1 材料与方法
1.1 试验材料
1.2 试验设计与饲养管理
表1 基础饲粮组成及营养水平(干物质基础)Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet (DM basis) |
| 项目 Items | 含量 Content |
|---|---|
| 原料 Ingredients | |
| 鸡肉粉 Chicken meal | 40.00 |
| 大米 Rice | 40.00 |
| 鸭油 Duck fat | 12.00 |
| 预混料 Premix1) | 3.00 |
| 啤酒酵母粉 Brewer’s yeast powder | 3.00 |
| 鱼油 Fish oil | 2.00 |
| 合计 Total | 100.00 |
| 营养水平 Nutrient levels2) | |
| 粗蛋白质 CP | 29.70 |
| 粗脂肪 EE | 18.05 |
| 粗灰分 Ash | 10.30 |
| 粗纤维 CF | 1.32 |
| 钙 Ca | 0.98 |
| 总磷 TP | 1.35 |
| 水溶性氯化物 Water-soluble chloride | 1.04 |
| 牛磺酸 Taurine | 0.67 |
| 蛋氨酸 Met | 0.90 |
| 代谢能 ME/(MJ/kg) | 21.34 |
1)预混料为每千克饲粮提供 The premix provided the following per kg of the diet:VA 6 668 IU,VB1 5.6 mg,VB2 4 mg,VB6 4 mg,VB12 0.02 mg,VD3 280 IU,烟酸 niacin 60 mg,叶酸 folic acid 0.8 mg,泛酸 pantothenic acid 5.75 mg,D-生物素 D-biotin 0.07 mg,生育酚乙酸酯 tocopheryl acetate 40 IU,硫酸锌 zinc sulfate 75 mg,硫酸铜 copper sulfate 15 mg,硫酸亚铁 ferrous sulfate 80 mg,硫酸锰 manganese sulfate 7.6 mg,亚硒酸钠 sodium selenite 0.3 mg,碘酸钙 calcium iodate 1.8 mg。 2)代谢能为计算值,其余营养水平为实测值。DE was a calculated value, while the others were measured values. |
1.3 样品采集
1.4 检测指标与方法
1.4.1 饲粮营养水平
1.4.2 平均日增重(ADG)
ADG/(g/d)=(末重-初重)/试验天数。
1.4.3 粪便评分
表2 粪便评分标准Table 2 Fecal scoring criteria |
| 评分 Scores | 粪便性状 Fecal characteristics |
|---|---|
| 1 | 完全液态,没有任何成形的迹象 |
| 2 | 质地柔软,处于不成形的状态 |
| 3 | 柔软湿润的条状,不过只是部分区域有成形的趋势 |
| 4 | 已经完全成形,整体略显干结但软硬程度比较适中 |
| 5 | 坚硬的状态,通常呈现干片状或类似小石头的形态,且完全成形 |
1.4.4 肠道屏障指标
1.4.5 血清免疫指标
1.4.6 粪便微生物16S rRNA扩增子测序
1.5 数据统计与分析
2 结果与分析
2.1 丝兰提取物对猫ADG的影响
表3 丝兰提取物对猫ADG的影响Table 3 Effects of Yucca schidigera extract on ADG of catsg/d |
| 项目 Items | 对照组 Control group | 试验组 Experimental group | P值 P-value |
|---|---|---|---|
| 第1~21天 Day 1 to day 21 | -6.39±3.35 | 0.11±3.27 | 0.819 |
| 第22~42天 Day 22 to day 42 | 0.29±2.01 | 4.36±3.14 | 0.105 |
2.2 丝兰提取物对猫粪便评分的影响
表4 丝兰提取物对猫粪便评分中各分值占比的影响Table 4 Effects of Yucca schidigera extract on proportion of each score in fecal scoring of cats% |
| 分值 Scores | 对照组 Control group | 试验组 Experimental group |
|---|---|---|
| 第1~21天 Day 1 to day 21 | ||
| <2 | 0.53 | 0.61 |
| 2~3 | 33.16 | 35.37 |
| >3 | 66.31 | 64.02 |
| 第22~42天 Day 22 to day 42 | ||
| <2 | 9.60 | 4.30 |
| 2~3 | 50.50 | 45.16 |
| >3 | 39.90 | 50.54 |
