RESEARCH PAPER

Effects of Mulberry Leaf Extract on Growth Performance, Antioxidant Capacity and Cecal Microbial Community of 817 Broilers

  • CHEN Jialin , 1 ,
  • CHENG Xu 1 ,
  • LI Yang 1 ,
  • YU Yonghong 2 ,
  • ZHANG Weiwei 2 ,
  • YUAN Huanqing 2 ,
  • WANG Xuejing , 3, * ,
  • WANG Xiaodan , 1, *
Expand
  • 1 College of Traditional Chinese Veterinary Medicine, Hebei Agricultural University, Baoding 071000, China
  • 2 Hebei Xiangda Hezhong Biotechnology Co., Ltd., Zhengding 050800, China
  • 3 Hebei Institute of Animal Husbandry and Veterinary Medicine, Baoding 071000, China
*WANG Xuejing, professor, E-mail: ;
WANG Xiaodan, professor, E-mail:

Received date: 2025-10-22

  Online published: 2026-05-14

Abstract

This experiment was aimed to investigate the effects of dietary supplementation with different levels of mulberry leaf extract (MLE) on growth performance, antioxidant capacity, intestinal morphology and cecal microbial community of 817 broilers. A total of 120 one-day-old healthy male 817 broilers with similar initial body weight [(39.45±1.35) g] were randomly allocated into 4 groups with 5 replicates per group and 6 birds per replicate. The control group (CON) was fed a basal diet, while the other three groups were fed the basal diet supplemented with 0.4%, 0.8% or 1.2% MLE, respectively. The experiment lasted for 42 days. The results showed as follows: 1) compared with the CON group, average daily feed intake (ADFI) of broilers in the 0.4% MLE and 0.8% MLE groups was significantly decreased (P<0.05), while dressing percentage was significantly increased (P<0.05); breast muscle percentage in the 0.8% MLE group was significantly increased (P<0.05), and liver index in the 0.4% MLE group was significantly decreased (P<0.05). 2) Compared with the CON group, serum malondialdehyde (MDA) content in the 0.4% MLE, 0.8% MLE and 1.2% MLE groups was significantly decreased (P<0.05); serum glutathione peroxidase (GSH-Px) activity in the 0.8% MLE group was significantly higher than that in the other three groups (P<0.05). 3) Compared with the CON group, jejunal villus height and villus height to crypt depth ratio (V/C) in the 0.4% MLE group were significantly increased (P<0.05); jejunal crypt depth in the 0.8% MLE and 1.2% MLE groups was increased. 4) Cecal microbial community analysis showed that, at the phylum level, Firmicutes and Bacteroidota were the dominant phyla in the cecum of broilers. Compared with the CON group, the relative abundance of Firmicutes was increased in the MLE groups. At the genus level, the relative abundances of Subdoligranulum and Parabacteroides in the MLE groups were increased. In conclusion, MLE can improve the growth performance of 817 broilers by improving jejunal morphology, enhancing antioxidant capacity and modulating cecal microbial community structure, with the 0.8% being the optimal supplementation level.

Cite this article

CHEN Jialin , CHENG Xu , LI Yang , YU Yonghong , ZHANG Weiwei , YUAN Huanqing , WANG Xuejing , WANG Xiaodan . Effects of Mulberry Leaf Extract on Growth Performance, Antioxidant Capacity and Cecal Microbial Community of 817 Broilers[J]. Chinese Journal of Animal Nutrition, 2026 , 38(5) : 3374 -3386 . DOI: 10.12418/CJAN2026.270

