RESEARCH PAPER

Effects of Different Kinds of Compound Attractant in Plant Protein Diet on Growth, Immune and Intestinal Digestive Enzyme Activities of Genetically Improved Farmed Tilapia (Oreochromis niloticus)

  • LI Yang , 1 ,
  • WANG Yanli 1 ,
  • ZHANG Wenjing 1 ,
  • HAN Haojun 1 ,
  • WANG Zhen 1 ,
  • WANG Jiting , 1, ** ,
  • SHENG Yuchun 2
Expand
  • 1 College of Animal Science & Technology, Shandong Agricultural University, Tai’an 271000, China
  • 2 Beijing Green Hengxing Biotechnology Co., Ltd., Beijing 102444, China
**associate professor, E-mail:

*Contributed equally

Received date: 2023-02-09

  Online published: 2023-08-10

Abstract

The purpose of this experiment was to study the effects of compound attractant A (composed of allicin, dimethyl-β-thiamine propionate and trimethylamine oxide) and compound attractant B (composed of taurine, arginine, glutamic acid, alanine, glycine and nucleotides) in plant protein diet on growth, immune and intestinal digestive enzyme activities of genetically improved farmed tilapia (GIFT). A total of 375 healthy GIFT were randomly divided into 5 groups with 3 replicates per group and 25 fish per replicate. Fish in the control group were fed a basal diet, fish in A1 and A2 groups were basal diets supplemented with 0.1% and 0.2% compound attractant A, respectively; and fish in B1 and B2 groups were basal diets supplemented with 0.1% and 0.2% compound attractant B, respectively. The experiment lasted for 40 days. The results showed as follows: 1) the average daily feed intake, specific growth rate and weight gain rate of A2 group were significantly higher than those of the control group (P<0.05), and the feed coefficient of B2 group was significantly lower than that of the control group (P<0.05). 2) The viscerosomatic index of A2 and B2 groups was significantly lower than that of the control group (P<0.05). 3) The whole fish crude protein content of A1, A2, B1 and B2 groups was significantly higher than that of the control group (P<0.05). 4) The serum triglyceride content of A1, A2, B1 and B2 groups was significantly higher than that of the control group (P<0.05), the serum total cholesterol content of A1 and A2 groups was significantly higher than that of the control group (P<0.05), the serum lysozyme activity of A2 group was significantly higher than that of the control group (P<0.05), and the serum superoxide dismutase activity of A2 group was significantly higher than that of B1 and B2 groups (P<0.05). 5) The foregut protease activity after feeding 1 and 3 h of B2 group was significantly higher than that of the control group (P<0.05), and the midgut and hindgut protease activity after feeding 3 h was significantly higher than that of the control group (P<0.05). The midgut amylase activity after feeding 1 h of B1 and B2 groups was significantly higher than that of other groups (P<0.05). The foregut lipase activity after feeding 3 h of B2 group was significantly higher than that of A1 and B1 groups (P<0.05). To sum up, adding 0.2% compound attractant A to the plant protein diet can increase the average daily feed intake, specific growth rate and weight gain rate of GIFT, increase the serum lysozyme and superoxide dismutase activities, and improve the intestinal digestive enzymes activities; adding 0.2% compound attractant B to the plant protein diet can decrease the feed coefficient, and increase the intestinal digestive enzymes activities and whole fish crude protein content. Based on the above indicators, the effect of compound attractant A on the healthy growth of GIFT is better than that of compound attractant B.

Cite this article

LI Yang , WANG Yanli , ZHANG Wenjing , HAN Haojun , WANG Zhen , WANG Jiting , SHENG Yuchun . Effects of Different Kinds of Compound Attractant in Plant Protein Diet on Growth, Immune and Intestinal Digestive Enzyme Activities of Genetically Improved Farmed Tilapia (Oreochromis niloticus)[J]. Chinese Journal of Animal Nutrition, 2023 , 35(8) : 5309 -5321 . DOI: 10.12418/CJAN2023.490

