Effects of Protease and Probiotic Combination Supplementation on Growth Performance, Intestinal Health and Cecal Microbiota of Broilers

RAO Zhiyong; LI Yue; YANG Xiaopeng; GUO Yongpeng; WANG Zhixiang; ZHANG Wei

doi:10.12418/CJAN2023.340

2023 , Vol. 35 >Issue 6: 3659 - 3672

DOI: https://doi.org/10.12418/CJAN2023.340

RESEARCH PAPER

Effects of Protease and Probiotic Combination Supplementation on Growth Performance, Intestinal Health and Cecal Microbiota of Broilers

RAO Zhiyong ,
LI Yue ,
YANG Xiaopeng ,
GUO Yongpeng ,
WANG Zhixiang ^,^* ,
ZHANG Wei ^,^*

Expand

College of Animal Science and Technology, Henan Agricultural University, Zhengzhou 450002, China

*WANG Zhixiang, professor, E-mail: wzxhau@aliyun.com;

ZHANG Wei, lecturer, E-mail: weizhang@henau.edu.cn

Received date: 2022-11-23

Online published: 2023-06-08

Fold

Abstract

This experiment was conducted to evaluate the effects of protease and probiotic combination supplementation on growth performance, intestinal health and cecal microbiota of broilers. Six hundred and forty-eight 1-day-old Arbor Acres (AA) broilers were randomly divided into 6 groups with 6 replicates in each group and 18 broilers in each replicate. The control group (CON group) was fed a basal diet, the antibiotic group (AN group) was fed the basal diet supplemented with 500 mg/kg oxytetracycline calcium, and the experimental groups were fed basal diets supplemented with 100 mg/kg protease (PRO group), 100 mg/kg protease +100 mg/kg Clostridium butyricum (PRO+CB group), 100 mg/kg protease+100 mg/kg Enterococcus faecalis (PRO+EF group) and 100 mg/kg protease+150 mg/kg Bacillus coagulans (PRO+BC group). The experimental period was 42 days. The result showed as follows:1) compared with CON group, the body weight at 42 days of age and average daily gain (ADG) during 22 to 42 days of age and 1 to 42 days of age of PRO+EF and PRO+BC groups were significantly increased (P<0.05); the ratio of feed to gain (F/G) during 22 to 42 days of age of experimental groups was significantly decreased (P<0.05), and the F/G during 1 to 42 days of age of AN and PRO+EF groups was significantly decreased (P<0.05). Compared with AN group, the average daily feed intake (ADFI) during 22 to 42 days of age of PRO+EF and PRO+BC groups was significantly decreased (P<0.05), and the ADFI during 1 to 42 days of age of PRO, PRO+EF and PRO+BC groups was significantly decreased (P<0.05). 2) Compared with CON group, the villus height in duodenum of experimental groups, jejunum of AN group and ileum of PRO+BC group was significantly increased (P<0.05), the crypt depth in duodenum of PRO+EF group and ileum of experimental groups was significantly decreased (P<0.05), and the villus height to crypt depth ratio (V/C) in duodenum of PRO+EF group and ileum of PRO+EF and PRO+BC groups was significantly increased (P<0.05). Compared with AN group, the crypt depth in duodenum of PRO+EF group was significantly decreased (P<0.05), and the V/C was significantly increased (P<0.05). 3) Compared with CON group, the pH in jejunum of PRO+EF group was significantly decreased (P<0.05). 4) Compared with CON group, the relative mRNA expression levels of Claudin-1 in jejunum and ileum and zona occludens protein-1 (ZO-1) in jejunum of PRO and PRO+BC groups were significantly increased (P<0.05), the relative mRNA expression levels of Claudin-1 and Occludin in jejunum of PRO+CB group and relative mRNA expression level of Claudin-1 and Occludin in ileum of PRO+EF group were significantly increased (P<0.05). 5) Compared with CON group, the Chao1 and Faith_pd indexes of PRO+EF group were significantly increased (P<0.05), and the Shannon and Simpson indexes of PRO+CB group were significantly decreased (P<0.05). Compared with CON group, the cecal Firmicutes relative abundance of PRO+CB group was significantly increased (P<0.05), the cecal Phascolarctobacterium relative abundance of PRO+CB group was significantly increased (P<0.05), and the cecal Faecalibacterium relative abundance of PRO+BC group was significantly increased (P<0.05). In conclusion, the protease and probiotics combination supplementation can improve the growth performance of broilers, improve the intestinal morphology, maintain the intestinal flora balance, and promote the intestinal health. Under this experimental condition, the combination supplementation of 100 mg/kg protease+100 mg/kg Enterococcus faecalis in basal diet has the best effect.

Key words： protease; probiotics; growth performance; intestinal morphology; microbiota

Cite this article

RAO Zhiyong , LI Yue , YANG Xiaopeng , GUO Yongpeng , WANG Zhixiang , ZHANG Wei . Effects of Protease and Probiotic Combination Supplementation on Growth Performance, Intestinal Health and Cecal Microbiota of Broilers[J]. Chinese Journal of Animal Nutrition, 2023 , 35(6) : 3659 -3672 . DOI: 10.12418/CJAN2023.340

畜牧业中抗生素滥用引发一系列畜产品安全及环境污染等问题^[1],根据我国农业农村部第194号公告规定,自2020年7月1日起,饲料生产企业停止生产含有促生长类药物饲料添加剂的商品饲料^[2],因此,寻找新的抗生素替代品成为当下比较热门的研究方向。蛋白酶制剂作为一种绿色、安全、无污染的饲用添加剂在养殖业广泛应用^[3],其能够提高蛋白质消化率,减少氮污染,改善肠道健康,提高畜禽的生长性能^[4]。丁酸梭菌又名铬酸菌,其能够提高肉鸡生长性能^[5],抑制肠道炎症和维持肠道菌群的动态平衡^[6]。粪肠球菌是一种兼性厌氧菌,属于乳酸菌一类,具有调节肠道菌群、增强机体免疫功能、提高生长性能的功能,在畜牧生产中具有广阔的应用前景^[7]。凝结芽孢杆菌属于芽孢杆菌属,是一类乳酸菌类益生菌^[8],具备乳酸菌抑菌和芽孢杆菌高抗逆性、抑菌等优点^[9],在生产中能够发挥促进动物机体对营养物质的消化吸收、调节肠道微生态平衡、增强机体免疫力的作用^[10]。酶菌组合使用具有较好的应用前景,目前蛋白酶和微生态制剂配合使用的研究还鲜有报道。因此,本试验选用蛋白酶与不同微生态制剂组合,研究其对肉鸡生长性能、肠道健康和盲肠微生物区系的影响,并探讨其作用机制,以期为肉鸡生产中选取具有良好替抗效果的菌酶组合提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验动物及材料