在畜禽养殖中,添加剂被广泛用于改善生产性能和疾病防治,但其不合理的使用所带来的药物残留、毒副作用等问题,不仅危害动物健康,也对消费者构成了潜在安全风险,甚至会引发公共卫生和社会问题,典型案例如“瘦肉精”事件及抗生素滥用等[1]。随着我国畜牧业“减抗替抗”政策的实施,开发天然、安全且高效的功能性饲料添加剂已成为当前行业研究重点。
桑叶(Morus alba L.)作为药食同源植物[2],据《本草纲目》描述,桑叶性寒味甘苦,并称其为“清热解毒、利水消肿之药”。通过适宜的提取工艺可以有效浓缩桑叶中的活性成分,提高其药用价值和功效,促进其营养成分的吸收利用,进而提高其生物利用率[3]。桑叶提取物(mulberry leaf extract,MLE)是以桑叶为原料,经多功能提取罐浸泡、煎煮、二次煎煮浓缩及喷雾干燥等工艺后,提取其有效成分而得到的制品。同时,MLE经过提取工艺处理,有助于保持活性成分的稳定性,使其更加耐存放,延长保存期限[4]。这些优点使MLE在畜禽养殖行业具有更广泛的应用前景。现代药学研究发现,MLE中富含多种活性成分,如黄酮、多糖、生物碱等,具有抗炎、抗菌、抗黑色素生成、抗糖尿病、抗肥胖和抗高血脂等功效[5]。王诗睿等[6]研究表明,MLE中的1-脱氧野尻霉素可以抑制α-糖苷酶,保护胰岛β细胞,促进糖脂代谢,维持血糖平衡,实现降糖的功效。在动物试验中,韩辰淼等[7]研究发现,饲粮中添加桑叶多糖可以显著改善鸡肠道微生物群落结构。
817肉鸡是国内自主培育的小型白羽肉鸡品种,因契合市场特定需求而具备较强市场竞争力,以独特的“小型白羽肉鸡”定位,现已成为继白羽肉鸡、黄羽肉鸡之后国内第三大主导肉鸡类型,为肉鸡产业发展作出重要贡献[8]。目前,MLE的应用效果研究主要集中在水产动物和蛋鸡方面[9-11],其在817肉鸡上的研究较为匮乏。因此,本试验旨在以817肉鸡为试验对象,探讨不同添加水平MLE对其生长性能、抗氧化能力、肠道形态及盲肠微生物群落的影响。

1 材料与方法

1.1 试验材料与试验动物

本试验所用桑叶提取物中,主要活性成分桑叶多糖、总类黄酮和总酚的含量分别为29.12%、2.00%和2.68%,常规营养成分粗脂肪、粗蛋白质和粗灰分的含量分别为2.36%、12.36%和24.71%。817肉鸡购自于河北玖兴农牧发展有限公司。

1.2 试验设计

本试验通过河北农业大学实验动物伦理委员会批准(批准号:2024006)。
本试验采用单因子完全随机设计,选取120只初始体重[(39.45±1.35) g]相近的1日龄健康公雏鸡,随机分为4个组,每组5个重复,每个重复6只。对照组(CON组)饲喂基础饲粮,3个试验组分别在基础饲粮中添加0.4%、0.8%、1.2%的MLE。试验期42 d。

1.3 试验饲粮与饲养管理

饲养试验在河北省畜牧兽医研究所试验场进行。
基础饲粮为参照《中国鸡营养需要量》(NY/T 33—2004)配制的颗粒料,其组成及营养水平见表1。饲粮的粗蛋白质(GB/T 6432—2018)、氨基酸(GB/T 18246—2019)、钙(GB/T 6436—2018)和总磷含量(GB/T 6437—2018)分别参照对应的国家标准进行测定,代谢能参照《中国饲料成分及营养价值表(2021年第32版)》进行计算。
表1 基础饲粮组成及营养水平(风干基础)

Table 1 Composition and nutrient levels of basal diets (air-dry basis)%

项目
Items
含量 Content
1~21日龄 1 to 21 days of age 22~42日龄 22 to 42 days of age
原料 Ingredients
玉米 Corn 54.54 56.93
豆粕 Soybean meal 30.20 23.30
面粉 Flour 5.00 7.00
玉米蛋白 Corn protein 1.90 1.00
花生粕 Peanut meal 1.50 2.00
富肽宝 Peptide-rich treasure 1.50 2.00
石粉 Limestone 0.93 1.00
磷酸氢钙Ⅰ型 Calcium hydrogen phosphate type Ⅰ 1.40 0.95
大豆油 Soybean oil 0.80 3.50
液体氯化胆碱 Liquid choline chloride 0.12 0.10
L-赖氨酸硫酸盐 L-lysine sulphate 0.61 0.72
预混料 Premix1) 1.50 1.50
合计 Total 100.00 100.00
营养水平 Nutrient levels2)
代谢能 ME/(MJ/kg) 12.13 13.10
粗蛋白质 CP 22.50 20.00
赖氨酸 Lys 1.40 1.30
蛋氨酸+胱氨酸 Met+Cys 1.10 0.99
苏氨酸 Thr 0.96 0.89
精氨酸 Arg 1.56 1.39
缬氨酸 Val 1.00 0.97
色氨酸 Trp 0.22 0.21
钙 Ca 0.85 0.75
总磷 TP 0.52 0.43