近年来,随着水产养殖业的飞速发展,水产动物饲料原料尤其是蛋白质饲料资源的短缺成为重要问题之一,所以生产企业试图利用廉价的植物性蛋白质饲料原料替代部分或全部鱼粉,以达到降低饲料成本的目的。但是在饲料中添加的植物性蛋白质原料由于其风味和适口性与鱼粉存在较大的差异,长期大量使用对鱼类生长、饲料利用效率、肉品质及生理指标产生一定的影响[1]。目前,饲料生产企业常将具有诱食作用的物质添加在饲料中以提高饲料的风味,不仅可以促进鱼类的采食,还能减少饲料的浪费。国内外对鱼类单一诱食剂的研究比较深入,各种诱食剂的正面效果也在水产养殖中得到了较好地验证,氨基酸及其衍生物、二甲基-β-丙酸噻亭(DMPT)、甜菜碱、大蒜素等诱食剂已经广泛用于饲料生产中[2]。但是大多数诱食剂的作用比较单一,有些诱食剂只能在嗅觉和味觉上刺激鱼类增加采食,却不能提高鱼体的抵抗力和饲料利用率;而有些诱食剂可以通过提高鱼类肠道消化酶活性进而提高饲料利用率,但是对鱼类嗅觉的刺激较差。复合诱食剂一般包含多种诱食物质,是兼具营养、诱食和促生长作用的多功能饲料添加剂[3]。在饲料品质和饲料利用率方面,复合诱食剂要强于单一诱食剂,而且可以降低饲料成本,具有较显著的经济价值。杨代勤等[4]研究表明,甘氨酸与丙氨酸或丙氨酸与精氨酸的复合物能促进黄鳝的摄食,而单一氨基酸对促进黄鳝的摄食作用不明显。叶陈静等[5]研究发现,复合氨基酸的诱食效果优于单一氨基酸和中草药。Papatryphon等[6]分别在鱼粉饲料和植物蛋白质饲料中添加1.7%的复合诱食剂(丙氨酸、丝氨酸、肌苷酸和甜菜碱),发现该复合诱食剂能够显著提高条纹鲈对2种不同类别饲料的摄食率。鉴于复合诱食剂在水产养殖上的独特优势以及水产动物营养领域的研究趋势,其受到越来越多的青睐。
虽然诱食剂在改善饲料适口性、提高摄食量等方面具有很好的应用前景,但有关不同类型诱食剂的适宜添加剂量以及不同类型诱食剂复合使用时所表现出来的效果等方面的报道不尽一致[7]。因此,本试验以吉富罗非鱼(genetic improved farmed tilapia,GIFT)为研究对象,设计了2类复合诱食剂,通过研究植物性蛋白质饲料中添加不同类型的复合诱食剂对吉富罗非鱼生长、免疫及肠道消化酶活性的影响,筛选具有促摄食和促生长作用的复合诱食剂,为实际生产应用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

复合诱食剂A主要成分:大蒜素0.01%、DMPT 0.02%、氧化三甲胺0.02%、淀粉0.05%。
复合诱食剂B主要成分:牛磺酸0.025%、精氨酸0.03%、谷氨酸0.03%、丙氨酸0.02%、甘氨酸0.025%、核苷酸0.03%、淀粉0.04%。
复合诱食剂A属于非氨基酸类物质,此类诱食剂的气味较大,会对鱼类的嗅觉产生强烈的刺激,达到促进采食的作用。复合诱食剂B属于氨基酸类物质,会对鱼类有较好的营养作用。

1.2 试验设计

吉富罗非鱼由山东省淡水水产研究所提供,平均体重约为58 g。选用健康吉富罗非鱼375尾,随机分为5组,每组3个重复,每个重复25尾鱼。对照组饲喂基础饲料,A1和A2组分别在基础饲料中添加0.1%和0.2%的复合诱食剂A,B1和B2组分别在基础饲料中添加0.1%和0.2%的复合诱食剂B。
试验配制5组等氮等能的试验饲料,采用的蛋白质和能量饲料原料来源均一致。试验饲料组成及营养水平见表1。将原料经粉碎、称重以及混和后,使用干法平模制粒机制成颗粒直径为2 mm的试验饲料,在天气较好的自然条件下晒干,使水分含量低于10%,贮藏备用。
表1 试验饲料组成及营养水平(风干基础)

Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets (air-dry basis) %

项目
Items
组别Groups
对照Control A1 A2 B1 B2
原料Ingredients
面粉Wheat flour 30.50 30.40 30.30 30.40 30.30
豆粕Soybean meal 22.00 22.00 22.00 22.00 22.00
花生粕Peanut meal 14.00 14.00 14.00 14.00 14.00
棉籽粕Cottonseed meal 14.00 14.00 14.00 14.00 14.00
菜籽粕Rapeseed meal 14.00 14.00 14.00 14.00 14.00
豆油Soybean oil 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00
食盐NaCl 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20
磷酸二氢钙Ca(H2PO4)2 1.50 1.50 1.50 1.50 1.50
氯化胆碱Choline chloride (50%) 0.40 0.40 0.40 0.40 0.40
预混料Premix1) 0.40 0.40 0.40 0.40 0.40
复合诱食剂A Compound attractant A 0.10 0.20
复合诱食剂B Compound attractant B 0.10 0.20
合计Total 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00
营养水平Nutrient levels2)
总磷TP 1.14 1.14 1.14 1.14 1.14
粗脂肪EE 5.44 5.44 5.44 5.44 5.44
粗纤维CF 4.89 4.89 4.89 4.89 4.89
粗蛋白质CP 29.30 29.30 29.30 29.30 29.30
总能GE/(kJ/g) 17.76 17.76 17.76 17.76 17.76

1)预混料为每千克饲料提供 Premix provided the following per kg of diets:VA 10 000 IU,VD3 2 000 IU,VC 1 200 mg,VE 80 mg,VK 8 mg,VB1 25 mg,VB2 40 mg,VB6 20 mg,VB12 1.5 mg,泛酸 pantothenic acid 60 mg,生物素 biotin 2.5 mg,叶酸 folic acid 12 mg,Fe 25 mg,Cu 7 mg,Mn 24 mg,I 0.5 mg。

2)计算值 Calculated values。

1.3 饲养管理

饲养试验在山东农业大学动物科技试验园区的水循环养殖可控试验系统中进行。试验前将吉富罗非鱼进行为期2周的观察暂养。饲喂时,将吉富罗非鱼不再抢食作为其处于饱食状态。残留在养殖水箱中的残饵,用捞网捞出、晒干、称重,以精确计算平均日采食量。每天19:00对水循环系统进行换水,换水量大约1/5,视水质情况而定,控制水温在22~27 ℃,pH维持在7.5±0.3,水中溶氧量维持在5.0 mg/L以上。在饲养周期内每天对水质、温度、鱼死亡情况以及采食量等进行记录,进行为期40 d的饲养试验。