试验动物选取1日龄爱拔益加(AA)肉鸡。试验所用的蛋白酶和益生菌均为河南某生物科技有限公司提供,包括蛋白酶(碱性蛋白酶,活性50 000 U/g)、丁酸梭菌(活菌数1×10¹⁰ CFU/g)、粪肠球菌(活菌数1×10¹¹ CFU/g)和凝结芽孢杆菌(活菌数1×10¹¹ CFU/g),抗生素为土霉素钙(含50 mg/kg土霉素)。

1.2 试验设计

试验选用健康的1日龄AA肉鸡648只,随机分为6组,每组6个重复,每个重复18只(公母各占1/2),试验设计见表1。试验期42 d。

表1 试验设计

Table 1 Experimental design

组别 Groups	饲粮 Diets
CON	基础饲粮
AN	基础饲粮+500 mg/kg土霉素钙
PRO	基础饲粮+100 mg/kg蛋白酶
PRO+CB	基础饲粮+100 mg/kg蛋白酶+100 mg/kg丁酸梭菌
PRO+EF	基础饲粮+100 mg/kg蛋白酶+100 mg/kg粪肠球菌
PRO+BC	基础饲粮+100 mg/kg蛋白酶+150 mg/kg凝结芽孢杆菌

1.3 基础饲粮与饲养管理

试验所用的基础饲粮为玉米-豆粕型,参照NRC(1994)肉鸡营养需要标准配制,基础饲粮组成及营养水平见表2。饲养试验在河南农业大学动物营养调控实验室进行,试验前对鸡舍进行消毒空置处理,饲养方式为3层立体笼养,鸡群自由采食和饮水,采光为自然光照和人工补光结合,人工干预舍内温度、湿度和通风,保持适宜水平。按鸡场的制度做好防疫措施,保持鸡舍干净整洁。每天观察舍内状况,及时发现问题,记录鸡群每天的耗料量、死淘等情况。

表2 基础饲粮组成及营养水平(风干基础)

Table 2 Composition and nutrient levels of basal diets (air-dry basis)%

项目 Items	1~21日龄 1 to 21 days of age	22~42日龄 22 to 42 days of age
原料 Ingredients
玉米 Corn	57.03	62.50
豆粕 Soybean meal	32.67	23.78
玉米蛋白粉 Corn gluten meal	3.00	5.00
磷酸氢钙 CaHPO₄	1.50	1.00
石粉 Limestone	1.10	1.00
氯化钠 NaCl	0.30	0.30
大豆油 Soybean oil	3.00	5.30
L-赖氨酸盐酸盐 L-Lys·HCl	0.46	0.31
DL-蛋氨酸 DL-Met	0.21	0.16
苏氨酸 Threonine	0.13	0.05
预混料 Premix¹⁾	0.60	0.60
合计 Total	100.00	100.00
营养水平 Nutrient levels²⁾
代谢能 ME/(MJ/kg)	12.55	13.40
粗蛋白质 CP	23.42	19.78
赖氨酸 Lys	1.44	1.15
蛋氨酸 Met	0.56	0.47
苏氨酸 Thr	0.97	0.78
钙 Ca	0.76	0.67
总磷 TP	0.63	0.50
有效磷 AP	0.45	0.31

1)预混料为每千克饲粮提供 Premix provided the following per kg of diets:1~21日龄 1 to 21 days of age,VA 12 000 IU,VD₃ 3 500 IU,VE 60 IU,VK₃ 4 mg,VB₁ 2.5 mg,VB₆ 6 mg,VB₁₂ 8 μg,生物素 biotin 0.8 mg,叶酸 folic acid 10 mg,D-泛酸 D-pantothenic acid 40 mg,烟酸 nicotinic acid 75 mg,胆碱 choline 700 mg,Zn 90 mg,Fe 110 mg,Cu 20 mg,Mn 100 mg,I 0.5 mg,Se 0.3 mg;22~42日龄 22 to 42 days of age,VA 10 000 IU,VD₃ 3 000 IU,VE 50 IU,VK₃ 3.5 mg,VB₁ 2 mg,VB₆ 5 mg,VB₁₂ 6 μg,生物素 biotin 0.6 mg,叶酸 folic acid 8 mg,D-泛酸 D-pantothenic acid 20 mg,烟酸 nicotinic acid 60 mg,胆碱 choline 600 mg,Zn 80 mg,Fe 100 mg,Cu 15 mg,Mn 80 mg,I 0.5 mg,植酸酶 phytase 0.1 g,Se 0.3 mg。

2)代谢能为计算值,其余均为实测值。ME was a calculated value, while the others were measured values.

1.4 指标测定及方法

1.4.1 生长性能

在试验第1、22、43天上午同一时间,以重复为单位对肉鸡进行称重,记录采食量,计算试验各个时期鸡只的体重、平均日采食量(ADFI)、平均日增重(ADG)和料重比(F/G)。

1.4.2 肠道pH

在试验第43天,每个重复选取1只体重接近平均体重的健康肉鸡,屠宰后,打开腹腔,取出并分离肠段,肠道剪V字形口,用Testo 206 pH仪依次测定十二指肠、空肠、回肠和盲肠的pH。每个肠段测2个位置,取平均值。

1.4.3 肠道组织形态

在试验第43天,每个重复选取1只体重接近平均体重的健康肉鸡,屠宰后,取出肠道,分别剪取十二指肠、空肠、回肠中段约5 cm肠段,用生理盐水冲洗内容物及残留血液,冲洗后放入4%甲醛溶液中固定24 h以上。在经脱水、透蜡、包埋、切片处理后,用苏木精-伊红(HE)进行染色和封固,在倒置荧光显微镜(CKX53,OLYMPUS公司,日本)下测定绒毛高度和隐窝深度,计算绒毛高度和隐窝深度的比值(绒隐比,V/C)。

1.4.4 肠道紧密连接蛋白mRNA相对表达量的测定

在试验第43天,每个重复选取1只体重接近平均体重的健康肉鸡,屠宰后,取十二指肠、空肠和回肠组织,将所取肠道组织样品放于-80 ℃冰箱待测。用Trizol法将肠道组织中的总RNA提取出来,按HiScript^® Ⅲ RT SuperMix for qPCR(+gDNA wiper)试剂盒的要求进行反转录,制备cDNA,采用ChamQ Universal SYBR qPCR Master Mix试剂盒进行实时荧光定量PCR,引物由生工生物工程(上海)股份有限公司设计合成,选用三磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)作为内参基因,根据2^-ΔΔCt法对定量结果进行计算分析。引物序列见表3。