1)预混料为每千克饲粮提供 The premix provided the following per kg of diets:VA 12 000 IU,VB1 3 mg,VB2 9 mg,VB6 4.5 mg,VB12 0.03 mg,VD3 4 500 IU,VE 36 mg,VK3 6 mg,生物素 biotin 0.18 mg,D-泛酸钙 calcium D-pantothenate 13.5 mg,叶酸 folic acid 1.8 mg,烟酸 nicotinic acid 45 mg,Fe (as ferrous sulfate) 110 mg,Cu (as copper sulfate) 16 mg,Mn (as manganese sulfate) 120 mg,Zn (as zinc sulfate) 110 mg,Se (as sodium selenite) 0.35 mg,I (as potassium iodide) 1.5 mg。

2)代谢能为计算值,其余均为实测值。ME was a calculated value, while the others were measured values.

试验期间饲养管理采用笼养与平养相结合的模式,并提供适宜的光照周期,1~7日龄采取24 h光照,8~42日龄的光照时间逐渐减少到12~16 h。1~7日龄环境温度保持在35 ℃,后面每2天降低1 ℃,直至逐渐降低到25 ℃,相对湿度维持在50%~70%,所有试验动物自由采食与饮水。

1.4 指标测定

1.4.1 生长性能

试验开始时,记录1日龄雏鸡的初始体重;整个饲养期,每日观察其健康状态并记录采食量;试验结束时(42日龄),禁食12 h后,记录鸡只的末体重。根据以上数据计算出平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)以及料重比(F/G)。

ADG(g/d)=(末体重-初始体重)/试验期;

ADFI(g/d)=总耗料量/试验期;

F/G=ADFI/ADG。

1.4.2 屠宰性能

试验结束时,每个重复随机选取2只鸡测量末体重并处死,依据《家禽生产性能名词术语和度量统计方法》(NY/T 823—2020)的方法进行测定与计算屠宰性能指标,包括屠宰率、半净膛率、全净膛率、胸肌率、腿肌率及腹脂率。

1.4.3 免疫器官指数

试验结束时,取每个重复处死的2只鸡的免疫器官,包括脾脏、肝脏、胸腺和法氏囊,去除器官多余的血水和脂肪后称重,计算免疫器官指数。

免疫器官指数(%)=(免疫器官重量/末体重)×100。

1.4.4 血清抗氧化指标

试验结束时,每个试验组选取8只状态良好的鸡只进行翅静脉采集,采集血液样品5 mL,置于冰上静置20 min。随后以3 000×g离心力离心10 min,移取上清液至1.5 mL试管内,并于-20 ℃条件下冷冻储存,以供后续分析。待测指标包括总抗氧化能力(T-AOC)与过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)含量。所有指标均使用南京建成生物工程研究所提供的试剂盒进行检测。

1.4.5 空肠组织形态

试验结束时,采集每个重复处死的2只鸡的空肠中段样本,并立即使用10%福尔马林溶液进行固定,以备后续分析。制备空肠组织切片,经过苏木精-伊红(HE)染色后,通过尼康光学显微镜(Nikon Eclipse CI,日本)进行观察。随后利用ImageJ 1.6.0图像分析软件测定空肠的绒毛高度与隐窝深度,并计算绒隐比。

1.4.6 盲肠肠道微生物群落基因测序

试验结束时,取每个重复处死的2只鸡,切开腹腔取出盲肠并收集1.5 mL的肠道内容物。迅速转移到经过灭菌处理的冷冻管中,放入液氮中进行冷冻,并转移至-80 ℃超低温冰箱保存,以供后续分析。采用Illumina Hiseq 2500高通量测序技术对盲肠微生物16S rDNA基因全长进行测序,该测序工作通过与诺禾致源生物信息科技有限公司合作完成。