2.3 丝兰提取物对猫肠道屏障指标的影响
表5 丝兰提取物对猫肠道屏障指标的影响Table 5 Effects of Yucca schidigera extract on intestinal barrier indices of cats |
| 项目 Items | 对照组 Control group | 试验组 Experimental group | P值 P-value |
|---|---|---|---|
| 第21天 Day 21 | |||
| 血清 Serum | |||
| 脂多糖 LPS/(ng/L) | 139.21±11.13 | 129.07±10.09 | 0.047 |
| 二胺氧化酶 DAO/(pg/mL) | 71.61±4.87 | 65.45±3.60 | 0.005 |
| 连蛋白 Zonulin/(ng/mL) | 658.00±60.58 | 689.64±54.99 | 0.263 |
| 肠型脂肪酸结合蛋白 I-FABP/(μg/L) | 6.29±0.60 | 6.06±1.24 | 0.602 |
| 粪便 Feces | |||
| 钙卫蛋白 Calprotectin/(pg/g) | 4 583.74±308.58 | 3 519.84±263.17 | 0.017 |
| α1-抗胰蛋白酶 α1-AT/(ng/g) | 308.39±29.00 | 239.95±26.75 | 0.100 |
| 第42天 Day 42 | |||
| 血清 Serum | |||
| 脂多糖 LPS/(ng/L) | 130.73±24.63 | 127.81±22.19 | 0.790 |
| 二胺氧化酶 DAO/(pg/mL) | 96.44±19.77 | 89.79±18.49 | 0.447 |
| 连蛋白 Zonulin/(ng/mL) | 557.77±42.61 | 600.29±60.41 | 0.294 |
| 肠型脂肪酸结合蛋白 I-FABP/(μg/L) | 5.23±0.67 | 4.59±0.48 | 0.024 |
| 粪便 Feces | |||
| 钙卫蛋白 Calprotectin/(pg/g) | 4 364.44±633.68 | 3 896.63±483.77 | 0.565 |
| α1-抗胰蛋白酶 α1-AT/(ng/g) | 224.53±22.13 | 221.46±19.67 | 0.919 |
2.4 丝兰提取物对猫血清免疫指标的影响
表6 丝兰提取物对猫血清免疫指标的影响Table 6 Effects of Yucca schidigera extract on serum immune indices of catsng/L |
| 项目 Items | 对照组 Control group | 试验组 Experimental group | P值 P-value |
|---|---|---|---|
| 第21天 Day 21 | |||
| 白细胞介素-6 IL-6 | 160.28±24.14 | 143.68±19.63 | 0.109 |
| 白细胞介素-1β IL-1β | 40.99±4.21 | 32.53±2.92 | <0.001 |
| 肿瘤坏死因子-α TNF-α | 105.2±23.72 | 103.89±24.60 | 0.905 |
| 第42天 Day 42 | |||
| 白细胞介素-6 IL-6 | 139.75±14.18 | 146.81±10.00 | 0.252 |
| 白细胞介素-1β IL-1β | 43.05±8.21 | 38.16±4.65 | 0.118 |
| 肿瘤坏死因子-α TNF-α | 86.58±21.49 | 74.32±14.79 | 0.157 |
2.5 丝兰提取物对猫粪便微生物区系的影响
2.5.1 粪便微生物α多样性分析
表7 丝兰提取物对猫粪便微生物α多样性的影响Table 7 Effects of Yucca schidigera extract on α-diversity of fecal microbiota in cats |
| 项目 Items | 对照组 Control group | 试验组 Experimental group | P值 P-value |
|---|---|---|---|
| 第21天 Day 21 | |||
| Chao1指数 Chao1 index | 125.72±5.54 | 150.87±12.13 | 0.075 |
| Shannon指数 Shannon index | 3.84±0.24 | 4.25±0.21 | 0.216 |
| Simpson指数 Simpson index | 0.85±0.02 | 0.89±0.01 | 0.198 |
| 第42天 Day 42 | |||
| Chao1指数 Chao1 index | 138.15±11.34 | 158.69±16.53 | 0.319 |
| Shannon指数 Shannon index | 3.87±0.19 | 4.47±0.28 | 0.093 |