表3 引物序列

Table 3 Primer sequences

基因 Genes	登录号 Accession number	引物序列 Primer sequence (5'—3')	产物大小 Product size/bp
密闭蛋白 Occludin	NM_205128.1	F:GATGGACAGCATCAACGACC R:CTTGCTTTGGTAGTCTGGGC	142
封闭蛋白-1 Claudin-1	NM_001013611.2	F:ACACCCGTTAACACCAGATTT R:GCATTTTTGGGGTAGCCTCG	152
闭合小环蛋白-1 ZO-1	XM_040680630.1	F:GCCTACTGCTGCTCCTTACAACTC R:GCTGGATCTATATGCGGCGGTAAG	129
三磷酸甘油醛脱氢酶 GAPDH	NM_204305.2	F:AGCCATTCCTCCACCTTTGAT R:AGTCCACAACACGGTTGCTGTAT	112

1.4.5 盲肠微生物区系

将上述在-80 ℃冰箱保存的盲肠内容物样品送至上海派森诺生物科技有限公司进行微生物区系分析,用DNA试剂盒从盲肠样品中提取细菌基因组总DNA,鉴定浓度和纯度后,用特异性引物(F:5’-ACTCCTACGGGAGGCAGCA-3’;R:5’-TCGGACTACHVGGGTWTCTAAT-3’)对细菌的16S rRNA的V3~V4高变区进行PCR扩增。采用Illumina MiSeq平台和NovaSeq 6000 SP试剂盒对DNA片段进行双端高通量测序,对测序结果用平台QIIME2 2019.4版本进行分析。首先,使用QIIME2软件分别对每个样本计算多样性指数,比较不同样品之间扩增子序列变异(ASV)的丰富度和均匀度;随后,根据DADA2插件降噪去类得到的ASV划分和分类地位鉴定结果,获得每个样本在各分类水平的具体物种组成情况。

1.5 数据统计

试验数据整理后采用SPSS 26.0软件进行单因素方差分析(one-way ANOVA),并采用Duncan氏法进行多重比较,以P<0.05为差异显著标准,结果以“平均值±标准差”表示。所得的目的基因mRNA相对表达量数据用GraphPad prism 8软件进行处理,结果以柱状图表示。

2 结果

2.1 蛋白酶和益生菌组合添加对肉鸡生长性能的影响

由表4可知,与CON组相比,PRO+EF组和PRO+BC组的42日龄体重和22~42日龄、1~42日龄ADG显著提高(P<0.05);AN组和PRO+CB组的22~42日龄ADFI显著降低(P<0.05),AN组的1~42日龄ADFI显著降低(P<0.05);AN组、PRO组、PRO+CB组、PRO+EF组和PRO+BC组的22~42日龄F/G显著降低(P<0.05),AN组和PRO+EF组的1~42日龄F/G显著降低(P<0.05)。与AN组相比,PRO+EF组和PRO+BC组的22~42日龄ADFI显著提高(P<0.05),PRO组、PRO+EF组和PRO+BC组的1~42日龄ADFI显著提高(P<0.05)。

表4 蛋白酶和益生菌组合添加对肉鸡生长性能的影响

Table 4 Effects of protease and probiotics combination supplementation on growth performance of broilers

项目 Items	组别 Groups						P值 P-value
项目 Items	CON	AN	PRO	PRO+CB	PRO+EF	PRO+BC	P值 P-value
1~42日龄1 to 42 days of age
1日龄体重 BW at 1 day of age/g	46.18±0.57	46.27±1.13	46.59±0.60	46.41±0.68	46.63±0.43	46.21±0.36	0.779
21日龄体重 BW at 21 days of age/g	841.67±23.17	866.27±19.58	846.67±29.44	827.50±32.21	856.67±29.44	860.00±24.49	0.172
42日龄体重 BW at 42 days of age/g	2 488.77±51.93^b	2 578.15±55.66^ab	2 514.44±111.99^b	2 515.18±89.19^b	2 648.68±72.65^a	2 630.14±58.35^a	0.003
1~21日龄 1 to 21 days of age
平均日采食量ADFI/g	48.10±1.95	50.19±4.68	52.84±4.76	53.93±2.87	51.55±6.10	52.01±2.34	0.207
平均日增重ADG/g	37.88±1.11	39.05±0.89	38.10±1.41	37.19±1.53	38.57±1.40	38.75±1.16	0.169
料重比 F/G	1.27±0.08	1.29±0.14	1.39±0.11	1.45±0.12	1.34±0.19	1.35±0.10	0.187
22~42日龄 22 to 42 days of age
平均日采食量ADFI/g	154.68±2.32^a	143.54±6.69^c	149.07±12.22^abc	146.03±5.53^bc	153.61±6.18^ab	155.77±1.50^a	0.016
平均日增重ADG/g	78.43±2.07^b	81.52±2.91^ab	79.42±5.26^b	80.37±3.13^b	85.34±2.45^a	84.29±1.91^a	0.003
料重比 F/G	1.97±0.05^a	1.76±0.08^c	1.88±0.06^b	1.82±0.07^bc	1.80±0.08^bc	1.85±0.03^b	<0.001
1~42日龄 1 to 42 days of age
平均日采食量ADFI/g	101.39±1.62^ab	96.86±2.77^c	100.95±5.04^ab	99.98±2.44^bc	102.58±2.14^ab	103.89±1.47^a	0.004
平均日增重ADG/g	58.16±1.25^b	60.28±1.32^ab	58.76±2.66^b	58.78±2.13^b	61.95±1.73^a	61.52±1.39^a	0.003
料重比 F/G	1.75±0.04^a	1.61±0.03^c	1.72±0.04^a	1.70±0.07^ab	1.66±0.06^bc	1.69±0.05^ab	0.001

	同行数据肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05),相同或无字母表示差异不显著(P>0.05)。下表同。
	In the same row, values with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05), while with the same or no letter superscripts mean no significant difference (P>0.05). The same as below.