1.5 数据统计与分析

试验数据通过SPSS 27.0软件进行整理与统计分析,在满足方差齐性检验的前提下,采用单因素方差分析(one-way ANOVA)进行组间比较,若方差分析结果显著(P<0.05),则进一步使用Tukey’s HSD进行多重比较检验。数据以平均值±标准差(mean±SD)表示,P>0.05为差异不显著,P<0.05为差异显著。

2 结果

2.1 MLE对肉鸡生长性能的影响

表2所示,各组肉鸡的末体重和ADG差异不显著(P>0.05);与CON组相比,0.4%MLE和0.8%MLE组肉鸡的ADFI显著降低(P<0.05),0.8%MLE组F/G显著降低(P<0.05)。
表2 MLE对肉鸡生长性能的影响

Table 2 Effects of MLE on growth performance of broilers

项目
Items
组别 Groups P
P-value
CON 0.4%MLE 0.8%MLE 1.2%MLE
末体重 FBW/g 1 249.51±120.61 1 226.39±88.40 1 218.37±98.50 1 254.51±90.51 0.610
平均日增重 ADG/(g/d) 28.82±2.88 28.26±2.09 28.07±2.35 28.93±2.15 0.603
平均日采食量 ADFI/(g/d) 49.81±3.56a 43.27±2.77bc 41.18±1.52c 46.71±3.03ab <0.001
料重比 F/G 1.73±0.17a 1.53±0.15ab 1.48±0.14b 1.61±0.07ab 0.042

同行数据间无字母或相同字母表示差异不显著(P>0.05),不同小写字母表示差异显著(P<0.05)。下表同。

In the same row, values with no letter or the same letter superscripts mean no significant difference (P>0.05), while with different lowercase letter superscripts mean significant difference (P<0.05). The same as below.

2.2 MLE对肉鸡屠宰性能的影响

表3所示,与CON组相比,0.4%MLE和0.8%MLE组肉鸡的屠宰率显著提高(P<0.05),0.8%MLE组胸肌率显著提高(P<0.05),0.4%MLE和0.8%MLE组肉鸡的腹脂率显著降低(P<0.05);各组肉鸡的半净膛率、全净膛率和腿肌率差异不显著(P>0.05)。
表3 MLE对肉鸡屠宰性能的影响

Table 3 Effects of MLE on slaughter performance of broilers%

项目
Items
组别 Groups P
P-value
CON 0.4%MLE 0.8%MLE 1.2%MLE
屠宰率 Dressing percentage 85.02±3.09b 90.00±3.60a 89.92±3.46a 88.33±2.75ab 0.005
半净膛率 Semi-eviscerated yield 81.06±5.55 83.42±3.58 82.92±4.06 83.28±4.08 0.604
全净膛率 Eviscerated yield 67.91±4.55 70.28±3.19 68.86±5.29 69.69±3.69 0.629
胸肌率 Breast muscle rate 20.19±2.02ab 19.96±1.70ab 21.37±1.39a 18.51±1.19b 0.004
腿肌率 Leg muscle rate 19.71±1.31 19.67±1.52 19.55±0.61 19.00±1.49 0.610
腹脂率 Abdominal fat rate 1.43±0.15a 1.21±0.13b 1.25±0.10b 1.42±0.18a 0.007

2.3 MLE对肉鸡免疫器官指数的影响

表4所示,与CON组相比,0.4%MLE组的肝脏指数显著降低(P<0.05);各组肉鸡的胸腺指数、脾脏指数和法氏囊指数差异不显著(P>0.05)。
表4 MLE对肉鸡免疫器官指数的影响

Table 4 Effects of MLE on immune organ indices of broilers%

项目
Items
组别 Groups P
P-value
CON 0.4%MLE 0.8%MLE 1.2%MLE
胸腺指数 Thymus index 0.54±0.07 0.57±0.09 0.57±0.09 0.54±0.05 0.677
脾脏指数 Spleen index 4.01±1.34 3.02±0.67 3.22±0.90 3.71±0.78 0.101
法氏囊指数 Bursa of Fabricius index 4.92±1.26 5.31±1.45 4.46±1.25 3.69±1.15 0.092
肝脏指数 Liver index 32.13±2.50a 27.06±1.74b 30.55±3.17a 31.21±2.50a 0.002