1.4 样品采集及指标测定

1.4.1 生长性能和健康指数

饲养试验结束前,将吉富罗非鱼停喂24 h,对每组进行活鱼计数,然后准确称量每组的活鱼总重量,记录吉富罗非鱼终末体重(FBW)。记录每个水箱消耗的饲料量,计算吉富罗非鱼的平均日采食量、增重率(WGR)、特定生长率(SGR)和饲料系数(FCR)。
每组随机选取5尾鱼,放入配有MS-222的容器中进行预先麻醉,麻醉后取其肝胰腺并称量重量,同时称量内脏总重以及测量全鱼体长,计算脏体比(VSI)、肝胰腺指数(HSI)和满度(CF)。
相关指标计算公式如下:
特定生长率(%/d)=100×(lnWt-lnW0)/t;
增重率(%)=100×(Wt-W0)/W0;
饲料系数=100×R/(Wt-W0);
脏体比(%)=100×内脏总重/体重。
肥满度(g/cm3)=100×体重/体长3;
肝胰腺指数(%)=100×肝胰腺重量/体重。
式中:W0为初始鱼体均重(g);Wt为终末鱼体均重(g);t为饲养天数(d);R为每尾鱼平均摄食饲料总量(g)。

1.4.2 全鱼营养成分测定

每组随机选取5尾鱼,放入配有MS-222的容器中进行预先麻醉,置于-20 ℃的冰箱储存备用,分析全鱼的水分、粗蛋白质、粗脂肪和粗灰分含量。水分含量通过恒温箱在105 ℃下烘干至恒重测定,粗蛋白质含量通过凯氏全自动定氮仪测定,粗脂肪含量通过索氏抽提法测定,粗灰分含量通过在550 ℃马福炉中灼烧3 h测定。

1.4.3 血清生化指标测定

从罗非鱼尾静脉取血,室温放置30~60 min后,然后4 000 r/min离心10 min,将5尾鱼血样的离心上清液混合,制备待测血清样品,移入冻存管置于液氮中保存备用。采用全自动生化分析仪(ProCX4,美国贝克曼公司)测定血清葡萄糖(GLU)、尿酸(UA)、总蛋白(TP)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)含量及谷草转氨酶(ALT)、谷丙转氨酶(AST)活性。

1.4.5 血清免疫指标测定

使用试剂盒测定血清溶菌酶(LYZ)和超氧化物歧化物酶(SOD)活性,试剂盒由南京建成生物工程研究所提供。

1.4.6 肠道消化酶活性测定

饲养试验结束后测定消化酶活性。分别在喂饲前1 h及喂饲后1、3、5 h,每组分别随机捕捞5尾鱼,分别取出整个肠道,剔除附属物,等分为前肠、中肠、后肠3段。5尾鱼样品混合成1个样品供肠道消化酶活性分析。用液氮快速冷冻,分装入塑料自封袋中,然后转入-20 ℃冰柜中保存备用。

1.4.6.1 蛋白酶活性测定

蛋白酶活性采用福林酚法测定,1 g新鲜组织样品在pH 7.5和30 ℃条件下,1 min水解酪蛋白产生1 μg酪氨酸量定为1个酶活性单位。
测定步骤:取匀浆粗酶液1 mL,加底物0.5%酪蛋白溶液2 mL(以0.5 mol/L NaOH溶液、pH 7.5磷酸缓冲液配制),于30 ℃水浴中反应15 min。然后加入10%三氯乙酸3 mL过滤,取滤液1 mL,加入0.55 mol/L碳酸钠5 mL,再加入福林试剂1 mL,于30 ℃水浴中显色15 min,在680 nm波长处比色,同时以1 mL已煮沸失活的酶液作空白对照。

1.4.6.2 脂肪酶活性测定

脂肪酶活性单位定义为:每毫克蛋白质在37 ℃条件下,每分钟水解甘油三酯生成1 μmol脂肪酸定为1个酶活性单位。采用南京建成生物工程研究所生产的试剂盒测定,具体操作依据试剂盒说明书进行。

1.4.6.3 淀粉酶活性测定

采用二硝基水杨酸(DNS)还原糖法,以1%淀粉作为底物,在pH 5.6,40 ℃条件下,1 g样品鲜重反应5 min产生的麦芽糖的毫克数定为1个酶活性单位。
测定步骤:取匀浆粗酶液1 mL,加当天配制的1%淀粉溶液2 mL(以0.02 mol/L,pH 5.6柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液配制),于40 ℃水浴中糖化5 min,取出后,立即加入4 mL 0.4 mol/L NaOH溶液使淀粉酶失活,得到糖化液。取糖化液2 mL,加2 mL DNS显色剂在沸水中煮沸显色5 min,于520 nm波长处比色。同时以2 mL已煮沸失活的酶液作空白对照。

1.5 数据统计与分析

数据采用SPSS 22.0软件进行单因素方差分析(one-way ANOVA),均值间的多重比较采用Duncan氏检验方法。表中所有数据均为平均值±标准差(mean±SD)表示,差异显著性水平为P<0.05。