| Simpson指数 Simpson index | 0.84±0.03 | 0.90±0.02 | 0.088 |
2.5.2 粪便微生物β多样性分析
2.5.3 粪便微生物在门水平上相对丰度
表8 粪便微生物中相对丰度具有显著差异的优势菌门和优势菌属Table 8 Dominant phyla and dominant genera with significantly different relative abundances in fecal microbiota% |
| 项目 Items | 对照组 Control group | 试验组 Experimental group | P值 P-value |
|---|---|---|---|
| 门水平 Phylum level | |||
| 第21天 Day 21 | |||
| 梭杆菌门 Fusobacteriota | 4.21±1.48 | 13.60±4.30 | 0.032 |
| 放线菌门 Actinomycetota | 20.54±5.98 | 6.76±1.39 | 0.049 |
| 属水平 Genus level | |||
| 第21天 Day 21 | |||
| 拟杆菌属 Bacteroides | 7.46±3.18 | 18.38±3.81 | 0.041 |
| 第42天 Day 42 | |||
| 梭杆菌属 Fusobacterium | 0.02±0.01 | 2.78±1.19 | 0.045 |
2.5.4 粪便微生物在属水平上相对丰度
2.5.5 粪便微生物线性判别分析效应大小(LEfSe)分析
图4 粪便微生物LEfSe分析g:属 genus;f:科 family;s:种 species;c:纲 class;Ligilactobacillus:联合乳杆菌属;Lactobacillaceae:乳杆菌科;Bacteroidaceae:拟杆菌科;Bacteroides:拟杆菌属;Fusobacterium:梭杆菌属;Tannerellaceae:坦纳菌科;Parabacteroides:副拟杆菌属;Anaerococcus:厌氧球菌属;Marinifilaceae:海丝菌科;Parabacteroides_merdae:粪副拟杆菌;Odoribacter:气味杆菌属;unclassified_Odoribacter:未分类气味杆菌;Butyricimonas:丁酸单胞菌属;Oscillibacter:颤杆菌属;Tyzzerellasp_Marseille_P3062:泰泽氏菌属未定种马赛P3062;unclassified_Sarcina:未分类八叠球菌;Sarcina:八叠球菌属;Actinobacteria:放线菌纲;Catenisphaera:链球形菌属;Chlamydia_trachomatis:沙眼衣原体;Veillonella:韦荣球菌属;Blautia_glucerasea:解葡布劳特氏菌;unclassified_Lachnospiraceae:未分类毛螺菌科;butyrate_producing_bacterium_L2-10:产丁酸菌株L2-10;Family_ⅩⅢ_AD3011_group:ⅩⅢ科AD3011类群;unclassified_Family_ⅩⅢ_AD3011_group:未分类ⅩⅢ科AD3011类群。 Fig.4 LEfSe analysis of fecal microbiota |
2.6 肠道屏障指标、血清免疫指标和粪便微生物属水平相对丰度的相关性分析
图5 Pearson相关性分析“*”:P<0.05;Helicobacter:螺杆菌属;Porphyromonas:卟啉单胞菌属;Gallibacterium:鸡杆菌属;Bacteroides:拟杆菌属;Escherichia:埃希氏菌属;Streptococcus:链球菌属;Methylorubrum:甲基红菌属;Olsenella:奥尔森氏菌属;Corynebacterium:棒状杆菌属;Ligilactobacillus:联合乳杆菌属;Fusobacterium:梭杆菌属;Segatella:塞加氏菌属;Canicola:犬嗜血杆菌属;Peptoniphilus:嗜胨菌属;Staphylococcus:葡萄球菌属;Anaerobiospirillum:厌氧螺菌属;Collinsella:柯林斯菌属;Finegoldia:芬戈尔德菌属;Cetobacterium:鲸杆菌属;Bifidobacterium:双歧杆菌属;LPS:脂多糖 lipopolysaccharide;DAO:二胺氧化酶 damne oxidase;α1-AT:α1-抗胰蛋白酶 alpha-1 antitrypsin;zonulin:连蛋白;I-FABP:肠型脂肪酸结合蛋白 intestinal fatty acid-binding protein;calprotectin:钙卫蛋白;IL-6:白细胞介素-6 interleukin-6;IL-1β:白细胞介素-1β interleukin-1β;TNF-α:肿瘤坏死因子-α tumor necrosis factor-α。 Fig.5 Pearson correlation analysis |