2.4 MLE对肉鸡血清抗氧化指标的影响

表5所示,与CON组相比,0.4%MLE和1.2%MLE组的血清CAT活性均显著降低(P<0.05),0.8%MLE组无显著差异(P>0.05);0.8%MLE组的血清GSH-Px活性显著高于其余3组(P<0.05);CON组的血清MDA含量显著高于其余3组(P<0.05),0.4%MLE组的血清MDA含量最低;各组的血清SOD活性和T-AOC无显著差异(P>0.05)。
表5 MLE对肉鸡血清抗氧化指标的影响

Table 5 Effects of MLE on serum antioxidant indices of broilers

项目
Items
组别 Groups P
P-value
CON 0.4%MLE 0.8%MLE 1.2%MLE
过氧化氢酶 CAT/(U/mL) 6.92±1.27a 3.15±1.59b 6.01±2.31a 3.49±1.74b <0.001
超氧化物歧化酶 SOD/(U/mL) 62.76±10.85 73.23±4.05 62.76±11.07 71.37±9.55 0.056
总抗氧化能力 T-AOC/(μmol/L) 0.45±0.15 0.53±0.13 0.36±0.11 0.35±0.14 0.062
谷胱甘肽过氧化物酶
GSH-Px/(U/mL)
854.67±60.26b 804.00±54.49b 1 018.67±27.24a 845.33±87.10b <0.001
丙二醛 MDA/(nmol/mL) 21.70±2.78a 8.02±2.20c 15.00±1.90b 11.34±3.92bc <0.001

2.5 MLE对肉鸡空肠形态的影响

在200倍光镜下观察,各组空肠组织结构清晰,黏膜层绒毛排列整齐,呈典型指状突起,绒隐比大致正常(图1)。经进一步分析软件测量,由表6可知,与CON组相比,0.4%MLE组的空肠绒毛高度和绒隐比显著提高(P<0.05),1.2%MLE组的空肠绒毛高度和绒隐比显著降低(P<0.05),0.8%MLE和1.2%MLE组空肠隐窝深度显著提高(P<0.05)。
图1 各组肉鸡空肠组织切片HE染色图

Fig.1 HE staining images of jejunal tissue sections of broilers in each group (200×)

表6 MLE对肉鸡空肠形态的影响

Table 6 Effects of MLE on jejunal morphology of broilers

项目
Items
组别 Groups P
P-value
CON 0.4%MLE 0.8%MLE 1.2%MLE
绒毛高度 Villus height/μm 986.95±156.04b 1 270.44±119.81a 1 145.13±104.57ab 724.69±97.51c <0.001
隐窝深度 Crypt depth/μm 190.17±25.86b 189.60±38.82b 278.51±32.36a 241.56±34.12a <0.001
绒隐比 V/C 5.26±1.01b 6.90±1.18a 4.13±0.33bc 3.06±0.63c <0.001

2.6 MLE对肉鸡盲肠微生物群落结构与功能的影响

2.6.1 基于扩增子序列变体(ASVs)的微生物组成特征

根据上述试验结果,选取CON组与试验结果最佳的0.8%MLE组进行16S rDNA测序,以下结果中的MLE组指0.8%MLE组。如图2所示,等级丰度曲线直观反映了物种丰富度(图2-A);物种累积箱线图趋于平缓,表明样本量充足,数据可靠(图2-B);韦恩图中,CON组和MLE组共有441个ASVs,其中CON组特有249个ASVs,MLE组特有317个ASVs(图2-C)。
图2 基于扩增子序列变体的微生物组成特征

A:等级丰度曲线 rank abundance curve;B:物种累积箱型图 species accumulation boxplot;C:韦恩图 Venn diagram。

Fig.2 Characteristics of microbial composition based on ASVs

2.6.2 微生物群落多样性分析

图3-A所示,经α多样性分析,CON组与MLE组的Chao1、Shannon和Simpson指数均无显著差异(P>0.05)。如图3-B所示,根据主坐标分析(PCoA)显示,CON组和MLE组样本分布较远,差异较大,其中第1主成分(PC1)和第2主成分(PC2)分别解释了盲肠微生物群落差异的20.68%和17.70%。
图3 微生物群落多样性分析