2 结果与分析

2.1 不同类型复合诱食剂对吉富罗非鱼生长性能的影响

表2可见,A2组的平均日采食量、特定生长率和增重率显著高于对照组(P<0.05);其他各试验组的特定生长率和增重率均高于对照组,但差异不显著(P>0.05)。而且随着复合诱食剂添加剂量的增加,吉富罗非鱼的特定生长率和增重率均有所增加。B2组的饲料系数显著低于对照组(P<0.05);其他各试验组的饲料系数均低于对照组,但差异不显著(P>0.05)。
表2 不同类型复合诱食剂对吉富罗非鱼生长性能的影响

Table 2 Effects of different types of compound attractant on growth performance of GIFT

项目
Items
组别Groups
对照Control A1 A2 B1 B2
初始体重IBW/g 58.41±1.12 58.41±1.09 58.41±1.11 58.41±1.02 58.41±1.07
终末体重FBW/g 107.23±4.14 110.12±3.15 113.25±5.64 108.89±3.37 110.87±5.64
平均日采食量ADFI/g 73.22±2.46a 75.69±3.23ab 78.05±3.41b 74.85±2.82ab 73.83±3.23a
特定生长率SGR/(%/d) 1.56±0.11a 1.63±0.03ab 1.70±0.10b 1.61±0.03ab 1.67±0.05ab
增重率WGR/% 83.93±7.72a 88.67±2.03ab 94.48±7.34b 87.16±2.17ab 91.75±3.47ab
饲料系数FCR 1.50±0.11b 1.46±0.02ab 1.42±0.05ab 1.46±0.02ab 1.39±0.05a

同行数据肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05),相同或无字母表示差异不显著(P>0.05)。下表同。

In the same row, values with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05), while with the same or no letter superscripts mean no significant difference (P>0.05). The same as below.

2.2 不同类型的复合诱食剂对吉富罗非鱼健康指数的影响

表3可见,各组之间肥满度和肝胰腺指数没有显著差异(P>0.05)。A2组的肥满度略高于其他组;各试验组肝胰腺指数均低于对照组,其中以A2组最低。A2和B2组的脏体比显著低于对照组(P<0.05)。
表3 不同类型的复合诱食剂对吉富罗非鱼健康指数的影响

Table 3 Effects of different types of compound attractant on health index of GIFT

项目
Items
组别Groups
对照Control A1 A2 B1 B2
肥满度CF/(g/cm3) 0.37±0.01 0.37±0.01 0.39±0.01 0.38±0.02 0.37±0.02
肝胰腺指数HSI/% 4.93±0.41 4.47±0.37 4.29±0.39 4.33±0.27 4.54±0.25
脏体比VSI/% 13.62±0.85b 12.27±1.27ab 11.70±0.17a 12.67±0.86ab 11.84±0.40a

2.3 不同类型复合诱食剂对吉富罗非鱼全鱼营养组成的影响

表4可见,各组之间全鱼水分、粗脂肪和粗灰分含量没有显著差异(P>0.05)。A1、A2、B1和B2组的全鱼粗蛋白质含量显著高于对照组(P<0.05),B2组的全鱼粗蛋白质含量显著高于A1、A2和B1组(P<0.05)。
表4 不同类型的复合诱食剂对吉富罗非鱼全鱼营养组成的影响

Table 4 Effects of different types of compound attractant on whole body nutrient composition of GIFT %

项目
Items
组别Groups
对照Control A1 A2 B1 B2
水分Moisture 64.97±3.95 68.07±9.34 66.79±4.78 69.79±7.58 67.19±6.08
粗蛋白质Crude protein 12.26±0.13a 12.64±0.13b 12.89±0.16b 12.86±0.16b 13.34±0.17c
粗脂肪Crude lipid 10.63±0.06 10.47±0.20 10.43±0.14 10.37±0.06 10.21±0.06
粗灰分Crude ash 9.96±0.07 9.68±0.08 9.81±0.13 9.72±0.04 9.67±0.05

2.4 不同类型的复合诱食剂对吉富罗非鱼血清生化和免疫指标的影响

表5可见,各组之间血清葡萄糖、尿酸、总蛋白含量和谷丙转氨酶、谷草转氨酶活性没有显著差异(P>0.05)。A1、A2、B1和B2组的血清甘油三酯含量显著高于对照组(P<0.05),A1和A2组的血清总胆固醇含量显著高于对照组(P<0.05),A2组的血清溶菌酶活性显著高于对照组(P<0.05);A1、A2、B1和B2组的血清超氧化物歧化酶活性与对照组无显著差异(P>0.05),但A2组的血清超氧化物歧化酶活性显著高于B1和B2组(P<0.05)。
表5 不同类型的复合诱食剂对吉富罗非鱼血清生化和免疫指标的影响

Table 5 Effects of different types of compound attractant on serum biochemical and immune indexes of GIFT