2.2 蛋白酶和益生菌组合添加对肉鸡肠道pH的影响

由表5可知,与CON组相比,PRO+EF组的空肠pH显著降低(P<0.05)。与AN组相比,PRO组、PRO+CB组和PRO+BC组的空肠pH显著提高(P<0.05)。

表5 蛋白酶和益生菌组合添加对肉鸡肠道pH的影响

Table 5 Effects of protease and probiotics combination supplementation on intestinal pH of broilers

项目 Items	组别 Groups						P值 P-value
项目 Items	CON	AN	PRO	PRO+CB	PRO+EF	PRO+BC	P值 P-value
十二指肠Duodenum	6.13±0.34	6.09±0.23	6.16±0.43	6.23±0.17	6.24±0.17	6.22±0.28	0.928
空肠 Jejunum	6.37±0.21^a	5.99±0.25^b	6.27±0.11^a	6.38±0.28^a	5.95±0.22^b	6.41±0.11^a	0.001
回肠 Ileum	6.28±0.11	6.42±0.23	6.44±0.24	6.52±0.23	6.59±0.18	6.49±0.22	0.200
盲肠 Cecum	6.72±0.26	6.89±0.29	6.48±0.18	6.65±0.40	6.54±0.61	6.95±0.31	0.210

2.3 蛋白酶和益生菌组合添加对肠道组织形态的影响

由表6可知,与CON组相比,AN组、PRO组、PRO+CB组、PRO+EF组和PRO+BC组的十二指肠及AN组的空肠绒毛高度显著提高(P<0.05),PRO+BC组的回肠绒毛高度显著提高(P<0.05);PRO+EF组的十二指肠及PRO组、PRO+CB组、PRO+EF组和PRO+BC组的回肠隐窝深度显著降低(P<0.05);PRO+EF组的十二指肠V/C及PRO+EF组和PRO+BC组的回肠V/C显著提高(P<0.05)。与AN组相比,PRO+EF组的十二指肠隐窝深度显著降低(P<0.05),V/C显著提高(P<0.05)。

表6 蛋白酶和益生菌组合添加对肉鸡肠道组织形态的影响

Table 6 Effects of protease and probiotics combination supplementation on intestinal morphology of broilers

项目 Items	组别 Groups						P值 P-value
项目 Items	CON	AN	PRO	PRO+CB	PRO+EF	PRO+BC	P值 P-value
十二指肠 Duodenum
绒毛高度 Villus height/μm	1 650.01±86.89^d	2 452.98±226.60^a	1 871.41±163.57^c	1 849.12±38.71^c	2 071.46±44.99^b	1 883.82±89.15^c	<0.001
隐窝深度 Crypt depth/μm	343.24±72.65^a	391.98±42.39^a	344.20±73.40^a	322.73±73.13^a	235.36±16.05^b	321.63±46.04^a	0.003
绒隐比V/C	5.01±1.22^b	6.34±1.11^b	5.71±1.57^b	6.07±1.85^b	8.84±0.63^a	5.96±0.89^b	<0.001
空肠 Jejunum
绒毛高度 Villus height/μm	1 431.02±153.37^b	1 634.68±27.90^a	1 221.07±57.87^c	1 508.52±37.34^b	1 427.23±132.55^b	1 503.99±57.90^b	<0.001
隐窝深度 Crypt depth/μm	215.71±18.53	223.31±35.78	249.48±10.38	243.58±38.04	211.03±43.08	229.66±36.06	0.281
绒隐比V/C	6.70±1.09^a	7.48±1.18^a	4.91±0.40^b	6.33±1.06^a	6.93±1.04^a	6.68±0.98^a	0.003
回肠 Ileum
绒毛高度 Villus height/μm	1 466.12±142.00^b	1 527.86±106.60^ab	1 267.16±134.52^c	1 218.33±55.33^c	1 514.31±73.34^ab	1 614.72±66.23^a	<0.001
隐窝深度 Crypt depth/μm	255.76±25.46^a	233.53±15.54^ab	188.34±34.04^b	184.75±17.65^b	201.16±14.30^b	213.13±25.02^bc	<0.001
绒隐比V/C	5.76±0.57^b	6.59±0.87^ab	6.94±1.58^ab	6.65±0.74^ab	7.55±0.38^a	7.69±1.12^a	0.018

2.4 蛋白酶和益生菌组合添加对肉鸡肠道紧密连接蛋白mRNA相对表达量的影响

由图1可知,与CON组相比,AN组、PRO组、PRO+CB组、PRO+EF组和PRO+BC组的十二指肠密闭蛋白(Occludin)的mRNA相对表达量显著降低(P<0.05),AN组和PRO组的十二指肠封闭蛋白-1(Claudin-1)的mRNA相对表达量显著提高(P<0.05)。与AN组相比,PRO组的十二指肠Claudin-1的mRNA相对表达量显著提高(P<0.05),PRO+CB组和PRO+EF组的十二指肠Claudin-1的mRNA相对表达量显著降低(P<0.05)。

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图1 蛋白酶和益生菌组合添加对肉鸡肠道紧密连接蛋白mRNA相对表达量的影响

Fig.1 Effects of protease and probiotics combination supplementation on mRNA relative expression levels ofintestinal tight junction protein of broilers

与CON组相比,AN组、PRO组和PRO+BC组的空肠闭合小环蛋白-1(ZO-1)的mRNA相对表达量显著提高(P<0.05);AN组和PRO+CB组的空肠Occludin的mRNA相对表达量显著提高(P<0.05);AN组、PRO组、PRO+CB组和PRO+BC组的空肠Claudin-1的mRNA相对表达量显著提高(P<0.05)。

与CON组相比,PRO组的回肠ZO-1的mRNA相对表达量显著提高(P<0.05),PRO+EF组的回肠Occludin的mRNA相对表达量显著提高(P<0.05);PRO组、PRO+EF组和PRO+BC组的回肠Claudin-1的mRNA相对表达量显著提高(P<0.05)。与AN组相比,PRO组、PRO+EF组和PRO+BC组的回肠ZO-1的mRNA相对表达量显著提高(P<0.05),PRO+EF组的回肠Occludin的mRNA相对表达量显著提高(P<0.05),PRO组和PRO+BC组的回肠Claudin-1的mRNA相对表达量显著提高(P<0.05)。

2.5 蛋白酶和益生菌组合添加对肉鸡盲肠微生物区系的影响

2.5.1 蛋白酶和益生菌组合添加对肉鸡盲肠微生物alpha多样性的影响

由表7可知,与CON组和AN组相比,PRO+EF组和PRO+BC组的Chao1指数显著提高(P<0.05)。与CON组相比,PRO+EF组的Faith_pd指数显著提高(P<0.05);与AN组相比,PRO组、PRO+EF组和PRO+BC组的Faith_pd指数无显著差异(P>0.05)。与CON组和AN组相比,PRO+CB组的Shannon和Simpson指数显著降低(P<0.05)。

表7 蛋白酶和益生菌组合添加对肉鸡盲肠微生物alpha多样性的影响

Table 7 Effects of protease and probiotics combination supplementation on cecal microorganism alpha diversity of broilers

项目 Items	组别Groups												P值 P-value
项目 Items	CON		AN		PRO		PRO+CB		PRO+EF		PRO+BC		P值 P-value
Chao1指数 Chao1 index		2 222.88 ±91.08^c		2 124.36 ±143.63^c		2 265.86 ±101.14^c		1 782.13 ±63.61^d		2 845.43 ±136.48^a		2 618.68 ±127.97^b		<0.001
Faith_pd指数 Faith_pd index		122.15 ±4.63^b		125.81 ±8.58^ab		124.30 ±2.73^ab		109.09 ±8.40^c		135.33 ±7.38^a		130.43 ±8.40^ab		0.001
Shannon指数 Shannon index		8.11 ±0.49^a		8.32 ±0.44^a		8.14 ±0.46^a		6.75 ±0.51^b		8.40 ±0.66^a		8.82 ±0.33^a		0.001
Simpson指数 Simpson index		0.98 ±0.01^a		0.98 ±0.01^a		0.98 ±0.01^a		0.94 ±0.03^b		0.99 ±0.01^a		0.99 ±0.01^a		0.005