A:α多样性分析 α diversity analysis;B:主坐标分析图 PCoA plot。

Fig.3 Analysis of microbial community diversity

2.6.3 微生物群落物种相对丰度分析

图4-A所示,门水平上,CON组和MLE组的优势菌门均为厚壁菌门(Firmicutes)和拟杆菌门(Bacteroidota),所占比例合计均90%以上。其中,MLE组的厚壁菌门和拟杆菌门所占比例分别为66%和32%,CON组厚壁菌门和拟杆菌门所占比例分别为60%和33%。与CON组相比,MLE组的厚壁菌门相对丰度提高,而拟杆菌门相对丰度差异不大,放线菌门(Actinobacteriota)和变形菌门(Proteobacteria)相对丰度降低。
图4 微生物群落物种相对丰度分析

A:门水平 phylum level;B:属水平 genus level。

Firmicutes:厚壁菌门;Bacteroidota:拟杆菌门;Actinobacteriota:放线菌门;Proteobacteria:变形菌门;Desulfobacterota:脱硫杆菌门;Cyanobacteria:蓝细菌门;Acidobacteriota:酸杆菌门;Others:其他;Bacteroides:拟杆菌属;Subdoligranulum:罕见小球菌属;Bifidobacterium:双歧杆菌属;Barnesiella:巴恩斯氏菌属;Parabacteroides:副拟杆菌属;[Ruminococcus]_torques_group:瘤胃球菌扭链群;Alistipes:另枝菌属;Streptococcus:链球菌属;Faecalibacterium:粪杆菌属;Blautia:布劳特氏菌属。

Fig.4 Analysis of relative abundance of species in microbial communities

图4-B所示,属水平上,CON组和MLE组中相对丰度排名前10的优势菌属中,拟杆菌属(Bacteroides)、罕见小球菌属(Subdoligranulum)、双歧杆菌属(Bifidobacterium)和巴恩斯氏菌属(Barnesiella)所占比例较大。与CON组相比,MLE组的罕见小球菌属和副拟杆菌属(Parabacteroides)的相对丰度提高。

2.6.4 微生物群落线性判别分析效应量(LEfSe)分析

经盲肠微生物群落LEfSe分析,线性判别分析(LDA)得分阈值设为2.0,如图5所示,CON组中具有丰度差异的微生物类群是粪杆菌属(g_Faecalibacterium)和XIII科AD3011组(g_Family_XIII_AD3011_group),MLE组中具有丰度差异的微生物类群包括某种埃布菌Marseille_P3202(s_Eubacterium_sp_Marseille_P3202)、厌氧截形菌属(g_Anaerotruncus)和梭菌目细菌CHKC006(s_Clostridiales_bacterium_CHKCl006)。
图5 微生物群落线性判别分析效应量分析

s_Eubacterium_sp_Marseille_P3202:某种埃布菌Marseille_P3202;g_Anaerotruncus:厌氧截形菌属;s_Clostridiales_bacterium_CHKC006:梭菌目细菌CHKC006;g_Family_XIII_AD3011_group:XIII科AD3011组;g_Faecalibacterium:粪杆菌属。

Fig.5 LEfSe analysis of microbial communities

2.6.5 微生物群落功能预测分析

为进一步探究微生物群落的功能潜能,利用Tax4Fun进行功能预测分析,并比较CON组与MLE组之间的差异。结果如图6显示,所有样本的微生物功能主要富集于5条代谢通路,其中,与CON组相比,MLE组的甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢(glycine, serine and threonine metabolism)、柠檬酸循环(citrate cycle)、精氨酸和脯氨酸代谢(arginine and proline metabolism)、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸降解(valine, leucine and isoleucine degradation)这4条代谢通路显著富集(P<0.05),磷酸转移酶系统(phosphotransferase system)代谢通路则显著降低(P<0.05)。
图6 微生物群落功能预测分析

Fig.6 Functional prediction analysis of microbial communities

3 讨论

3.1 MLE对肉鸡生长性能的影响

在畜禽养殖中,生长性能是综合反映动物生命活动状态与内在生理效率的重要生物学指标。本试验中,与CON组相比,饲粮中添加MLE肉鸡的末体重没有显著差异,0.4%MLE和0.8%MLE组肉鸡的ADFI显著降低。这可能是因为桑叶除了含有大量的活性成分之外,还含有如单宁、植酸等抗营养因子[12],其中单宁具有收敛性,会产生苦涩味[13],导致动物的采食量降低。但在末体重和ADG没有显著差异的情况下,0.8%MLE组ADFI和F/G均出现显著降低,说明MLE提高了饲料转化率,这有助于提高生产效益。根据张业怀等[14]
的研究结果,饲粮中添加桑叶等复合粉剂能有效提高肉鸡的ADG,显著降低F/G,这表明该复合粉剂对生长性能有促进作用。本试验的结果与此结论一致,进一步印证了MLE在改善家禽生长性能方面的积极效果。