项目
Items
组别Groups
对照Control A1 A2 B1 B2
葡萄糖GLU/(mmol/L) 5.30±2.58 4.76±0.98 5.23±0.78 5.15±2.04 5.80±1.84
尿酸UA/(mmol/L) 61.75±15.31 61.25±19.36 64.50±17.75 60.50±34.88 62.25±23.36
总蛋白TP/(g/L) 33.48±5.65 37.38±4.64 37.38±5.03 37.83±2.80 39.03±1.30
甘油三酯TG/(mmol/L) 5.11±1.44b 4.65±0.98a 4.34±2.02a 4.25±1.12a 4.26±1.42a
总胆固醇TC/(mmol/L) 4.37±0.45b 3.86±0.72a 3.96±0.97a 4.19±0.62ab 4.31±0.46ab
谷丙转氨酶ALT/(g/L) 53.50±14.01 63.75±24.63 57.50±17.02 54.00±11.55 55.75±15.78
谷草转氨酶AST/(U/L) 131.75±48.42 128.00±83.69 134.25±47.78 124.25±72.61 126.00±71.40
溶菌酶LYZ/(U/mL) 55.00±12.17a 81.67±11.92ab 94.58±11.39b 82.25±13.13ab 76.25±34.69ab
超氧化物歧化酶SOD/(U/mL) 176.01±22.07ab 181.32±23.22ab 186.60±15.15b 175.73±24.09a 173.15±11.18a

2.5 不同类型的复合诱食剂对吉富罗非鱼肠道消化酶活性的影响

2.5.1 不同类型的复合诱食剂对吉富罗非鱼肠道蛋白酶活性的影响

表6可见,各组采食后1 h的前肠蛋白酶活性高于采食后3 h(除B2组),采食后3 h的中肠和后肠蛋白酶活性高于采食后1 h。B2组采食后1和3 h的前肠蛋白酶活性显著高于对照组(P<0.05),采食后3 h的中肠和后肠蛋白酶活性显著高于对照组(P<0.05)。
表6 不同类型的复合诱食剂对吉富罗非鱼肠道蛋白酶活性的影响

Table 6 Effects of different types of compound attractant on intestinal protease activity of GIFT U/mg prot

项目
Items
采食时间
Feeding time
组别Groups
对照Control A1 A2 B1 B2
前肠 采食后1 h After feeding 1 h 4.33±1.32a 4.98±2.83ab 5.05±0.50ab 5.15±122ab 5.26±3.22b
Foregut 采食后3 h After feeding 3 h 2.37±1.19a 3.77±1.26ab 2.80±3.75a 4.46±1.98ab 7.68±1.23b
中肠 采食后1 h After feeding 1 h 2.48±1.82 2.52±1.62 2.50±0.83 2.55±1.08 2.96±1.14
Midgut 采食后3 h After feeding 3 h 6.28±4.39a 6.42±2.63a 6.35±1.05a 6.78±2.36a 8.72±1.47b
后肠 采食后1 h After feeding 1 h 1.58±2.44 1.84±3.25 1.62±0.44 1.94±1.00 2.18±2.09
Hindgut 采食后3 h After feeding 3 h 2.89±0.72a 3.47±1.47a 2.94±0.85a 4.58±2.33ab 7.42±1.92b

2.5.2 不同类型的复合诱食剂对吉富罗非鱼肠道淀粉酶活性的影响

表7可见,各组采食后1 h的前肠淀粉酶活性高于采食后3 h,采食后3 h的中肠和后肠淀粉酶活性高于采食后1 h。B1和B2组采食后1 h的中肠淀粉酶活性显著高于其他各组(P<0.05)。
表7 不同类型的复合诱食剂对吉富罗非鱼肠道淀粉酶活性的影响

Table 7 Effects of different types of compound attractant on intestinal amylase activity of GIFT U/mg prot

项目
Items
采食时间
Feeding time
组别Groups
对照Control A1 A2 B1 B2
前肠 采食后1 h After feeding 1 h 0.43±0.30 0.44±0.20 0.49±0.20 0.44±0.20 0.51±0.30
Foregut 采食后3 h After feeding 3 h 0.33±0.25 0.37±0.18 0.34±0.45 0.41±0.26 0.42±0.35
中肠 采食后1 h After feeding 1 h 0.51±0.20a 0.53±0.10a 0.56±0.40a 0.86±0.00b 0.91±0.20b
Midgut 采食后3 h After feeding 3 h 0.63±0.23 0.88±0.44 0.68±0.51 0.86±0.39 0.96±0.58
后肠 采食后1 h After feeding 1 h 0.52±0.30 0.59±0.30 0.63±0.30 0.72±0.40 0.74±0.30
Hindgut 采食后3 h After feeding 3 h 0.85±0.03 0.85±0.23 0.88±0.22 0.89±0.19 0.94±0.16

2.5.3 不同类型的复合诱食剂对吉富罗非鱼肠道脂肪酶活性的影响

表8可见,各组采食后3 h的前肠、中肠和后肠脂肪酶活性均低于采食后1 h(除A组中肠)。B2组采食后3 h的前肠脂肪酶活性显著高于A1和B1组(P<0.05)。
表8 不同类型的复合诱食剂对吉富罗非鱼肠道脂肪酶活性的影响

Table 8 Effects of different types of compound attractant on intestinal lipase activity of GIFT U/g prot