2.5.2 蛋白酶和益生菌组合添加对肉鸡盲肠微生物门水平物种相对丰度的影响

由图2可知,42日龄肉鸡盲肠微生物在门水平的主要微生物菌群有拟杆菌门(Bacteroidetes)、厚壁菌门(Firmicutes)、互养菌门(Synergistetes)、变形菌门(Proteobacteria)、梭杆菌门(Fusobacteria)、疣微菌门(Verrucomicrobia)、脱铁杆菌门(Deferribacteres)、蓝藻菌门(Cyanobacteria)等,其中Bacteroidetes和Firmicutes为优势菌门。

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图2 蛋白酶和益生菌组合添加对肉鸡盲肠微生物门水平物种相对丰度的影响

Bacteroidetes:拟杆菌门;Firmicutes:厚壁菌门;Synergistetes:互养菌门;Proteobacteria:变形菌门;Fusobacteria:梭杆菌门;Verrucomicrobia:疣微菌门;Deferribacteres:脱铁杆菌门;Cyanobacteria:蓝藻菌门;Elusimicrobia:迷踪菌门;Others:其他。

Fig.2 Effects of protease and probiotics combination supplementation on species relative abundance of cecal microorganism at phylum level of broilers

与CON组相比,AN组、PRO组、PRO+CB组、PRO+EF组和PRO+BC组的盲肠Bacteroidetes相对丰度无显著差异(P>0.05),PRO+CB组的盲肠Firmicutes相对丰度显著提高(P<0.05)。

2.5.3 蛋白酶和益生菌组合添加对盲肠微生物属水平物种相对丰度的影响

由图2可知,42日龄肉鸡盲肠微生物在属水平的主要微生物菌群包括拟杆菌属(Bacteroides)、考拉杆菌属(Phascolarctobacterium)、粪杆菌属(Faecalibacterium)、颤螺旋菌属(Oscillospira)、副拟杆菌属(Parabacteroides)、巨单胞菌属(Megamonas)、瘤胃球菌属(Ruminococcus)、脱硫弧菌属(Desulfovibrio)、瘤胃球菌科_瘤胃球菌属(Ruminococcaceae_Ruminococcus)等,其中Bacteroides和Phascolarctobacterium为优势菌属。

与CON组相比,PRO组、PRO+EF组和PRO+BC组的盲肠Bacteroides相对丰度无显著差异(P>0.05),AN组和PRO+CB组的盲肠Bacteroides相对丰度显著降低(P<0.05);AN组、PRO组、PRO+EF组和PRO+BC组的盲肠Phascolarctobacterium相对丰度无显著差异(P>0.05),PRO+CB组的盲肠Phascolarctobacterium相对丰度相对提高(P<0.05);AN组、PRO组、PRO+CB组和PRO+EF组的盲肠Faecalibacterium无显著差异(P>0.05),PRO+BC组的盲肠Faecalibacterium相对丰度显著提高(P<0.05)。与AN组相比,PRO组和PRO+EF组的盲肠Bacteroides相对丰度显著提高(P<0.05),PRO+CB组的盲肠Faecalibacterium相对丰度显著提高(P<0.05),PRO+BC组的盲肠Faecalibacterium相对丰度显著提高(P<0.05)。

3 讨论

3.1 蛋白酶和益生菌组合添加对肉鸡生长性能的影响

近些年,一些研究证实饲粮中添加蛋白酶和益生菌对肉鸡的生长性能产生积极影响。Hu等^[11]研究表明,肉鸡饲粮中添加蛋白酶有促进生长代谢、提高粗蛋白质消化率的功能。Jabbar等^[12]在研究不同粗蛋白质水平饲粮中添加蛋白酶发现,添加蛋白酶能显著提高15~28日龄肉鸡的ADG,同时显著降低F/G。张海鹏等^[13]研究发现,肉鸡饲粮中添加凝结芽孢杆菌能显著提高肉鸡ADG、饲料转化率以及干物质和粗蛋白质的表观消化代谢率,达到与抗生素组相近的水平。Liao等^[14]研究表明,饲粮中添加丁酸梭菌能显著提高肉鸡1~42日龄ADG。Shehata等^[15]研究表明,饲粮中添加粪肠球菌显著提高了Cobb肉鸡的体重和饲料转化率。

本试验结果表明,蛋白酶和益生菌组合添加显著提高了42日龄体重和22~42日龄、1~42日龄的ADG,显著降低了22~42日龄的F/G,对肉鸡的生长性能有积极的影响。Luo等^[16]研究发现,蛋白酶和益生菌组合添加能通过提高肠道消化酶活性,进而提高营养物质消化率和生长性能。张运锋等^[17]报道,肉鸡饲粮中添加蛋白酶可促进小肠发育和消化酶分泌,改善蛋白质的消化吸收及氨基酸利用。蛋白酶和益生菌组合添加可能存在一定的协同作用,进而对肉鸡的生长性能有了更积极的促进作用。

3.2 蛋白酶和益生菌组合添加对肠道组织形态的影响

肠道是动物营养物质消化和吸收的主要部位,肠道的健康状况是影响营养物质吸收的关键因素,绒毛高度、隐窝深度和V/C反映了肠道的健康状况。小肠绒毛高度升高,可以增大小肠吸收面积,同时也增强过滤物质的作用。隐窝深度变浅表明肠上皮细胞增殖率和成熟率上升,分泌功能增强,肠道黏膜上皮绒毛吸收能力增强^[18]。V/C升高表明小肠健康状况良好吸收能力增强,V/C下降表明肠道健康出现问题,吸收营养物质能力减弱^[19]。王鑫鑫等^[20]研究发现,在饲粮中添加组合蛋白酶有利于改善肉鸡肠道组织形态,提高肉鸡小肠绒毛高度。何菊等^[21]研究发现,在肉鸡饲粮添加丁酸梭菌制剂能有效改善肠道形态,显著提高1~42日龄肉鸡盲肠和回肠V/C,对肠道健康的改善作用优于抗生素组。Wang等^[22]在仔猪饲粮中添加丁酸梭菌和粪肠球菌的研究发现,与对照组相比,添加益生菌增加了空肠绒毛高度和V/C,降低了空肠隐窝深度。本试验研究发现,肉鸡饲粮中蛋白酶和益生菌组合添加能够提高十二指肠和回肠绒毛高度及V/C,降低回肠隐窝深度,表明了蛋白酶和益生菌组合添加能改善肉鸡肠道形态,提高营养物质的消化吸收能力。