3.2 MLE对肉鸡屠宰性能的影响

屠宰性能作为评价肉鸡经济价值的关键指标之一,能够直观地反映出机体对营养物质的吸收与利用状况。研究表明,桑叶已被证明可以提高动物的营养物质消化率[15],其作用机制可能与桑叶中富含的类黄酮有关,该类物质通过调节关键的脂质和碳水化合物代谢途径发挥出相似的合成代谢的功能,并且促进肠道中有益微生物的增殖[16],对动物的生产性能产生有益的影响。本试验中,与CON组相比,0.8%MLE组肉鸡的屠宰率和胸肌率显著提高,半净膛率、全净膛率、腿肌率没有显著差异。同时,与王淦[17]添加一定比例的桑叶黄酮可显著提高肉兔屠宰性能的研究结果相似,本试验结果表明饲粮中添加MLE可在一定程度上提高817肉鸡的屠宰性能。本试验中,与CON组相比,0.4%MLE和0.8%MLE组的肉鸡腹脂率显著降低,这可能是由于MLE可通过腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)信号通路调节脂质代谢相关基因的mRNA表达[18],减少动物脂肪沉积,从而达到降低腹脂率的效果。以上结果说明,MLE具有减少腹部脂肪沉积,提高屠宰性能的作用。

3.3 MLE对肉鸡免疫器官指数的影响

胸腺、脾脏、法氏囊以及肝脏是机体免疫细胞生长的重要场所,在家禽的免疫系统中扮演着极其重要的角色[19]。免疫器官的健康发育是机体维持正常免疫与抗感染能力的重要基础,动物机体细胞的生长发育及分裂增殖与免疫器官重量呈现正相关[20]。杨秀娟等[21]研究表明,饲粮中添加MLE显著降低了科宝肉鸡肝脏指数,提高了法氏囊指数和胸腺指数。本试验中,饲粮中添加不同水平的MLE对胸腺、脾脏、法氏囊指数均无显著影响,而与CON组相比,0.4%MLE组肉鸡的肝脏指数显著降低。杨雨晴等[22]研究也表明,桑叶饲喂组肝脏指数显著下降,与本试验结果相似。推测肝脏指数降低可能与MLE提高了家禽的脂类代谢有关,研究表明饲粮中添加MLE显著上调了家禽肝脏AMPK、脂肪甘油三酯脂酶(ATGL)和肉毒碱棕榈酰基转移酶1A(CPT1A)等脂质氧化基因的mRNA表达,并显著下调了固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)和3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGR)等脂质合成基因的mRNA表达[18]。此外,AMPK-ACC-CPT1A信号通路是调控脂质代谢的核心路径,MLE有助于改善由饮食诱导的肥胖与肝脏脂肪变性,最终促使肝脏指数下降[23]

3.4 MLE对肉鸡血清抗氧化指标的影响

抗氧化防御系统的激活是一个复杂的生物过程,涉及多个组织和信号通路。桑叶及其活性成分,包括类黄酮、生物碱、酚酸和多糖,具有潜在的提高抗氧化防御系统作用[24]。本试验中,饲粮中添加不同水平的MLE均降低了血清MDA含量;与CON组相比,0.8%MLE组的血清GSH-Px活性显著提高。MDA是衡量机体氧化应激与脂质过氧化程度的一个关键指标,它主要来源于细胞内n-6多不饱和脂肪酸发生的脂质过氧化反应[25]。已有研究揭示,桑叶中的新型异戊二烯黄酮类成分能显著上调肉鸡肝脏中核因子E2相关因子2(Nrf2)及其下游抗氧化基因CATSODGSH-Px的mRNA表达水平[26]。Zhang等[27]研究表明,MLE能显著提高蛋鸡血清SOD和GSH-Px活性,并促使抗氧化酶降低机体MDA含量。以上结果说明,MLE可以提高肉鸡的抗氧化能力。

