷丙转氨酶活性、尿素、肌酸、总蛋白、白蛋白含量无显著变化。Kholif等^[32]研究也表明,辣椒和百里香精油混合物对母羊血清谷草转氨酶活性和球蛋白含量没有显著影响。总胆固醇和甘油三酯是反映机体脂类代谢状况的指标,本试验中,与CON组相比,EXP组血清甘油三酯含量显著降低,总胆固醇含量无显著差异。在动物的体内研究中,辣椒提取物可以提高胰脂肪酶活性、空肠黏膜脂肪酶活性以及回肠黏膜脂肪酶活性^[7,33],本试验结果中血清甘油三酯含量的显著降低可能是由于脂肪酶活性增强,甘油三酯被更快的分解为游离脂肪酸和甘油,用于机体的能量供应。在高油脂饮食中,辣椒碱可以显著降低母鼠血清甘油三酯含量^[29],显著降低大鼠肝脏重量及总脂质含量,总脂质中甘油三酯含量明显降低,而磷脂和胆固醇含量没有变化^[34],这与本试验研究结果一致,说明辣椒碱可能会作用于甘油三酯的分解过程,影响机体脂肪沉积。葡萄糖是畜禽机体代谢的能源物质,也是营养水平的评估指标^[8]。本试验中,CON组和EXP组血清葡萄糖含量无显著差异。Chen等^[35]在添加剂中补充大约3%的辣椒油树脂对生长羔羊血清葡萄糖含量没有显著影响,与本试验结果一致。同时,本试验中CON组和EXP组的中性洗涤纤维表观消化率没有显著差异,说明辣椒碱对升糖性的代谢过程没有显著影响,致使肉牛的血糖变化不明显。

总胆红素是血液中血红素的代谢产物,也是一种天然抗氧化剂;总抗氧化能力和丙二醛含量也是评定畜禽抗氧化能力高低的重要指标。本试验中,与CON组相比,EXP组血清总抗氧化能力在数值上有所提高,血清总胆红素和丙二醛含量无显著差异。有研究报道,在生长母羊饲粮中添加肉桂醛、丁香酚和辣椒油树脂可提高血清胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)、免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白G(IgG)和白细胞介素-10(IL-10)含量,提高血清总抗氧化能力和过氧化氢酶活性^[17],与本试验结果一致。一方面,辣椒素本身结构中的酚羟基能够清除过氧自由基,增加各种内源抗氧化酶的生成量,诱导抗氧化物基因和转录因子的表达^[1];另一方面,辣椒碱能够提高细胞内核转录因子E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)和醌氧化还原酶1(quinine oxidoreductase 1,NQO-1)mRNA等下游抗氧化基因的表达量^[30],这种抗氧化效应在一定范围内与辣椒碱的添加量呈正相关^[36],说明辣椒碱有改善肉牛抗氧化能力的潜力。

4 结论

饲粮中添加辣椒碱可以显著提高安格斯杂交阉牛干物质和蛋白质表观消化率,增加瘤胃微生物蛋白合成和血清白蛋白含量,提高血清谷丙转氨酶和谷草转氨酶活性,减少血清尿素和甘油三酯含量,对生长性能和抗氧化能力无显著作用。

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