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图3 蛋白酶和益生菌组合添加对肉鸡盲肠微生物属水平物种相对丰度的影响

Bacteroides:拟杆菌属;Phascolarctobacterium:考拉杆菌属;Faecalibacterium:粪杆菌属;Oscillospira:颤螺旋菌属;Parabacteroides:副拟杆菌属;Megamonas:巨单胞菌属;Ruminococcus:瘤胃球菌属;Desulfovibrio:脱硫弧菌属;Prevotella:普雷沃菌属;Ruminococcaceae_Ruminococcus:瘤胃球菌科_瘤胃球菌属;Others:其他。

Fig.3 Effects of protease and probiotics combination supplementation on species relative abundance of cecal microorganism at genus level of broilers

3.3 蛋白酶和益生菌组合添加对肉鸡肠道紧密连接蛋白mRNA相对表达量的影响

紧密连接是小肠上皮细胞间最重要的连接结构,构成了肠道防御屏障中的物理屏障,包括闭合蛋白(Claudins)、Occludin和闭合小环蛋白(ZOs)3种重要的紧密连接蛋白。紧密连接蛋白在小肠中能维持肠黏膜通透性,减少肠上皮所受的损伤,对小肠上皮物理屏障的完整性和功能至关重要。Luo等^[16]研究表明,蛋白酶和益生菌组合添加可缓解炎症导致的肠道损伤,减轻肉鸡腹泻症状,在一定程度上提高营养物质消化率。Pu等^[23]在断奶仔猪饲粮添加凝结芽孢杆菌和酸化剂发现,相比于抗生素组和对照组,凝结芽孢杆菌组空肠黏膜Claudin-1的mRNA相对表达量显著上调,改善了肠黏膜屏障完整性。有研究发现,在饲粮中添加丁酸梭菌能有效提高肉鸡生长性能,提高肠道有益菌数量,抑制有害菌的生成,促进肠道健康,可有效预防肠炎^[24]。Shao等^[25]在研究粪肠球菌NCIMB 11181对肠道损伤的肉鸡肠道微生物菌群和屏障功能调节作用时发现,粪肠球菌组的紧密连接蛋白Claudin-1、Occludin、ZO-1和闭合小环蛋白-2(ZO-2)的mRNA相对表达量显著提高。Caballero-Franco等^[26]研究表明,粪肠球菌能够通过提高紧密连接基因的表达和增加黏液素的分泌来调节肠道屏障。

本试验结果表明,肉鸡饲粮中蛋白酶和益生菌组合添加可以降低空肠pH,通过调控紧密连接蛋白的表达来增强肉鸡肠道屏障功能。这些作用可能与益生菌提高肠道有益菌数量、抑制有害菌增殖的作用机制有关。粪肠球菌等益生菌在消化道内诱导产生更多的乙酸、丁酸等有机酸,促进了有益菌的增殖,降低了肠道的pH,从而抑制了一些如产气荚膜梭菌等病原菌的生长。而乙酸、丁酸等还能增加紧密连接蛋白的表达从而降低肠上皮细胞的渗透性,维持绒毛结构^[27]。益生菌还可促进肠上皮细胞间紧密连接蛋白的表达,进而提升肠道屏障功能,阻止病原菌以及有害物质进入机体,维持机体内环境的稳态,促进肠道健康^[10]。这表明蛋白酶和益生菌组合添加对肉鸡肠道屏障功能有一定的改善作用。

3.4 蛋白酶和益生菌组合添加对肉鸡盲肠微生物区系的影响

肠道微生物区系的平衡影响着动物消化吸收营养物质的能力,肉鸡盲肠微生物alpha多样性反映了单个样品物种丰度及物种多样性,通过Chao1、Faith_pd、Shannon和Simpson指数等多样性指数的大小来预测,Shannon和Simpson指数代表微生物群落物种的多样性,Chao1指数代表群落的物种丰富度,Faith_pd指数代表群落遗传多样性^[28]。本试验alpha多样性分析结果表明,蛋白酶和益生菌组合添加能提高肉鸡盲肠微生物多样性。Cui等^[29]研究发现,饲粮中添加丁酸梭菌能提高肉鸡肠道Simpson和Chao1指数,对Bacteroidetes的相对丰度也有一定促进作用。Hu等^[30]研究发现,饲粮中添加粪肠球菌能提高仔猪肠道Chao1、ACE和Shannon指数,同时提高Proteobacteria和Bacteroidetes等有益菌的相对丰度。本试验结果与上述研究结果一致。

在门水平上,Bacteroidetes和Firmicutes是盲肠微生物区系中优势微生物菌落,与动物机体中能量产生和营养物质代谢密切相关,发挥着重要作用^[31]。本试验结果表明,蛋白酶和益生菌组合添加能提高肉鸡盲肠Firmicutes相对丰度;粪肠球菌和凝结芽孢杆菌分别与蛋白酶组合添加提高了盲Bacteroidetes相对丰度。李修宇等^[32]研究发现,在1~35日龄肉鸡饲粮中添加复合益生菌能够改善肠道形态,提高盲肠有益菌相对丰度,促进肠道健康。有研究表明,粪肠球菌可通过分泌细菌素与有机酸来抑制病原菌的生长繁殖,提高乳酸菌含量,优化肠道菌群结构^[33]。农斯伟等^[34]研究表明,丁酸梭菌提高了广西黎村黄鸡盲肠梭菌属、Ruminococcus、乳杆菌属的相对丰度,能够在一定程度上改善盲肠菌群。这表明蛋白酶和益生菌组合添加能够促进肉鸡盲肠微生物多样性,同时有效改善肠道微生物平衡,具有促进其肠道健康的潜力。

4 结论

蛋白酶和益生菌组合添加能够提高肉鸡生长性能,降低空肠pH,促进肠道形态发育,提高肠道紧密连接蛋白的表达,有利于改善肉鸡的肠道屏障功能,达到了与抗生素相似的效果;此外,蛋白酶和益生菌组合添加还有助于调节肉鸡盲肠菌群相对丰度,维持肠道菌群平衡,促进肠道健康。在本试验条件下,肉鸡基础饲粮中组合添加100 mg/kg的蛋白酶和100 mg/kg的粪肠球菌效果最佳。

References

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[1]	韩业东, 刘再胜, 肖爱波, 等. 畜产品抗生素残留现状及控制对策[J]. 畜牧产业, 2021(3):70-71. HAN Y D, LIU Z S, XIAO A B, et al. Current status of antibiotic residues in animal products and control countermeasures[J]. Animal Agriculture, 2021(3):70-71. (in Chinese)

[2]	石建存, 杨彩然, 段晓红. 禁抗生产下提高养鸡经济效益的措施[J]. 中国动物保健, 2021, 23(12):93-95. SHI J C, YANG C R, DUAN X H. Measures to improve the economic efficiency of chicken raising under the prohibition of production[J]. China Animal Health, 2021, 23(12):93-95. (in Chinese)

[3]

侯振平, 吴端钦, 蒋桂韬, 等. 不同蛋白酶对肉鸡屠宰性能、器官指数、肠道形态结构及养分消化率的影响[J]. 家畜生态学报, 2018, 39(1):25-30.