项目
Items
采食时间
Feeding time
组别Groups
对照Control A1 A2 B1 B2
前肠 采食后1 h After feeding 1 h 8.44±0.60 8.61±0.59 8.61±0.82 9.20±1.41 9.14±1.05
Foregut 采食后3 h After feeding 3 h 8.37±3.59ab 8.21±1.33a 8.54±4.27ab 8.28±0.89a 9.10±1.25b
中肠 采食后1 h After feeding 1 h 6.46±1.77 6.91±1.89 7.14±2.56 8.60±2.33 9.86±3.58
Midgut 采食后3 h After feeding 3 h 6.22±2.68 6.34±0.61 7.94±1.04 7.25±2.02 7.48±1.43
后肠 采食后1 h After feeding 1 h 7.76±2.82 8.40±4.97 10.23±5.13 8.87±4.99 10.34±1.55
Hindgut 采食后3 h After feeding 3 h 7.36±1.93 7.92±1.41 8.12±1.09 8.62±2.14 8.55±1.11

2.5.4 不同时间吉富罗非鱼肠道平均消化酶活性的变化趋势

表9可见,吉富罗非鱼采食前1 h的平均蛋白酶活性较低,采食后,随着采食时间延长,平均蛋白酶活性先升高后降低。由表10可见,吉富罗非鱼采食前1h的平均淀粉酶活性较高,采食后1 h,平均淀粉酶活性下降,但随着采食时间延长,平均淀粉酶活性逐渐升高。由表11可见,吉富罗非鱼采食前1 h的平均脂肪酶活性较高,采食后,随着采食时间延长,平均脂肪酶活性大致呈降低趋势。
表9 不同时间吉富罗非鱼肠道平均蛋白酶活性的变化趋势

Table 9 Variation trend of intestinal mean protease activity of GIFT at different time U/mg prot

项目
Items
组别Groups
对照Control A1 A2 B1 B2
采食前1 h Before feeding 1 h 2.23±0.24 2.31±0.48 2.44±0.59 2.61±0.46 2.83±1.45
采食后1 h After feeding 1 h 3.13±1.23 3.00±0.73 3.68±0.41 3.40±0.45 3.86±0.31
采食后3 h After feeding 3 h 3.64±2.08 4.20±0.48 4.45±1.67 4.94±1.88 7.78±0.76
采食后5 h After feeding 5 h 2.17±1.13 2.24±0.60 3.45±3.29 2.94±0.20 3.46±0.66
表10 不同时间吉富罗非鱼肠道平均淀粉酶活性的变化趋势

Table 10 Variation trend of intestinal mean amylase activity of GIFT at different time U/mg prot

项目
Items
组别Groups
对照Control A1 A2 B1 B2
采食前1 h Before feeding 1 h 0.80±0.13 0.88±0.08 0.78±0.13 0.75±0.12 0.82±0.08
采食后1 h After feeding 1 h 0.50±0.15 0.51±0.10 0.62±0.11 0.60±0.20 0.65±0.15
采食后3 h After feeding 3 h 0.57±0.11 0.70±0.20 0.67±0.17 0.68±0.24 0.66±0.27
采食后5 h After feeding 5 h 0.72±0.30 0.76±0.17 0.81±0.07 0.78±0.09 0.83±0.03
表11 不同时间吉富罗非鱼肠道平均脂肪酶活性的变化趋势

Table 11 Variation trend of intestinal mean lipase activity of GIFT at different time U/g prot

项目
Items
组别Groups
对照Control A1 A2 B1 B2
采食前1 h Before feeding 1 h 8.18±3.91 8.89±2.13 9.34±0.42 9.18±2.59 9.44±2.09
采食后1 h After feeding 1 h 7.65±0.99 8.25±1.51 8.45±1.69 8.92±2.25 8.66±1.27
采食后3 h After feeding 3 h 7.78±2.11 7.06±0.89 7.02±2.03 7.68±0.89 7.43±1.02
采食后5 h After feeding 5 h 5.25±1.14 5.26±0.69 5.08±1.32 7.06±1.95 7.59±1.23

3 讨论

3.1 不同类型的复合诱食剂对吉富罗非鱼生长性能的影响

本试验结果显示,复合诱食剂A或复合诱食剂B对吉富罗非鱼的特定生长率、增重率以及饲料系数均有改善作用,而且复合诱食剂A的效果优于复合诱食剂B。这也在一定程度上反映了具有强烈刺激性香味的大蒜素类复合诱食剂A对吉富罗非鱼的直接诱食刺激效果较好。分析可能有以下原因:第一,组成复合诱食剂A的大蒜素对大多数鱼类的采食有强烈的刺激效果[8],在饲料中添加大蒜素能增加鱼类的采食量。第二,组成复合诱食剂A的DMPT具有强烈的诱食作用,有海洋气味,在藻类和较高等的植物中形成[9],推测鱼类在其味觉和嗅觉器官内可能具有特殊的DMPT感受器[10];也有研究表明,饲料中添加0.04% DMPT对某些水产动物诱食效果高于同浓度的风味氨基酸[11]。在湘云鲫的研究中甚至还有低浓度(0.05%)的DMPT诱食效果高于较高浓度(0.20%)的甜菜碱、牛磺酸和L-丙氨酸[11]。第三,组成复合诱食剂A中的氧化三甲胺是生物碱类物质,具有特殊的鲜味和爽口的甜味[12],对水产动物具有强烈的诱食作用。