3.5 MLE对肉鸡肠道形态的影响

肠道作为机体与外界环境微生物接触频繁的重要器官,既是病原体和毒素入侵的主要通道,同时也是机体抵御此类致病因子侵袭的重要屏障。肠道维持自身结构完整与形态正常的能力,对维持肠道正常生理功能具有重要意义[28]。Xing等[29]研究表明,MLE能提高空肠绒隐比,并增加肉鸡绒毛高度。此外,有研究报告,与对照组相比,饲粮中添加500和1 000 g/t的MLE育肥猪回肠绒毛高度及绒隐比均显著提高[30]。本试验中,与CON组相比,0.4%MLE组的空肠绒毛高度和绒隐比显著提高,隐窝深度无显著变化。饲粮中添加0.4%MLE促进了肉鸡空肠绒毛上皮细胞生长,增大了其与营养物质的接触面积,提高了空肠营养物质吸收,从而维持肠道健康。

3.6 MLE对肉鸡盲肠微生物群落的影响

肠道微生物群落的稳定对肉鸡健康至关重要,肉鸡盲肠内庞大的微生物群落不仅能有效保障营养物质的消化吸收效率,更是维持机体健康的重要基础[31]。根据本试验上述结果,选择0.8%MLE组开展了肠道微生物群落分析试验。进一步研究可围绕0.8%这一有效剂量,在其邻近区间(如0.6%~1.0%)设置更密集的梯度,以通过回归分析进行最终精准定位。在16S rDNA测序结果中,韦恩图反映了组间共有、特有的ASVs。在本试验中,饲粮中添加MLE增加了ASVs数量,说明MLE可能提高了肉鸡盲肠微生物群落的丰富性。本试验采用Chao1、Shannon和Simpson指数来评估微生物群落多样性。Chao1指数反映物种丰富度,Shannon与Simpson指数则同时衡量丰富度与均匀度。结果显示,各组间上述指数均无显著差异。在物种相对丰度分析结果中,门水平上,817肉鸡盲肠主要优势菌门包括厚壁菌门和拟杆菌门等。厚壁菌门可以通过产生糖苷水解酶,促进肠道对能量和蛋白质的合成[32]。已有研究表明,饲粮中添加桑叶粉鸡肠道中拟杆菌、普雷沃氏菌和巨单胞菌的相对丰度增加[33]。同时,本试验中,与CON组相比,MLE组变形菌门相对丰度降低。在变形菌门中,存在诸如大肠杆菌和沙门氏菌等常见的机会性病原体,这些菌属能够诱发宿主的炎症反应[34]。本试验中,属水平上,肉鸡盲肠微生物以拟杆菌属、罕见小球菌属、双歧杆菌属以及巴恩斯氏菌属为主。其中双歧杆菌属是肠道微生物群落的优势定植菌之一,被公认为对宿主健康有益,它能参与氨基酸代谢及碳水化合物降解[35]。本试验中,与CON组相比,MLE组的罕见小球菌属、副拟杆菌属的相对丰度提高。Van Hul等[36]研究发现粪便样本中罕见小球菌属之间的联系,认为其丰度谱与粪便微生物群落丰富度、高密度脂蛋白胆固醇及脂联素水平呈正相关,同时微生物群落丰富被认为是肠道健康和稳定的标志。关于Tax4Fun功能预测结果表明,与CON组相比,MLE组显著富集于甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢通路以及精氨酸和脯氨酸代谢通路,这些通路相关氨基酸不仅是蛋白质合成的重要底物,也是肠黏膜的主要能量来源,是构成肠道屏障关键蛋白质的重要组分,可参与调节免疫反应,并缓解氧化应激[37]。柠檬酸循环代谢通路丰度增加,直接反映了微生物群落整体能量代谢水平和呼吸作用的增强。上述结果表明,饲粮添加MLE可通过改善肉鸡盲肠微生物群落结构、提高微生物群落丰富度,从而维持肠道健康。

4 结论

综上所述,在本试验条件下,饲粮中添加MLE可显著改善817肉鸡的生长性能、屠宰性能与抗氧化能力,改善肉鸡空肠的肠道形态并调节盲肠微生物群落结构,其中以0.8%添加水平效果最佳。
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