HOU

Z P

, WU

D Q

, JIANG

G T

, et al. Effects of different protease supplementation on slaughter performance,organ index,intestinal villi structure and nutrient metabolizability of broilers[J]. Acta Ecologae Animalis Domastici, 2018, 39(1):25-30. (in Chinese)

[4]	LAW F L, ZULKIFLI I, SOLEIMANI A F, et al. The effects of low-protein diets and protease supplementation on broiler chickens in a hot and humid tropical environment[J]. Asian-Australasian Journal of Animal Sciences, 2018, 31(8):1291-1300. DOI PMID

[5]	MOUNTZOURIS K C, TSITRSIKOS P, PALAMIDI I, et al. Effects of probiotic inclusion levels in broiler nutrition on growth performance,nutrient digestibility,plasma immunoglobulins,and cecal microflora composition[J]. Poultry Science, 2010, 89(1):58-67. DOI

[6]	JIA L L, SHAN K, PAN L L, et al. Clostridium butyricum CGMCC0313.1 protects against autoimmune diabetes by modulating intestinal immune homeostasis and inducing pancreatic regulatory T cells[J]. Frontiers in Immunology, 2017, 8:1345. DOI

[7]	安玉亭, 胡浩, 王智刚, 等. 粪肠球菌的生物学特性及其在养殖业中的应用[J]. 安徽农业科学, 2015, 43(27):115-117. AN Y T, HU H, WANG Z G, et al. The biological characteristics of Entemcoccus faecalis and its application in breeding industry[J]. Journal of Anhui Agricultural Sciences, 2015, 43(27):115-117. (in Chinese)

[8]	夏涛, 白华毅, 王乙茹, 等. 饲用凝结芽孢杆菌在肉鸡生产中的应用研究进展[J]. 黑龙江畜牧兽医, 2018(23):35-38. XIA T, BAI H Y, WANG Y R, et al. Bacillus coagulans in broiler production advances in applied research[J]. Heilongjiang Animal Science and Veterinary Medicine, 2018(23):35-38. (in Chinese)

[9]	MIDHUN S J, NEETHU S, VYSAKH A, et al. Antagonism against fish pathogens by cellular components/preparations of Bacillus coagulans (MTCC-9872) and it’s in vitro probiotic characterisation[J]. Current Microbiology, 2018, 75(9):1174-1181. DOI

[10]	乔欣君. 凝结芽孢杆菌的生物学功能特性及其在动物生产中的应用[J]. 饲料研究, 2021, 44(16):151-153. QIAO X J. Biological functional characteristics of Bacillus coagulans and its application in animal production[J]. Feed Research, 2021, 44(16):151-153. (in Chinese)

[11]	HU J, INGALE S, RATHI P, et al. Influence of exogenous acid protease in broiler chickens fed corn-soybean meal-based diets[J]. Journal of Animal Physiology and Animal Nutrition, 2020, 104(1):204-211. DOI PMID

[12]	JABBAR A, TAHIR M, ALHIDARY I A, et al. Impact of microbial protease enzyme and dietary crude protein levels on growth and nutrients digestibility in broilers over 15-28 days[J]. Animals, 2021, 11(9):2499. DOI

[13]	张海鹏, 肖明霞, 王乙茹, 等. 饲用凝结芽孢杆菌对肉鸡养分表观代谢率及血清生化指标的影响[J]. 饲料博览, 2022(1):7-11. ZHANG H P, XIAO M X, WANG Y R, et al. Effects of Bacillus coagulans on apparent nutrients digestibility and serum biochemical indexes in broiler chickens[J]. Feed Review, 2022(1):7-11. (in Chinese)

[14]	LIAO X D, MA G, CAI J, et al. Effects of Clostridium butyricum on growth performance,antioxidation,and immune function of broilers[J]. Poultry Science, 2015, 94(4):662-667. DOI

[15]	SHEHATA A A, TARABEES R, BASIOUNI S, et al. Effect of a potential probiotic candidate Enterococcus faecalis-1 on growth performance,intestinal microbiota,and immune response of commercial broiler chickens[J]. Probiotics and Antimicrobial Proteins, 2020, 12(2):451-460. DOI

[16]	LUO C W, WANG L Q, CHEN Y H, et al. Supplemental enzyme and probiotics on the growth performance and nutrient digestibility of broilers fed with a newly harvested corn diet[J]. Animals, 2022, 12(18):2381. DOI

[17]	张运锋, 李丹蕾, 占秀安. 新型饲用蛋白酶对肉鸡生产性能和消化功能的影响[J]. 中国畜牧杂志, 2022, 58(11):212-218. ZHANG Y F, LI D L, ZHAN X A, et al. Effects of a new protease supplementation on performance and digestive function in broilers[J]. Chinese Journal of Animal Science, 2022, 58(11):212-218. (in Chinese)

[18]

OMAR

A E

, AL-KHALAIFAH

H S

, MOHAMED

W A M

, et al. Effects of phenolic-rich onion (Allium cepa L.) extract on the growth performance,behavior,intestinal histology,amino acid digestibility,antioxidant activity,and the immune status of broiler chickens[J]. Frontiers in Veterinary Science, 2020, 7:582612.

DOI

[19]	XING R, YANG H, WANG X, et al. Effects of calcium source and calcium level on growth performance,immune organ indexes,serum components,intestinal microbiota,and intestinal morphology of broiler chickens[J]. Journal of Applied Poultry Research, 2020, 29(1):106-120. DOI

[20]

王鑫鑫, 李茜茜, 吕毅, 等. 组合蛋白酶对肉仔鸡采食偏好性、血清生化指标和肠道组织形态的影响[J]. 动物营养学报, 2022, 34(1):264-273.

DOI

WANG

X X

, LI

X X

, LYU

, et al. Effects of combinatorial protease on feed intake preference,serum biochemical indices and intestinal tissue morphology of broilers[J]. Chinese Journal of Animal Nutrition, 2022, 34(1):264-273. (in Chinese)

[21]

何菊, 李筱雯, 崔卫涛, 等. 丁酸梭菌CB1制剂对肉鸡生产性能、肠道形态和菌群的影响[J]. 湖北农业科学, 2021, 60(17):93-97,103.