3.2 不同类型的复合诱食剂对吉富罗非鱼健康指数的影响

鱼类肥满度是反映鱼类肥瘦程度和生长情况的健康指标,而肝胰腺指数和脏体比反映了鱼类的健康程度。本试验结果显示,各组之间肥满度没有显著差异,但是饲料中添加0.2%复合诱食剂A组的肥满度要优于其他各组,该研究结果也与生长试验的结果相吻合。可能是因为饲料中添加0.2%复合诱食剂A后香味较大,对于鱼的诱食具有较强的刺激作用,导致鱼类采食量较大,使其肥满度优于其他各组。
肝脏是鱼类代谢的主要器官,在动物机体中发挥着重要的作用。无论是长期还是短期营养方式的改变都会引起鱼类肝脏的应激。同时,肝脏还是鱼类重要的营养储存场所,一旦饲料配方的营养指标发生变动,再加上养殖环境导致鱼体的应激,肝脏重量会在短期内发生显著的变化。当鱼体健康程度较差时,不仅会造成肝胰脏的肿大,还会在鱼的肝胰脏以及内脏周围富集大量的脂肪。由于鱼体重变化较缓,故肝胰腺指数变化亦十分明显[13],因而可以利用肝胰腺指数评价鱼体的营养状况。同样鱼类的脏体比也反映了鱼类的健康程度。本试验结果显示,在肝胰腺指数和脏体比方面,饲料中添加2类复合诱食剂组的肝胰腺指数和脏体比均小于对照组,其中,添加0.2%的2类复合诱食剂组的脏体比显著低于对照组,说明添加剂量为0.2%时效果最好。饲料中添加2类复合诱食剂对鱼的健康程度均有所改善,增强了体内代谢反应,降低了肝胰脏脂肪的蓄积。分析可能存在以下几个原因:第一,复合诱食剂A的大蒜素有明显的抗菌消炎作用;第二,复合诱食剂A含有DMPT,有研究表明,DMPT具有保肝护肝功效,不仅可以提高动物的健康程度,还可以提高水产品的品质;第三,复合诱食剂B含有外源核苷酸,研究表明内源核苷酸最主要的合成场所是肝脏,动物很多组织细胞不能合成核苷酸,这就需要在肝脏中合成然后运往组织细胞,而补充外源核苷酸有助于减轻肝脏负担,提高机体健康。

3.3 不同类型的复合诱食剂对吉富罗非鱼全鱼营养组成的影响

本试验结果表明,饲料中添加2类复合诱食剂对吉富罗非鱼的水分、粗灰分含量没有显著影响。饲料中添加复合诱食剂B使吉富罗非鱼的粗脂肪含量有轻微的降低,这可能与复合诱食剂B中的核苷酸有关系,核苷酸中的腺苷酸在经过环化后[14],在激素调节中起到了信使传递作用,可以促进脂肪的代谢。本试验结果还发现,饲料中添加复合诱食剂B显著提高了全鱼体粗蛋白质含量,尤其是饲料中添加0.2%的复合诱食剂B效果更好。分析可能存在以下几个原因:第一,与组成复合诱食剂B的成分主要是氨基酸有关,氨基酸是蛋白质的合成前体,所以在饲料中添加复合诱食剂B不仅可以起到诱食的作用,还可以提高蛋白质的合成速率,增加鱼体内的粗蛋白质含量。第二,鱼体内蛋白质合成需要核苷酸的参与,需要以DNA为模板,然后经过转录形成RNA,最终翻译成蛋白质。其中核苷酸是DNA和RNA的组成成分,所以饲料中添加复合诱食剂B有利于体内蛋白质的合成,提高鱼体的粗蛋白质含量。

3.4 不同类型的复合诱食剂对吉富罗非鱼血清生化和免疫指标的影响

血糖是指血液中的葡萄糖含量,尿酸是体内嘌呤代谢的终产物。本试验显示,饲料中添加2类复合诱食剂对吉富罗非鱼血清葡萄糖和尿酸含量没有显著影响。血清总蛋白、甘油三酯和总胆固醇含量的变化能够反映机体生理和肝脏代谢功能[15]。当肝脏受损或病变时,会影响并减缓肝细胞合成蛋白质,使血清中蛋白质的品质和含量发生变化。本试验结果显示,饲料中添加2类复合诱食剂对吉富罗非鱼的血清总蛋白含量均有提高作用,同时也显著降低了血清甘油三酯含量,而且血清总胆固醇含量也略有降低,这表明添加复合诱食剂对肝脏的代谢产生了一定积极影响。这也与上述复合诱食剂对吉富罗非鱼健康指数的影响结果相吻合。
动物机体能够动态维持自身生理状态的稳定与平衡,所以血清中任何组分的异常变化都能间接地反映动物的健康状态[16]。谷草转氨酶和谷丙转氨酶存在于肝脏细胞胞浆中,参与生物机体氨基酸的代谢反应,催化氨基在酮酸与氨基酸转移,进而影响氨基酸的合成与分解。肝脏生理正常时,血清中转氨酶活性极低,但当肝脏受损或病变时,导致生物膜通透性增加,使肝细胞内谷草转氨酶和谷丙转氨酶渗透入血,从而使血清中转氨酶活性升高。因此血清中这2种转氨酶活性大小用来指示了肝脏受损的程度。本试验结果显示,饲料中添加2类复合诱食剂对吉富罗非鱼的血清谷草转氨酶和谷丙转氨酶活性没有显著影响,从而说明对肝脏无损伤,或损伤较小可以忽略[17]
超氧化物歧化酶在抗氧化损伤中起着重要的作用,能专一地清除生物体内的超阴离子,平衡机体的氧自由基。本试验结果显示,饲料中添加复合诱食剂A可以提高吉富罗非鱼的血清超氧化物歧化酶活性,这可能由于大蒜素具有一定抗氧化能力,使机体处于某种良好的生理状态,维持机体旺盛的新陈代谢,从而促进超氧化物岐化酶的生物合成[18]。李婵等[19]研究发现,饲料中添加15 mg/kg的大蒜素显著提高了虹鳟肝脏、肾脏中超氧化物歧化酶活性。溶菌酶是广泛存在于鱼类体表黏液、肠道黏液、血清和巨峰细胞中的一种非特异性体液免疫因子,其主要免疫功能是破坏革兰氏阳性菌的肽聚糖支架,使细胞在渗透压的作用下裂解[20],其活性变化可反映鱼类非特异性免疫力的变化,即溶菌酶活性越高,鱼类的非特异性免疫功能越强。本试验结果表明,饲料中添加2类复合诱食剂可以提高吉富罗非鱼血清溶菌酶活性,其中添加复合诱食剂A效果更好,这可能与大蒜素有关。曹丹等[21]研究表明,饲料中添加100 mg/kg的大蒜素可极显著提高了暗纹东方鲀脾脏中溶菌酶活性。综合上述各项指标表示,饲料中添加2类复合诱食剂对吉富罗非鱼的肝脏具有一定的保护作用,对于吉富罗非鱼的非特异性免疫功能,含大蒜素的复合诱食剂A的作用效果更好。