, LI

X W

, CUI

W T

, et al. Effects of Clostridium butyricum CB1 preparations on production performance,intestinal morphology and microflora of broilers[J]. Hubei Agricultural Sciences, 2021, 60(17):93-97,103. (in Chinese)

[22]	WANG K L, CAO G T, ZHANG H R, et al. Effects of Clostridium butyricum and Enterococcus faecalis on growth performance,immune function,intestinal morphology,volatile fatty acids,and intestinal flora in a piglet model[J]. Food & Function, 2019, 10(12):7844-7854.

[23]	PU J N, CHEN D W, TIAN G, et al. Protective effects of benzoic acid,Bacillus coagulans,and oregano oil on intestinal injury caused by enterotoxigenic Escherichia coli in weaned piglets[J]. BioMed Research International, 2018, 2018:1829632.

[24]	YANG C M, CAO G T, FERKET P R, et al. Effects of probiotic,Clostridium butyricum,on growth performance,immune function,and cecal microflora in broiler chickens[J]. Poultry Science, 2012, 91(9):2121-2129. DOI

[25]

SHAO

Y J

, ZHEN

W R

, GUO

F S

, et al. Pretreatment with probiotics Enterococcus faecium NCIMB 11181 attenuated Salmonella typhimurium-induced gut injury through modulating intestinal microbiome and immune responses with barrier function in broiler chickens[J]. Journal of Animal Science and Biotechnology, 2022, 13(1):130.

DOI

[26]	CABALLERO-FRANCO C, KELLER K, DE SIMONE C, et al. The VSL3 probiotic formula induces mucin gene expression and secretion in colonic epithelial cells[J]. American Journal of Physiology.Gastrointestinal and Liver Physiology, 2007, 292(1):G315-G322.

[27]	KONG Q, HE G Q, JIA J L, et al. Oral administration of Clostridium butyricum for modulating gastrointestinal microflora in mice[J]. Current Microbiology, 2011, 62(2):512-517. DOI

[28]	GRICE E A, KONG H H, CONLAN S, et al. Topographical and temporal diversity of the human skin microbiome[J]. Science, 2009, 324(5931):1190-1192. DOI PMID

[29]	CUI Y Q, HAN C, LI S Y, et al. High-throughput sequencing-based analysis of the intestinal microbiota of broiler chickens fed with compound small peptides of Chinese medicine[J]. Poultry Science, 2021, 100(3):100897. DOI

[30]	HU C J, XING W G, LIU X H, et al. Effects of dietary supplementation of probiotic Enterococcus faecium on growth performance and gut microbiota in weaned piglets[J]. AMB Express, 2019, 9(1):33. DOI

[31]	OAKLEY B B, LILLEHOJ H S, KOGUT M H, et al. The chicken gastrointestinal microbiome[J]. FEMS Microbiology Letters, 2014, 360(2):100-112. DOI PMID

[32]

李修宇, 沈水宝, 韦晓芳, 等. 添加丁酸梭菌和复合益生菌对1-35日龄黎村黄鸡肠道形态和菌群的影响[J]. 饲料研究, 2021, 44(23):35-40.

X Y

, SHEN

S B

, WEI

X F

, et al. Effect of adding Clostridium butyricum and compound probiotics on the intestinal morphology and flora of Licun yellow chickens from 1-35 d of age[J]. Feed Research, 2021, 44(23):35-40. (in Chinese)

[33]	HEMARAJATA P, VERSALOVIC J. Effects of probiotics on gut microbiota:mechanisms of intestinal immunomodulation and neuromodulation[J]. Therapeutic Advances in Gastroenterology, 2013, 6(1):39-51. DOI

[34]

农斯伟, 沈水宝, 韦晓芳, 等. 丁酸梭菌和枯草芽孢杆菌对广西黎村黄鸡生长性能、肠道形态及盲肠微生物区系的影响[J]. 饲料工业, 2021, 42(3):19-24.

NONG

S W

, SHEN

S B

, WEI

X F

, et al. Effects of Clostridium butyricum and Bacillus subtilis on the growth performance,intestinal morphology and cecal microflora of Guangxi Licun yellow chickens[J]. Feed Industry, 2021, 42(3):19-24. (in Chinese)

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Abstract

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1 材料与方法

1.1 试验动物及材料

1.2 试验设计

表1 试验设计

1.3 基础饲粮与饲养管理

表2 基础饲粮组成及营养水平(风干基础)

1.4 指标测定及方法

1.4.1 生长性能

1.4.2 肠道pH

1.4.3 肠道组织形态

1.4.4 肠道紧密连接蛋白mRNA相对表达量的测定

表3 引物序列

1.4.5 盲肠微生物区系

1.5 数据统计

2 结果

2.1 蛋白酶和益生菌组合添加对肉鸡生长性能的影响

表4 蛋白酶和益生菌组合添加对肉鸡生长性能的影响

2.2 蛋白酶和益生菌组合添加对肉鸡肠道pH的影响

表5 蛋白酶和益生菌组合添加对肉鸡肠道pH的影响

2.3 蛋白酶和益生菌组合添加对肠道组织形态的影响

表6 蛋白酶和益生菌组合添加对肉鸡肠道组织形态的影响

2.4 蛋白酶和益生菌组合添加对肉鸡肠道紧密连接蛋白mRNA相对表达量的影响

图1 蛋白酶和益生菌组合添加对肉鸡肠道紧密连接蛋白mRNA相对表达量的影响

2.5 蛋白酶和益生菌组合添加对肉鸡盲肠微生物区系的影响

2.5.1 蛋白酶和益生菌组合添加对肉鸡盲肠微生物alpha多样性的影响

表7 蛋白酶和益生菌组合添加对肉鸡盲肠微生物alpha多样性的影响

2.5.2 蛋白酶和益生菌组合添加对肉鸡盲肠微生物门水平物种相对丰度的影响

图2 蛋白酶和益生菌组合添加对肉鸡盲肠微生物门水平物种相对丰度的影响

2.5.3 蛋白酶和益生菌组合添加对盲肠微生物属水平物种相对丰度的影响

3 讨论

3.1 蛋白酶和益生菌组合添加对肉鸡生长性能的影响

3.2 蛋白酶和益生菌组合添加对肠道组织形态的影响

图3 蛋白酶和益生菌组合添加对肉鸡盲肠微生物属水平物种相对丰度的影响

3.3 蛋白酶和益生菌组合添加对肉鸡肠道紧密连接蛋白mRNA相对表达量的影响

3.4 蛋白酶和益生菌组合添加对肉鸡盲肠微生物区系的影响

4 结论

References