3.5 不同类型的复合诱食剂对吉富罗非鱼肠道消化酶活性的影响

本试验结果表明,饲料中添加2类复合诱食剂可以提高吉富罗非鱼肠道消化酶活性。复合诱食剂A有提高肠道消化酶活性的作用,可能是因为与诱食剂配方中的大蒜素、DMPT和氧化三甲胺有关。刘英杰[22]研究表明,在鲤鱼生产中使用一定剂量的大蒜素可以提高鲤鱼的平均日增重,并能增强鲤鱼机体的超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性,降低丙二醛含量。同时,摄取大蒜素后可增强胃液分泌和胃肠蠕动,促进消化酶分泌[23]。有研究认为,DMPT分子上的(CH3)2S-基团可以为动物机体提供甲基,能被鱼类高效利用,提高鱼类消化腺体分泌酶类。也有报道,DMPT会刺激水产动物嗅觉神经[24],水产动物嗅觉神经受到DMPT强烈刺激后,不但增强了摄食欲望,而且肠组织黏膜分泌淀粉酶、蛋白酶[25]以及脂肪酶的功能也同时被激活[26],本试验结果与其相符合。此外,研究发现,氧化三甲胺可以维持鱼类肠道内环境稳态,对释放内源性消化酶有促进作用。而且有报道显示氧化三甲胺显著提高了南美白对虾消化腺中的蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性[27],此结论也与本试验结果相符合。
复合诱食剂B提高肠道消化酶活性的原因可能与其中的氨基酸和核苷酸有关。首先,有研究发现,氨基酸和香味素对黄鳝有较好的诱食性,提高黄鳝消化酶活性,从而促进黄鳝生长[4,28-29]。复合诱食剂B中的牛磺酸在鱼类肝脏中与胆酸、鹅脱氧胆酸等游离胆酸形成牛磺胆酸、牛磺鹅脱氧胆酸等结合胆汁酸,胆汁酸乳化脂肪[30],激活脂肪酶的活性,从而促进脂类物质消化吸收;同时,牛磺酸能提高饲料酸度,而且酸性条件下的淀粉酶活性较高[31],所以增强了肠道淀粉酶的活性[32]。周凡[33]研究发现,外源精氨酸能显著提高黑鲷幼鱼胃、前肠和中肠胃蛋白酶和胰蛋白酶活性,以及提高胃和前肠淀粉酶活性,进而提高了饲料的消化和吸收率[34],此结论与本试验结果相符。其次,肠道是一个具有高分泌性和高增殖能力的组织,核苷酸能加速肠细胞的生长和分化[35],并加速肠细胞的生长和分化,提高肠绒毛的高度,促进肠道消化腺体分泌消化酶。有试验证明,饲料中添加核苷酸可以显著提高小肠重量和胃蛋白酶活性。而且,肠道消化酶本质是蛋白质,所有蛋白质的生成都离不开核苷酸[36]。本试验中,复合诱食剂B对吉富罗非鱼肠道消化酶指标影响的试验结果也与复合诱食剂B对吉富罗非鱼生长指标影响的试验结果相统一,也属于一种因果关系,可能是因为复合诱食剂B提高了吉富罗非鱼肠道消化酶活性,提高了饲料的消化利用率,从而降低了饲料系数。

4 结论

① 饲料中添加0.2%复合诱食剂A可以提高吉富罗非鱼的平均日采食量、特定生长率和增重率,提高血清溶菌酶和超氧化物歧化酶活性,降低脏体比和血清甘油三酯含量。
② 饲料中添加0.2%复合诱食剂B可提高提高吉富罗非鱼的肠道消化酶活性。
③ 复合诱食剂A对吉富罗非鱼健康生长的作用效果优于复合诱食剂B。
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